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缬草波春诱导MKN-45胃癌细胞凋亡
目的:研究缬草波春诱导胃癌细胞凋亡,探讨其诱导凋亡与半胱氨酸酶(Caspase)及生存素(Survivin)mRNA、P53蛋白、Survivin蛋白表达的关系.方法:以100 mg/L的缬草波春作用于加Caspase-3抑制剂、Caspase-8抑制剂、Caspase-9抑制剂和未加Caspases抑制剂培养的MKN-45细胞24,48和72 h,用流式细胞仪分别检测细胞凋亡率;不同浓度的缬草波春(5,10,25,50,100 mg/L)作用MKN-45细胞不同时间(24,48,72 h)后,用tripure提取液提取细胞RNA,用RT-PCR法,检测Survivin mRNA的表达.不同浓度缬草波春(50和100 mg/L)作用MKN-45胃癌细胞株24 h后,用免疫组化的方法,检测P53蛋白和Survivin蛋白的表达.结果:单用Caspase抑制剂组,作用24,48和72 h对MKN-45细胞凋亡率无明显影响,与对照组比较差异无显著意义.Caspase-3抑制剂、Caspase-9抑制剂与缬草波春联合应用后24,48和72 h使MKN-45细胞凋亡率高于对照组(24 h:5.73%,5.41% vs 4.38%,P＜0.01;48 h:6.88%,6.32% vs 4.35%,P＜0.01;72 h:7.72%,8.62% vs 4.54%,P＜0.01),低于缬草波春组(24 h:5.73%,5.41% vs 8.14%,P＜0.01;48 h:6.88%,6.32% vs 12.31%,P＜0.01;72 h:7.72%,8.62% vs 26.41%,P＜0.01),与对照组及缬草波春组比较差异均有显著意义(P＜0.01).Caspase-8抑制剂与缬草波春联合应用后24,48和72 h MKN-45细胞凋亡率明显增加,与对照组比较差异有显著意义(8.02% vs 4.38%,P＜0.01;11.05% vs 4.35%,P＜0.01;24.86% vs 4.54%,P＜0.01),与单用缬草波春组比较差异无显著意义.缬草波春降低MKN-45胃癌细胞株Survivin mRNA的表达,并有浓度依赖性和时间依赖性,而且使MKN-45胃癌细胞株P53蛋白表达增加,Survivin蛋白表达降低,均有浓度依赖性.结论:缬草波春可诱导MKN-45细胞凋亡,其作用可部分被Caspase-3,Caspase-9抑制剂所抑制,但不能被Caspase-8抑制剂所抑制.缬草波春诱导MKN-45胃癌细胞株凋亡与P53蛋白表达提高及Survivin mRNA和Survivin蛋白低表达降低有关.
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Caspase-1抑制剂对大鼠外伤性脑损伤后脑水肿、神经细胞凋亡和IL-18表达的影响
目的 研究天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)抑制剂对大鼠脑损伤后脑水肿、细胞凋亡和IL-18表达的影响.方法 雄性SD大鼠170只,随机分为正常组、损伤组、治疗组.用改良的Feeney方法制备损伤模型.治疗组分别于损伤前后30 min经右侧脑室注射Caspase-1抑制剂--z-YVAD-fmk.损伤组与治疗组分别于脑损伤后6、24、72、168 h点断头取脑.检测脑组织含水量、Caspase-1与IL-18表达及细胞凋亡.结果 伤后6、24、72及168 h,损伤组脑损伤周围皮质组织含水量、Caspase-1与1L-18的表达及细胞凋亡较正常组明显增多(P<0.05),但伤后6、24及72 h.治疗组脑损伤周围皮质组织含水量、Caspase-1与IL-18的表达及细胞凋亡虽明显高于正常组,但与损伤组相比则明显降低(P<0.05).结论 Caspase-1及其激活的细胞因子IL-18在创伤性脑损伤后脑水肿和细胞凋亡中起重要作用,Caspase-1抑制剂对脑创伤后神经细胞损害具有保护作用.
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Caspase-3抑制剂 z-DEVD-fmk对大鼠脑损伤的保护作用
目的 研究caspase-3抑制剂z-DEVD-fmk对大鼠外伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后神经细胞凋亡、脑含水量影响.方法 分为假手术组、等渗盐水组、抑制剂组,采用改良的Feeney自由落体损伤模型,于损伤前后各30 min右侧脑室注射z-DEVD-fmk或等渗盐水,72 h后,断头取脑,用HE染色及电镜观察形态学变化,用干湿法测量脑含水量,流式细胞(Annexin-V/PIFCM)及末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸缺口术端标记(TUNEL)法检测神经细胞凋亡.结果 在外伤中心区可见大量神经细胞坏死;损伤周围区神经细胞数量减少,出现细胞凋亡的特征,少量细胞出现坏死,等渗盐水组相对于抑制剂组较为明显;假手术组以正常细胞为主.抑制剂组大鼠损伤周围脑组织凋亡细胞数及脑含水量明显高于假手术组;但较等渗盐水组明显减少.结论 大鼠脑损伤后在损伤周围区存在大量神经细胞凋亡;使用z-DEVD-fmk抑制caspase-3活性以后,能减少凋亡、减轻脑水肿,起到脑保护作用.
