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高效液相色谱法定量测定人纤维蛋白原中蔗糖含量
目的 建立定量测定人纤维蛋白原中蔗糖含量的HPLC分析方法,对2010年版《中国药典》相关测定方法进行有益补充.方法 采用Waters Alliance系统、Waters 2414示差折光检测器、安捷伦Zorbax Carbohydrate Analysis色谱柱,以ACN-H2O(70∶ 30)作为流动相,流速1.4 mL·min-1,柱温30 ℃测定人纤维蛋白原中的蔗糖.并用该方法平行测定13批含有蔗糖的重组人凝血因子Ⅷ,与药典IEC-HPLC方法进行方法学比较.结果 HPLC测定蔗糖对照品的保留时间RSD (n=6)为0.17％,峰面积RSD (n =6)为0.09％.蔗糖在低(5 mg· mL-1)、中(10 mg·mL-1)、高(15 mg· mL-1)3个质量浓度的回收率分别为96.2％,98.8％,100.3％,平均回收率为98.4％.蔗糖在2～20 mg·mL-1(r=1.000 0)内与峰面积呈良好的线性关系.2批人纤维蛋白原中的蔗糖含量分别为48.8,45.0g·L-1,均符合其40～ 60 g·L-1的质量范围.平行测定的13批重组人凝血因子Ⅷ的蔗糖结果与药典IEC-HPLC测定结果的相关系数r为1.000 0,两种方法无显著性差异(P＞0.05).结论 新建HPLC测定蔗糖含量方法的准确性和精密度良好,能够规避药典IEC-HPLC色谱条件下枸橼酸和蔗糖互相干扰的问题,本法可以适用于干热病毒灭活条件下人纤维蛋白原中蔗糖检测.
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RP-HPLC法定量测定枸橼酸离子含量
目的:建立定量测定含枸橼酸盐和蔗糖的血液制品或干热法病毒灭活中间制品中枸橼酸离子含量的高效液相分析方法,并与中国药典2005年版三部枸橼酸离子测定第二法进行比较.方法:采用RP-C18色谱柱以磷酸盐缓冲液作为流动相,以5 mmol·L-1枸橼酸离子溶液做回收率和精密度分析.选择5种共20个批次仅含枸橼酸盐不含有蔗糖的血液制品,按2005年版中国药典枸橼酸离子测定第二法平行分析,比较两者一致性.结果:RP-HPLC法枸橼酸离子保留时间大约在5min,其5次进样保留时间RSD%(n=5)为0.0,峰面积RSD%(n=5)为0.1,实验所测枸橼酸离子标准回收率大于99.0%.标准曲线线性相关系数r大于0.999.RP-HPLC法与IEC-HPLC法平行检测20个批次制品的枸橼酸离子含量,统计学结果显示2种方法相关系数r为0.9994,两者无显著差异(P>0.05).结论:RP-HPLC法的准确性和精密度良好,与2005年版中国药典三部第二法结果一致并可规避其缺点,适用于含枸橼酸盐和蔗糖的血液制品及干热病毒灭活中间制品的枸橼酸离子含量分析,也可用于检测常规血液制品,可以作为2005年版中国药典枸橼酸离子测定的补充方法.
关键词： 枸橼酸离子 血液制品 反相高效液相色谱法 离子交换高效液相色谱法 干热病毒灭活
