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食管癌患者外周血N-甲基-D-天冬氨酸受体2B基因异常甲基化水平及其临床意义
缺乏早期诊断和转移监测的特异性指标是食管癌术后复发和转移的高死亡率的关键原因,因此临床上迫切需要寻找取材方便、微创且可实时追踪监测的外周血肿瘤标志.2006年Kim等[1]通过基因启动子区药物处理和芯片表达分析等研究发现,神经氨酸酶受体家族成员--N-甲基-D-天冬氨酸受体2B(NMDAR2B)在食管癌癌组织及其癌细胞系中具有很高的异常甲基化率;启动子甲基化是该基因失活的主要原因,且与肿瘤细胞凋亡抑制相关.为此,我们对食管癌癌组织,特别是外周血NMDAR2B的异常甲基化情况进行了检测分析.以探讨其作为食管癌复发和预后监测指标的临床应用价值.
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力竭运动对大鼠前额叶皮层小清蛋白阳性神经元及NMDAR2B表达的影响
目的:通过观察力竭运动后大鼠前额叶皮层小清蛋白(parvalbumin,PV)阳性神经元的表达变化,探讨运动疲劳对前额叶皮层神经微环路可塑性的影响,同时观察前额叶皮层N-甲基-D-天门冬氨酸受体NR2B亚型(N-methyl-D-aspartatereceptor NR2B subunit,NMDAR2B)表达的变化,进一步探讨运动疲劳中枢调节的可能机制.方法:雄性Wistar大鼠36只随机分为一次力竭运动组、重复力竭运动组和对照组.力竭运动方案采用本实验室改进的Bedford渐增负荷动物运动方案:Ⅰ级:8.2 m/min,15 min;Ⅱ级:15 m/min,15 min;Ⅲ级:20 m/min,至力竭,重复力竭运动组连续进行7天力竭性跑台运动,在运动力竭后采用免疫荧光染色技术观察大鼠前额叶皮层PV阳性神经元的表达情况,并记录阳性细胞个数.采用免疫荧光染色技术和免疫印迹法检测前额叶皮层NMDAR2B的表达情况.结果:一次力竭运动组及重复力竭运动组大鼠前额叶皮层PV阳性神经元个数较对照组显著增加(P＜0.01).免疫荧光染色结果显示,前额叶皮层NMDAR2B阳性神经元在对照组和重复力竭运动组未见明显表达,一次力竭运动组可见阳性神经元表达;Westem blot结果显示,与对照组相比,一次力竭运动组NMDAR2B表达相对较高,而重复力竭运动组表达相对较低,但均无显著性差异(P＞0.05);NMDAR2B表达与运动距离呈显著负相关(P＜0.01,r =-0.936).结论:力竭运动通过PV阳性神经元的局部环路的调节影响大鼠前额叶皮层神经网络的可塑性,其参与了运动疲劳的中枢调节,为运动疲劳中枢机制研究提供了形态学基础.
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噪声暴露对大鼠事件相关电位P300的影响及其海马水平的机制
目的:研究噪声暴露对大鼠事件相关电位(ERP)的影响及海马水平的机制.方法:雄性SD大鼠,随机均分为正常对照组(C组)、噪声暴露组(N组).暴露条件:105 dB白噪声2.5 h/d×20 d.观察试验过程中第0、7、14和20 d ERP各波的峰潜伏期以及峰峰幅度值,并检测海马神经元尼氏体、NMDAR2B及胞内钙浓度的变化.结果:在实验第14 d、第20 d,噪声暴露组动物EEP P3a、P3和P13b的峰潜伏期显著增长,而且在噪声暴露20 d后,大鼠海马齿状回以及CA1区尼氏体显著减少(P＜0.01),齿状回、CA1及CA3区NMDAR2B的免疫反应强度显著降低(P＜0.01),神经元胞内钙浓度显著升高(P＜0.01).结论:噪声暴露可致事件相关电位的改变,这可能与其海马神经元尼氏体、NMDAR2B以及胞内钙的变化有关.
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丙泊酚对老年大鼠认知功能及大脑海马CA1区NMDAR2B表达的影响
目的:通过观察丙泊酚麻醉对老年大鼠学习记忆影响以及海马CA1区NMDAR2B表达的变化,探讨丙泊酚对术后认知功能障碍(postoperative cognitive dysfunction,POCD)的影响.方法:雄性SD老年大鼠随机分为对照组、丙泊酚组,每组20只.丙泊酚组给予50 mg·kg-1丙泊酚腹腔麻醉,对照组给予相同剂量的乳剂,麻醉后1 d进行Morris水迷宫测试,结束后采集大鼠海马,采用免疫荧光和FISH技术检测海马CA1区NMDAR2B蛋白表达及基因转录的变化.结果:Morris水迷宫结果:丙泊酚组与对照组相比潜伏时间明显延长,穿越次数明显减少.免疫荧光结果:丙泊酚组与对照组比较NMDAR2B表达明显下降.FISH结果:丙泊酚组与对照组比较NMDAR2B表达明显下降.结论:丙泊酚麻醉引起老年大鼠短期认知功能障碍,其机制可能与海马CA1区NMDAR2B表达下调有关.
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逍遥散对慢性束缚应激大鼠相关脑区NMDAR2A和NMDAR2BmRNA基因表达的调节作用
目的:观察海马及杏仁核N-甲基D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid(NMDA)受体NMDAR2A(NR2A)和NMDAR2B(NR2B)的蛋白在束缚应激状态下的mRNA表达变化及道遥散的作用.方法:使用捆绑的方法制作束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7天后和21天后检测模型大鼠海马CAI区、CA3区、齿状回(DG)、杏仁核NMDA受体NMDAR2A和NMDAR2B的蛋白mRNA表达的情况.结果:NR2AmRNA和NR2BmRNA在海马的CA1,CA3,DG和BLA都有不同程度的基因转录.NR2AmRNA在CA3,DG和BLA区,7天和21天模型组的表达均下调(P<0.05和P<0.01),在CA1区不明显.NR2BmRNA在CA1,CA3,DG和BLA区,21天模型组的表达均下调(P<0.05和P<0.01),在CA1和BLA区7天模型组表迭不变.逍遥散对CA3和DG区的NR2AmRNA和NR2BmRNA有明显的调节作用,在CA3和DG区7天和21天的表达均上调(P<0.05和P<0.01).而在CA1区对NR2AmRNA和NR2BmRNA没有调节作用.其中以CA3区和DG区的调节作用明显,这里可能是逍遥散的调节靶点.结论:逍遥散在海马和杏仁核区对慢性束缚应激引起的神经传递的改变有明显的双向调节作用,可以影响突触可塑性,以适应机体的功能,主要靶点在CA3和DC区.
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癫痫清颗粒对戊四唑点燃癫痫大鼠行为学及脑内NMDAR2B、c-fos表达的影响
目的:观察癫痫清颗粒对戊四唑点燃癫痫大鼠行为学及脑内NMDAR2B和c-fos表达的影响,探讨其抗癫痫的作用机理.方法:腹腔注射戊四唑建立癫痫大鼠点燃模型,连续灌胃给药30 d后,观察癫痫清颗粒对大鼠行为学及脑组织NMDAR2B和c-fos的影响.结果:癫痫清颗粒可延长癫痫大鼠惊厥潜伏期,缩短惊厥持续时间,减少组织NMDAR2B和c-fos的表达.结论:癫痫清颗粒对戊四唑点燃大鼠模型具有抗癫痫作用,作用机制与减少脑内NMDAR2B和c-fos的表达有关.
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海人酸致痫大鼠海马NMDAR2B及ERK1/2蛋白表达的变化
目的 通过研究海人酸致痫大鼠海马NMDAR2B及ERK1/2蛋白表达的变化,为进一步探明癫痫脑损伤的机制奠定基础.方法 采用在立体定位仪下,将海人酸注射至大鼠杏仁核的方法制备癫痫模型.将大鼠随机分为正常对照组,假手术组及致痫组,分别于不同时间取材,应用免疫组化的方法观察脑组织NMDAR2B蛋白及ERK1/2蛋白表达的变化.结果 正常海马各区均有极少量的NMDAR2B阳性细胞分布,海人酸致痫组后2h大鼠海马各区NMDAR2B表达迅速增加,6h达高峰,并持续至至癫痫后24h(P＜0.01),ERK1/2蛋白致痫后半小时表达开始增高,3h达高峰,后开始下降,6h后恢复到致<痫前的水平(P＜0.01).结论 NMDAR2B参与了癫痫发生和癫痫脑的长时程的兴奋过程,ERK1/2短时程参与了癫痫的发生过程.
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人参石菖蒲药对对睡眠剥夺大鼠海马IL-6R、NMDAR影响的实验研究
目的 探索人参-石菖蒲水煎液增强睡眠剥夺大鼠记忆功能的机制.方法 将动物分为正常对照组、睡眠剥夺组和中药干预组,通过多平台水环境法制作失眠动物模型,运用ELISA法检测大鼠海马组织中IL-6和IL-6R的表达,免疫印迹法检测大鼠海马组织中NMDAR2B的表达,对相应脑组织采用免疫荧光标记观测.结果 ①睡眠剥夺组较正常对照组GFAP和NEUN表达显著下调(P＜0.001),药物干预组则比睡眠剥夺组表达上升(P ＜0.001);②与正常对照组相比,睡眠剥夺组大鼠血液中IL-6和IL-6R均上升,且差异极显著(P＜0.001),同时药物干预组低于睡眠剥夺组,且差异极显著(P＜0.001);③NMDAR2B蛋白表达结果进行灰度分析,药物干预组与实验组以及正常组与实验组之间的差异均为极显著(P＜0.001).结论 人参-石菖蒲水煎液能够抑制睡眠剥夺带来的脑部炎性反应,防止睡眠剥夺引起的脑神经细胞损伤,可能通过提高睡眠剥夺动物海马NMDAR2B的表达来增强记忆力.
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逍遥散对大鼠慢性束缚应激脑区NMDAR2A和NMDAR2B蛋白的调节作用
目的 观察海马及杏仁核NMDAR2A和2B蛋白在束缚应激状态下蛋白表达变化及逍遥散的调节作用.方法 采用每天捆绑3 h的方法制作慢性束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7 d后和21 d后用Westem blot方法检测各组大鼠海马CA1区、CA3区、齿状回(DG)和杏仁核的NMDAR2A和2B蛋白表达的情况.结果 在分离的4个部位(CA1,CA3,DG和杏仁棱),发现NR2A和NR2B分子在其中都有表达.NR2A的表达:在CA3和DG区,7 d和21 d模型组的表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05和P<0.01),逍遥散组的表达升高,差异具有统计学意义(P<0.05和P<0.01).NR2B的表述情况和NR2A基本一致.结论 逍遥散对NR2A和NR2B有明显的调节作用,在海马的CA3和DG区明显,对7 d和21 d的应激模型都有不同程度的改变作用,以维持机体原来的平衡状态.提示逍遥散对神经突触性的改变有生理性保护作用.
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CASK在癫痫大鼠模型中影响癫痫发作的机制研究
目的 探讨钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(CASK)在氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠模型中不同时间点的表达及其参与癫痫发作的可能机制. 方法 30只SD大鼠按照随机数字表法分为对照组(n=5)和实验组(n=25),实验组在点燃后进一步按照随机数字表法分为1、3、7、14、30d5组(n=5).通过免疫组化、免疫荧光和Western blotting实验分别检测CASK在模型鼠海马组织中的表达变化.另将21只成年健康SD大鼠按照随机数字表法分为3组(n=7),分别为转染组、空病毒组、对照组,水合氯醛麻醉3组大鼠后分别注入等量的CASK-RNAi-LV、LV-scrRNAi和生理盐水,点燃1h内观察此3组大鼠行为学的改变,同时运用Western blotting检测转染组与对照组大鼠CASK复合物下游分子NMDAR2b在点燃后的表达. 结果 (1)免疫组化及荧光染色结果提示,CASK仅在神经元中表达,在神经胶质细胞中不表达;实验组CASK阳性细胞数明显多于对照组;且CASK在癫痫大鼠的海马组织中表达模式为1d降至低,后逐渐增高,直到30 d.(2)转染模型相关实验结果提示,转染组(CASK表达被抑制)大鼠癫痫发作频率和发作级别(发作20 min后)均较空病毒组及对照组大鼠明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).对照组大鼠NMDAR2b在点燃1d后开始增高,3d达到高峰,10d下降;而转染组大鼠NMDAR2b在点燃后各个时间点的表达水平较对照组大鼠均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 CASK在癫痫大鼠中的表达量明显增加,可能通过NMDAR2b途径影响癫痫的发生与发展.
关键词： 钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶 NMDAR2B 癫痫 突触 慢病毒 -
上调脑内脑衰反应调节蛋白2的表达促进了脑缺血再灌注大鼠神经再生
目的 探讨脑衰反应调节蛋白2(collapsin response mediator protein 2,CRMP2)对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经元丢失及神经再生的影响及其可能的机制.方法 将60只成年雄性SD大鼠分成4组:假手术组(sham)、脑缺血/再灌注组(MCAO)、脑缺血+质粒对照组(MCAO+ GFP)、脑缺血+CRMP2真核表达质粒组(MCAO+ CRMP2).将质粒注射人各组大鼠脑内,ld后建立大鼠大脑中动脉缺血(middle cerebral artery occlusion,MCAO)/再灌注模型,术后5～7d腹腔注射5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-ethinyl deoxidization uracil nucleoside-2’,Edu),免疫荧光检测各组大鼠MAP2、GFAP、Edu标记细胞的阳性率及Nestin/Edu双标记阳性细胞的表达;采用Western blot检测CRMP2、脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)及N-甲基-D-天冬氨酸受体2B(N-methyl-D-aspartate receptor2B,NMDAR2B)的表达;免疫组化检测CRMP2的表达及其神经功能评分.结果 与sham组相比,脑缺血再灌损伤使MAP2表达降低(P＜O.05),GFAP表达增高(P＜0.05),同时促进了Edu标记阳性细胞[(62.00±7.65)、(62.60±7.06)]及Nestin/Edu标记阳性细胞[(31.60 ±5.50)、(31.60 ±5.40)]的表达(P＜0.05).而CRMP2真核质粒干预之后降低了GFAP的表达(P＜0.05),且升高了MAP2的表达(P＜0.05),还进一步促进了Edu标记阳性细胞(100.20 ±11.52)及Nestin/Edu标记阳性细胞(57.20±4.80)的表达(P＜0.05).与sham组相比,MCAO及MCAO+ GFP组BDNF及NMDAR2B的表达明显升高(P＜0.05);经CRMP2真核质粒干预后,BDNF表达进一步增高(P＜0.05),NMDAR2B的表达被部分削弱(P＜0.05).CRMP2真核质粒干预后神经功能评分较MCAO及MCAO+GFP组明显改善(P＜0.05).结论 CRMP2减少了大鼠脑缺血再灌注损伤后神经元的丢失;促进了大鼠脑缺血再灌注损伤后内源性神经干细胞的增殖,而其对BDNF及NMDAR2B的调节可能是其作用机制的一部分.
