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日本血吸虫29000膜外蛋白的表达和纯化及功能初步鉴定
随着血吸虫病防治工作的不断深入及血防形势的改变,血吸虫病流行的特点对本病的诊断提出了更高的要求.因表膜蛋白更易接触机体的免疫系统,刺激机体产生相对应的抗体,大多研究都支持虫体的表膜蛋白较其他蛋白有较好的诊断价值.本课题组将日本血吸虫(Schistosoma japouicam,Sj)中国大陆株29 000表膜蛋白的膜外区基因体外重组并表达,纯化后初步鉴定其免疫原性和免疫反应性,希望可用于日本血吸虫病的免疫诊断和疗效考核.
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日本血吸虫重组22kD表膜蛋白免疫水牛的效果观察
目的用重组日本血吸虫22 kD表膜蛋白(rSj22)免疫水牛,检测特异性IgG抗体的应答水平,并观察抗血吸虫的保护效果.方法用抗原(rSj22)加佐剂(Quil-A)肌肉注射免疫水牛,以1 000条日本血吸虫尾蚴攻击感染,感染后55 d剖杀,计算减虫和减卵率.用免疫印斑和ELISA方法测定抗体反应.结果免疫组每头牛血清均能特异地识别rSj22kD抗原和成虫抗原中的22 kD分子,特异性IgG抗体滴度达1:25 600.与Quil-A对照组相比,减虫率仅8.5%,肝卵EPG减少12.3%,粪卵EPG减少26.8%,但均无统计学意义.结论用rSj22kD抗原免疫水牛诱导的特异性IgG抗体不能发挥免疫保护作用.
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日本血吸虫重组SjTsp2/Sj29 ku蛋白疫苗对小鼠免疫效果的研究
目的探讨日本血吸虫重组Tsp2/Sj29 ku表膜蛋白疫苗对小鼠的抗病免疫效果。方法 pet32a/SjTsp2/Sj29 ku重组菌经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷( IPTG)诱导表达，制备纯化的重组蛋白。29只6周龄雌性昆明鼠随机分为蛋白疫苗组、硫氧还蛋白组和空白对照组，前两组各10只，空白对照组9只。蛋白疫苗组，第一次免疫每鼠经背部皮下多点注射用等体积弗氏完全佐剂乳化的50μg SjTsp2/Sj29 ku重组表膜蛋白，第12、24天每鼠皮下多点再次注射用等体积弗氏不完全佐剂乳化的50μg该重组蛋白。硫氧还蛋白组的免疫方法同蛋白疫苗组。空白对照组用生理盐水代替蛋白，免疫方法同前。末次免疫后第10天，每鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(30±2)条。于感染45 d后剖杀全部实验小鼠，计算减虫率和减卵率。眼眶取血，分离血清，间接性ELISA法检测IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgM抗体亚型，同时检测血清细胞因子γ干扰素( IFN-γ)、白介素4( IL-4)水平。结果 pet32a/SjTsp2/Sj29 ku菌经IPTG诱导可大量表达，经变性、复性获得纯化的日本血吸虫Tsp2/Sj29 ku重组表膜蛋白。蛋白疫苗组与空白对照组比较，减虫率和减卵率显著升高( P<0.05)。硫氧还蛋白组与空白对照组之间比较，减虫率和减卵率差异均无统计学意义( P>0.05)。蛋白疫苗组小鼠血清中IgG1、IgG2a、IgG2b显著高于空白对照组(P<0.05)，而IgG3和IgM较空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白疫苗组小鼠血清IFN-γ、IL-4细胞因子显著高于空白对照组( P<0.01)。结论日本血吸虫 Tsp2/Sj29 ku重组表膜蛋白疫苗对小鼠抗感染有一定的保护性；该重组蛋白免疫引起的是 Th1/Th2混合型免疫反应。
