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不同培养方法对乳腺癌MDA-MB-231细胞DNA甲基化状态的影响
目的：探讨不同细胞培养方法对乳腺癌 MDA-MB-231细胞全基因组DNA甲基化状态的影响，阐明基因组甲基化状态与细胞生长环境的关系及其在肿瘤发生发展中的作用。方法：采用二维（2 D）、三维（3 D）细胞培养模型及小鼠肿瘤细胞原位移植（Ti）模型培养 MDA-MB-231细胞并收集，分别用 DNA提取试剂盒对收集的细胞进行DNA提取，DNA甲基化芯片检测3种模型培养后乳腺癌 MDA-MB-231细胞全基因组 DNA甲基化状态，应用 Genomestudio软件计算每1个基因CpG位点的β值、DiffScore和Delta＿Beta，并在2种模型之间比较，筛选出差异甲基化基因；采用 DAVID在线分析工具对筛选的基因进行 GO和 Pathway分析。结果：3D与2D模型培养的 MDA-MB-231细胞共发现480个差异甲基化基因（P＜0.05），3D与 Ti模型有86448个差异甲基化基因（P＜0.05），Ti与2D模型有90005个差异甲基化基因（P＜0.05）；3D与2D、3D与Ti和Ti与2D模型的差异甲基化基因在多细胞生物体发育和细胞分化条目上有富集（P＜0.05）；亦在 MAPK信号通路、细胞黏附分子和肌动蛋白骨架调节通路上有富集（P＜0.05）。结论：采用2D、3D和 Ti 模型3种方法培养 MDA-MB-231细胞其全基因组DNA甲基化状态存在差异。
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氟对二维和三维培养的成纤维细胞胰岛素样生长因子-1表达的影响
目的 观察不同浓度氟化物在不同时间段对二维(2D)和三维(3D)培养的成纤维细胞胰岛素样生成因子-1(IGF-1)表达的影响,并探讨其在氟化物刺激成纤维细胞成骨功能方面的作用.方法 在2D和3D培养系统中,将成纤维细胞L929分为对照组(F-浓度为0 mg/L)和6个染氟组(F榷度分别为0.000 1、0.001、0.1、1、10和20 mg/L),在不同染氟时间段(2D培养2、4、24、48和72 h,3D培养4、24、48、72和96 h),采用EIJSA法检测细胞培养上清中IGF-1蛋白的含量;免疫组化法(IHC)检测染氟成纤维细胞中IGF-1的表达;RT-PCR法检测染氟成纤维细胞IGF-1基因mRNA的转录水平.结果 染氟可明显刺激成纤维细胞培养上清中IGF-1蛋白的表达;各染氟组成纤维细胞胞浆IGF-1的阳性着色较对照组均明显增强;氟作用48 h,除F浓度为20 mg/L组外,其余各染氟组成纤维细胞IGF-1基因mRNA的转录水平较对照组均有不同程度的增强,但差异均无统计学意义.结论 在2D和3D两种培养条件下,氟化物均叮明显刺激成纤维细胞IGF-1的表达,提示在氟化物诱导成纤维细胞成骨功能增强的过程中,IGF-1可能发挥着重要作用.
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三维培养成骨细胞系统在骨康方含药血清体外干预实验中的应用研究
目的:观察骨康方含药血清对三维培养成骨细胞系统生长繁殖、矿化能力和ER-β mRNA表达的变化,探讨成骨细胞三维培养体系在体外中药干预研究中的应用.方法:体外分离成骨细胞,进行二维培养和三维培养,分别用不同浓度阴性血清培养基和药物血清培养基进行培养,使用MTT法检测成骨细胞的生长情况,茜素红染色法观察成骨细胞矿化能力,RT-PCR法检测ER-β mRNA表达的变化.结果:与二维培养体系比较,骨康含药血清对三维体系下培养的成骨细胞的促增殖作用更加明显；细胞ER-beta的mRNA转录水平显著提高；矿化能力更强.结论:三维培养系统比二维培养系统更有利于细胞功能的保持和发挥,更适合于体外中药干预研究中的作用.
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三维及二维培养大鼠胰腺导管来源干细胞的体外对比实验研究
目的 观察在不同培养模式下大鼠胰腺导管来源干细胞(PDSC)的生物学特性.方法 以大鼠胰腺组织为材料,采用动力性三维培养及传统二维培养方法进行细胞培养,获得原代PDSC,并连续传代,纯化PDSC,比较动力性三维培养及传统二维培养细胞间连接及细胞凋亡周期的差异.结果 动力性三维培养的大鼠PDSC在培养第2天即可沿三维支架贴壁生长,在第7天即可形成细胞团,并沿三维支架多向贴壁生长；二维培养的PDSC在培养第5天贴壁生长.三维培养与二维培养相比,二维培养的细胞间连接少见,三维培养的细胞连接结构丰富.三维培养与二维培养相比,三维培养的G1期细胞增多,G2期细胞相对减少(P＜0.01),三维培养早期自发凋亡细胞比例相对减少(P＜0.05),晚期自发凋亡与坏死细胞比例两种培养方式间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 动力性三维细胞培养较传统二维细胞培养,在细胞贴壁时间、细胞连接以及细胞凋亡方面具有明显的优势.
