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串联质谱检测干血滤纸片多种溶酶体酶活性方法的建立
目的：建立串联质谱法测定干血滤纸片中半乳糖神经酰胺酶（ GALC）、酸性α-葡萄糖苷酶（ GAA）、α-半乳糖苷酶（ GLA）、α-L-艾杜糖苷酸酶（ IDUA）活性。方法方法学建立。收集2013年7月、11月在上海市新华医院新生儿筛查中心进行遗传代谢性疾病筛查的2175份干血滤纸片标本和2012年9月至2014年1月在新华医院儿科就诊的20例溶酶体贮积病（ lysosomal storage disorders，LSDs）患儿干血滤纸片样本。干血滤纸片提取液与酶底物及内标孵育后，经液液和固相萃取，氮气吹干，复溶后串联质谱分析酶反应产物和内标，计算酶活性。评价方法的线性、精密度、准确度和低检测限；检测2175份新生儿-干血滤纸片样本，0.5～99.5百分位数法确立4种酶活性参考区间；同时检测20例LSDs患儿干血滤纸片样本进行临床验证。结果酶活性测定批内和批间精密度为1.7％～11.8％，批内和批间准确度为85％～115％，产物和内标实测浓度比值与添加的理论浓度比值线性系数为0.997～0.999。 GALC、GAA、GLA和IDUA的低检测限分别为0.03μmol／（ L· h）、0.09μmol／（L· h），0.12μmol／（L· h），0.16μmol／（L· h）；初步确定新生儿酶活性参考区间分别为GALC[0.51～8.51μmol／（L· h）]，GAA[1.99～22.22μmol／（L· h）]，GLA[1.68～41.59μmol／（L· h）]，IDUA [2.36～19.21μmol／（L· h）]；20例LSDs患儿酶活性明显低于参考区间，串联质谱法能有效检出Krabbe、Pompe、Fabry、MPSⅠ患儿。结论成功建立了串联质谱法检测干血滤纸片中GALC、GAA、GLA、IDUA活性。（中华检验医学杂志，2016，39：761-765）
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我国粘多糖贮积症IH型患者α-L艾杜糖苷酶基因的一种同义突变
目的:探讨我国粘多糖贮积症IH型(MPS-IH)患者α-L艾杜糖苷酶(IDUA)基因的突变类型.方法:采用荧光分光光度计检测临床疑似MPS患者及其家属白细胞中IDUA活性;对IDUA活性为零的患者及其家属扩增其IDUA基因外显子VII并对其进行单链构象多态(SSCP)分析;根据SSCP结果进行基因序列分析.结果:酶学检查发现10例MPS-IH型患者,其白细胞中IDUA活性均为0; SSCP分析发现在这10个MPS-IH家系中有7个家系出现同一种泳动变位;基因序列分析结果显示这7个MPS-IH家系均出现一种同义突变,该突变在正常人群中未检测到.结论:我国MPS-IH型患者IDUA基因外显子VII出现一种高发的同义突变.
