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常见异常血红蛋白对4种离子交换高效液相色谱法检测糖化血红蛋白的影响
目的 评价常见的7种异常血红蛋白对4种离子交换高效液相色谱法检测糖化血红蛋白的影响.方法 收集2017年1月至2018年2月北京大学深圳医院检验科糖化血红蛋白检测过程中发现的异常血红蛋白全血样本95份.采用毛细管电泳法(Sebia Capillary 2 Flex Piercing)和4种离子交换高效液相色谱法(Bio-Rad D-10,Arkray HA8180V,Tosoh G8,以及MQ6000 Plus)测定全血样本,检测常见的7种异常血红蛋白(Hb E、Hb New York、Hb J-Bangkok、Hb G-Coushatta、Hb G-Taipei、Hb Q-Thailand、以及Hb G-Honolulu),以毛细管电泳法作为参比方法,分析7种异常血红蛋白对4种离子交换高效液相色谱法检测糖化血红蛋白结果 的影响.统计分析采用SPSS 19.0软件,计算异常血红蛋白样本的平均偏倚,并用箱式图来显示偏倚分布.结果4种离子交换高效液相色谱法都不能分离异常血红蛋白Hb New York,但对糖化血红蛋白检测结果的影响均在临床可接受范围内.D-10能够识别6种异常血红蛋白,Hb J-Bangkok、Hb G-Coushatta和Hb G-Taipei干扰D-10的糖化血红蛋白结果.HA8180V快速模式未给出Hb J-Bangkok、Hb G-Coushatta、Hb G-Taipei的结果,Hb E、Hb Q-Thailand和Hb G-Honolulu的结果出现显著负偏.G8标准模式识别1种异常血红蛋白,6种异常血红蛋白结果出现显著负偏.MQ6000 Plus能够分离6种异常血红蛋白,Hb G-Coushatta、Hb G-Taipei的结果出现显著负偏.结论 常见异常血红蛋白对某些离子交换高效液相色谱法产生干扰,可导致糖化血红蛋白结果错误.
关键词： 糖化血红蛋白 异常血红蛋白 毛细管电泳法 离子交换高效液相色谱法 -
硼酸盐亲和色谱法测定HbA1c效果评价
目的 探讨使用硼酸盐亲和色谱法测定HbA1c的效果. 方法 采集46例糖尿病患者和20名健康体检者EDTA抗凝静脉血及指血标本,使用硼酸盐亲和色谱法测定HbA1c,并与Bio-Rad D-10糖化血红蛋白分析仪的测定结果进行对比,分析该法批内、批间变异及线性范围、回收试验、干扰试验等,探讨该法测定HbA1c结果的参考区间和诊断效能. 结果 硼酸盐亲和色谱法批内与批间平均变异系数分别为1.0％和1.8％,HbA1c在4.0％～15.0％浓度范围内呈线性关系；常见干扰物对本法无明显影响；本法与离子交换高效液相色谱法(HPLC)测定结果呈高度相关(P＜0.01).末稍血与静脉血样本测定结果具有一致性.健康人HbA1c水平的参考区间为4.2％～6.0％；以HbA1c 6.1％为切点,筛查糖尿病的敏感性为80.2％,特异性为87.6％. 结论 硼酸盐亲和色谱法测定HbA1c简便实用,准确性、精密度较高,干扰因素少.
关键词： 硼酸盐亲和色谱法 糖化血红蛋白 离子交换高效液相色谱法 -
对4个HbA1c测定系统的精密度和正确度验证
目的 验证4个HbA1c测定系统的正确度、精密度,以判断是否符合相关要求,为临床实验室的使用提供相关依据.方法 采用一种简便的实验方案,在5d内,对3个基于离子交换高效液相色谱法和1个基于免疫比浊法原理的HbA1c测定系统进行精密度和正确度验证实验,计算各个系统的批内精密度、实验室内精密度及测定结果的正确度.结果 4个系统的批内精密度CV为0.26％～1.02％,实验室内精密度CV为0.28％～1.50％;4个系统测定标准物质的均值[美国国家HbA1 c标准化计划( NGSP)值]和标准物质定值的偏倚为-0.34％ HbA1 c～0.41％HbA1c,与国际临床化学与检验医学联合会( IFCC)定值导出的NGSP值的偏倚为-0.14％ HbA1 c～0.60％HbA1 c.结论 4个系统的批内精密度和实验室内精密度及正确度性能符合相关要求,能满足临床工作的需要.
关键词： 糖尿病 糖化血红蛋白 免疫比浊法 离子交换高效液相色谱法 -
对α地中海贫血Hb H病糖化血红蛋白不同检测方法结果的分析
目的 研究α地中海贫血Hb H病(Hb H)对3种HbA1c常规检测方法结果的分析.方法 分别采用亲和层析高效液相色谱法(AC-HPLC)、离子交换高效液相色谱法(IE-HPLC)和免疫抑制比浊法(TINIA)检测Hb H病患者的HbA1c,采用毛细管电泳(CAPILLARYS 2,Sebia)对血红蛋白进行分析,跨越缺口PCR检测α地中海贫血基因常见缺失型,PCR-反向斑点杂交法检测常见α地中海贫血基因点突变,确定Hb H基因类型. 结果 15例Hb H样本毛细管电泳测出Hb H含量为2.5％～16.5％,7例基因型是--sEA/αCSα,4例基因型是-SEA/-α3.7,4例基因型是-SEA/-α4.2.AC-HPLC、IE-HPLC、TINIA法检测HbA1c,分别为(4.52±0.66)％、(3.45±0.44)％和(3.72±0.26)％,AC-HPLC法与其他两组比较,差异有统计学意义(F=19.85,P=0.000).不同Hb H含量样本3种HbA1c检测方法比较,差异无统计学意义(t=0.386,P=0.706;t=0.255,P=0.802;t=0.276,P=0.787).不同基因型组样本AC-HPLC、IE-HPLC法测定HbA1c,差异有统计学意义(F=6.341,P=0.013;F=6.765,P=0.011);TINIA法测定,差异无统计学意义(F=0.036,P=0.965). 结论 Hb H对不同检测方法测定HbA1c干扰程度不同,用HbA1c诊断或监测Hb H的血糖状态时,实验室应选择合适的测定方法,谨慎出具报告.
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三种方法测定糖化血红蛋白的一致性和可靠性分析
目的 探讨微粒色谱法、亲和层析法与高效液相色谱(HPLC)法测定糖化血红蛋白(GHb)的一致性和可靠性.方法 选取2014年6～9月在解放军总医院第一附属医院门诊及住院治疗的137例糖尿病患者为研究对象,空腹抽取双份全血标本.利用微粒色谱法、亲和层析法及HPLC法分别测定糖化血红蛋白A1(HbA1c),每份标本测定2次.将入组的137例糖尿病患者参照HPLC法测定的HbA1c为金标准分为3组:第1组HbA1c含量≤6.5％;第2组6.5％＜HbA1c含量＜7.5％;第3组HbA1c含量≥7.5％,分析各组人群采用的3种不同检测方法组间差异是否有统计学意义.以Bio-Rad D10 HPLC测定的GHb为目标系统,以微粒色谱法和亲和层析法为试验系统,建立回归方程,分析试验系统与目标系统检测结果的偏差程度.结果 3种方法测定HbA1c值组内比较差异无统计学意义(P＞0.05);回归分析显示,微粒色谱法与HPLC法所测的HbA1c值呈良好的线性关系,Y=1.006 X+ 0.213,相关指数r2=0.885;层析法与HPLC法测定结果亦呈良好的线性关系,y=0.923 X+0.338,相关指数r2=0.917;对于不同的糖尿病人群,3种方法检测结果亦呈现良好的相关性.结论 微粒色谱法和亲和层析法均能为临床提供与HPLC法所测糖化血红蛋白偏差较小的可靠数据,检验结果可被临床接受.微粒色谱法操作简单、快速,可为临床快速诊断提供方便.
关键词： 糖化血红蛋白 离子交换高效液相色谱法 微粒色谱法 亲和层析法 -
两种检测系统测定糖化血红蛋白相关性分析及偏倚评估
目的:比较两种检测系统测定糖化血红蛋白(HbA1c)结果的差异并评价其偏倚.方法:分别使用Bio-Rad D-10糖化血红蛋白分析仪应用全自动离子交换高效液相色谱(HPLC)法、Roche Cobas INTEGRA400 Plus全自动生化分析仪以免疫法测定HbA1c,对40例血液样本作比对测定,评估两检测系统之间测定结果的相关性和偏倚；应用高低两个水平质控品分别测定两种检测系统的不精密度.结果:两种检测系统测定糖化血红蛋白的结果有良好的相关性(P＜0.01),HPLC的总不精密度＜2.0％,免疫法总不精密度接近4.0％,符合临床测定的性能要求.以D-10 HPLC为参考检测系统,Roche免疫法测定结果的相对偏倚分别为0.03％.结论:D-10 HPLC法和Roche免疫法测定糖化血红蛋白的准确度、精密度和偏倚符合临床要求,Roche免疫法测定HbA1c结果变异系数较大,应以HPLC法作为参考检测系统定期作比对分析.
关键词： 离子交换高效液相色谱法 免疫法 糖化血红蛋白 -
拜安时与D10糖化血红蛋白测定仪的临床实用性比较
目的:比较新型糖化血红蛋白测定仪拜安时与D10糖化血红蛋白测定仪的临床实用性.方法:选取郑州大学人民医院2013年1月至6月住院糖尿病患者及非糖尿病志愿者共99例(HbAlc:5％～13％),按照HbAlc分成A、B、C共3组,同一观察对象的同一标本分别用拜安时及D10测定HbAlc并进行比较.标本来源分别为末梢血、静脉血.结果:末梢血结果:拜安时与D1O结果相近,变异系数＜5％,差异无统计学意义(P＞0.05);静脉血结果:拜安时与D10结果相比差值较大,变异系数较高,差异有统计学意义(P＜0.05).而随着糖化值逐渐增高,无论是取静脉血或末梢血,变异百分比均呈增大趋势.结论:以D10测定结果为对照,拜安时取末梢血测定HbAlc结果比取静脉血测定HbAlc准确可靠.
关键词： 糖化血红蛋白分析仪 离子交换高效液相色谱法 免疫法 -
宜宾市健康体检人群中空腹血糖异常者糖化血红蛋白结果分析
目的：观察离子交换高效液相色谱法（HPLC）检测糖化血红蛋白（HbA1c）在诊断2型糖尿病的灵敏度和特异性。方法在1074例体检人群中选择空腹血糖大于6.1 mmol/L的的患者作OGTT试验，以OGTT结果作为诊断DM的标准，评价HPLC法检测HbA1c在诊断糖尿病的价值。结果1074例体检人群中FPG＞6.1 mmol/L者共297例，其中高危195例，占18.1%，2型糖尿病102例，占9.4%；以HbA1c≥6.5%为切点，其灵敏度为89.2%，特异性为93.3%，阳性似然比为13.38，阴性似然比为0.11。结论 HPLC法测定HbA1c诊断2型糖尿病的切点为6.5%，此时诊断的灵敏度为89.2%，特异性为93.3%。
关键词： 糖化血红蛋白 糖尿病 离子交换高效液相色谱法 -
糖化血红蛋白两种测定方法的比较
目的 探讨免疫抑制透射比浊法(TINIA)和离子交换高效液相色谱法(HPLC)测定糖化血红蛋白(HbAlc)的相关性及其临床应用.方法 根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)实验评价方案进行精密度、线性、方法比对及偏倚实验,结果采用回归方程和t检验进行统计分析.结果 HbAlc浓度在3.9％～15.2％范围时无论是TINIA还是HPLC法,都有良好的重复性和线性关系,但以HPLC法更佳.偏倚对比分析显示在高水平TINIA与HPLC成负偏倚,低水平时成正偏倚.在方法比对实验中的两组数据没有统计学意义(P＞0.05),以TINIA测定结果为Y轴、HPLC的为X轴进行相关性分析:y=0.7857x+1.264,r =0.89两者呈正相关.结论 通过方法学评价,本实验室两种方法测定HbAlc的精密度、线性范围符合临床要求,结果具有可比性；HPLC法的重复性更佳、更适合临床用于糖尿病的治疗监测.
关键词： 糖化血红蛋白 免疫抑制透射比浊法 离子交换高效液相色谱法 -
两种糖化血红蛋白检测方法的应用评价
目的：探讨离子交换高效液相色谱法（HPLC）与胶乳凝集法检测糖化血红蛋白的可比性及结果一致性。方法使用离子交换高效液相色谱法与胶乳凝集法分别测定糖化血红蛋白，对结果进行分析比较。结果 HPLC法与胶乳凝集法的结果差异无统计学意义（P＞0．05），两种方法批内及批间变异系数（CV）均小于3％，两种方法相关性良好（r＝0．985）。结论 HPLC和胶乳凝集法两种检测方法的结果具有可比性，均能满足临床需要。
关键词： 糖化血红蛋白 离子交换高效液相色谱法 胶乳凝集法 方法比对 -
高效液相色谱法与酶法检测糖化血红蛋白结果一致性的比较
近年来，随着人们生活水平的提高糖尿病的发病率越来越高，预计到2025年全世界糖尿病患者将达3亿人[1]．糖化血红蛋白（HbA1c）是血红蛋白与糖类经非酶促反应结合而成的，其合成过程缓慢且相对不可逆．因此可反映机体1～2月前的平均血糖水平，在糖尿病的监测、治疗方面具有重要意义．2002年美国糖尿病协会（ADA）将其作为监测糖尿病血糖控制的金标准，2010年ADA发布的糖尿病诊疗指南中以HbA1c≥6.5％作为耱尿病的诊断标准[2]．目前HbAlc主要的测定方法有离子交换高效液相色谱法（HDLC）、免疫法及近年新发展的-酶法．为了解酶法与 HDLC 法HbA1c测定结果的一致性，笔者依据美国临床实验室标准化协会（CLSI）《用患者样本进行方法学对比及偏差估计EP9-A2指南文件》（EP9-A2），对HPLC和酶法两种HbAlc检测结果进行了对比分析和偏倚评估，现报道如下．
关键词： 糖化血红蛋白 离子交换高效液相色谱法 酶法 -
离子交换高效液相色谱法（HPLC）测定HBA1C
目的：应用离子交换高效液相色谱法（HPLC）对人全血糖化血红蛋白A1C（HBA1C）的自动化和准确的测定。方法应用 D-10糖化血红蛋白台式测定仪测定，EDTA抗凝静脉全血被自动稀释后注入分析柱。仪器测定系统将预先编程设置的由低到高离子浓度的缓冲液注入系统，在这一过程中，血红蛋白经和分析柱中偶联离子结合的程度大小达到分离，处理好的样本自动被注入分析通路，分离的血红蛋白随后在流经光感测量计时，测量其在415nm的光吸收情况，D-10糖化血红蛋白测定系统临床数据处理软件（CDM）将每次分析过程中收集到的数据还原。此间还要经过两个水平的计算。通过微积分计算得出分析结果和分析图谱，面积计算使用了指数模式的高斯对数（EMG），这样计算已经排除了可变部分的血红蛋白A1C和氨基甲酰血红蛋白等干扰成分。 D-10糖化血红蛋白测定系统可人全血管中自动吸取样本，随后进行稀释和分析，每个样本3min内可完成测定。结果该法测定线性范围3.9%~18.5%，批内变异系数0.48%~0.81%，小于2%，批间变异系数1.65%~2.35%，小于5%。结论该法简便、快速、精准，适用于临床实验室测HBA1C水平。
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2种糖化血红蛋白检测方法的比对和结果一致性评价
目的 探讨离子交换高效液相色谱法(HPLC)与亲和层析法检测糖化血红蛋白的可比性及结果一致性.方法 参照美国临床实验室标准化协会(NCCLS)EP9-A2文件设计方法,对io_Rad D10全自动糖化血红蛋白仪分析仪的所用的离子交换高效液相色谱法(HPLC)与ultra2糖化血红蛋白分析系统亲和层析法进行比对试验,以HPLC方法为目标系统,亲和层析法为试验系统,建立回归方程,以医学决定水平作为自变量(Xc)计算预期偏倚和相对偏倚,以临床实验室改进规范 (CLIA′88) 规定的室间质量评价允许误差范围的1/2为标准,判断不同检测系统的偏差于临床是否可以接受.结果 HPLC法和亲和层析法批内及批间RSD%均<3%,相关回归分析Y=0.935 4X+0.483,R2=0.982 6,两种方法在4.8%、6.1%、11.1%3个医学决定水平的相对偏倚分别为1.1%(3.7%),2.0%(6.8%),2.6%(9.1%).结论 HPLC和亲和层析法两种检测方法的结果具有可比性,两者之间的偏差临床可接受,可为临床提供可接受的HbA1c检验结果.
关键词： 糖化血红蛋白 离子交换高效液相色谱法 亲和层析法 方法比对 -
用IE-HPLC、PAGE分析合成的硫代寡核苷酸相关物质"n-1"、"n-2"和"n-3"
目的:分析合成的n=20-mer硫代寡核苷酸中相关物质"n-1"、"n-2"和"n-3"杂质失败序列.方法:离子交换高效液相色谱(IE-HPLC)法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE).色谱柱为Gen-PakTMFAX离子交换柱(4.6 mm×100 mm),流动相A为62.5 mmol*L-1三羟甲基氨基甲烷盐酸(Tris*Cl),pH 8.15,流动相B为62.5 mmol*L-1 Tris*Cl,pH 8.15,2.5 mol*L-1 LiCl,流动相C为100%乙腈;梯度洗脱条件为B:30%→50% 30 min,C:恒为20%;流速为0.75 mL*min-1;检测波长为260 nm.PAGE分析采用20%变性聚丙烯酰胺凝胶,恒定功率25 W进行电泳.结果:IE-HPLC分离纯化出3种相关物质,通过PAGE印证了它们是由于合成偶联不完全而产生的n-1、n-2和n-3的杂质失败序列.结论:所用离子交换高效液相色谱法能将合成的硫代寡核苷酸中相关物质"n-1"、"n-2"和"n-3"杂质失败序列与全序列n一一分离出来,对硫代寡核苷酸的纯化和分析具有重要的参考价值.
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RP-HPLC法定量测定枸橼酸离子含量
目的:建立定量测定含枸橼酸盐和蔗糖的血液制品或干热法病毒灭活中间制品中枸橼酸离子含量的高效液相分析方法,并与中国药典2005年版三部枸橼酸离子测定第二法进行比较.方法:采用RP-C18色谱柱以磷酸盐缓冲液作为流动相,以5 mmol·L-1枸橼酸离子溶液做回收率和精密度分析.选择5种共20个批次仅含枸橼酸盐不含有蔗糖的血液制品,按2005年版中国药典枸橼酸离子测定第二法平行分析,比较两者一致性.结果:RP-HPLC法枸橼酸离子保留时间大约在5min,其5次进样保留时间RSD%(n=5)为0.0,峰面积RSD%(n=5)为0.1,实验所测枸橼酸离子标准回收率大于99.0%.标准曲线线性相关系数r大于0.999.RP-HPLC法与IEC-HPLC法平行检测20个批次制品的枸橼酸离子含量,统计学结果显示2种方法相关系数r为0.9994,两者无显著差异(P>0.05).结论:RP-HPLC法的准确性和精密度良好,与2005年版中国药典三部第二法结果一致并可规避其缺点,适用于含枸橼酸盐和蔗糖的血液制品及干热病毒灭活中间制品的枸橼酸离子含量分析,也可用于检测常规血液制品,可以作为2005年版中国药典枸橼酸离子测定的补充方法.
关键词： 枸橼酸离子 血液制品 反相高效液相色谱法 离子交换高效液相色谱法 干热病毒灭活
