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延胡索乙素分别与URB597和URB602联合应用对CCI大鼠镇痛作用的研究
目的:观察延胡索乙素(levo-tetrahydropalmatine,L-THP)分别与脂肪酸酰胺水解酶(fatty acid amide hydrolase,FAAH)、单酰甘油脂肪酶(monoacylglycerol lipase,MAGL)特异性抑制剂URB597、URB602分别联合应用对坐骨神经慢性压迫损伤(chronic constriction injury,CCI)所致大鼠神经病理性疼痛的影响.方法:成年健康雄性Wistar大鼠30只,体重180～220 g,随机分为5组(n=6):假手术组、CCI组、延胡索乙素CCI组、延胡索乙素URB597 CCI组、延胡索乙素URB602 CCI组.假手术组仅暴露坐骨神经但不结扎,其余组均暴露并结扎坐骨神经.术毕即刻,延胡索乙素CCI组、延胡索乙素URB597 CCI组和延胡索乙素URB602 CCI组腹腔注射延胡索乙素40 mg/(kg·d),连续14 d;假手术组和CCI组给予等量生理盐水.术后11d开始,延胡索乙素URB597 CCI组、延胡索乙素URB602 CCI组手术切口局部分别注射URB597、URB602 0.3 mg/(kg·d),连续4d,假手术组、CCI组、延胡索乙素CCI组注射等量生理盐水.于术前1d、术后3d、7d、11d、12d、13d、14d测试各组大鼠机械痛阈(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热痛阈(thermal withdrawal latency,TWL).结果:与术前和假手术组比较,CCI组、延胡索乙素CCI组、延胡索乙素URB597 CCI组和延胡索乙素URB602 CCI组大鼠,术后3d开始各时间点机械痛阈和热痛阈显著降低(P＜0.05);与CCI组比较,延胡索乙素CCI组、延胡索乙素URB597 CCI组和延胡索乙素URB602 CCI组大鼠术后3d、7d、11d、12d、13d、14d机械痛阈和热痛阈显著提高(P＜0.05);与延胡索乙素CCI组比较,延胡索乙素URB597 CCI组、延胡索乙素URB602 CCI组大鼠,术后11d、12d、13d、14 d机械痛阈和热痛阈明显提高(P＜0.05);与延胡索乙素URB597 CCI组比较,延胡索乙素URB602 CCI组大鼠各时间点机械痛阈和热痛阈无显著性差异(P＞0.05).结论:在CCI大鼠模型中,延胡索乙素可以产生良好的镇痛作用,当分别与URB597、URB602合用时可以增强其镇痛作用.
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脂肪酸酰胺水解酶抑制剂URB597诱导人肝癌细胞MHCC97H凋亡的作用及其机制研究
目的:观察脂肪酸酰胺水解酶(fatty acid amide hydrolase,FAAH)抑制剂URB597诱导人肝癌高转移细胞MHCC97H凋亡的作用,并探讨其机制.方法:给予不同浓度(1、5、10μmol/L) URB597与MHCC97H孵育,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率.采用蛋白质印迹技术检测凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)在细胞核中的水平,及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达水平.采用caspase 3试剂盒检测caspase 3的活性变化.结果:(1)不同浓度(1、5、10 μmol/L)URB597作用细胞1、4、7d后,凋亡细胞数目明显增加,呈时间-剂量依赖性;(2)不同浓度URB597作用96 h后细胞内caspase3活性明显升高,且细胞核中AIF水平显著增加;(3)10 μmol/L URB597作用细胞96 h后,与对照组相比,Bcl-2水平明显下调,Bax水平明显上调,Bcl-2/Bax比值显著下降.PI3K抑制剂LY294002亦可显著降低Bcl-2/Bax比值,但与10 μmol/LURB597作用相比,对Bcl-2/Bax比值的影响程度较低.结论:URB597可通过促进入肝癌细胞凋亡抑制其增殖,该作用与其下调Bcl-2/Bax比值,影响线粒体通透性,诱导caspase依赖和非caspase依赖的细胞凋亡有关,且部分依赖于PI3K/Akt通路.
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脂肪酸酰胺水解酶抑制剂URB597对人肝癌细胞MHCC97H生长和侵袭的抑制作用及机制研究
目的:观察脂肪酸酰胺水解酶抑制剂URB597对人肝癌高转移细胞MHCC97H细胞生长和侵袭性的抑制作用.方法:不同浓度URB597(1、5、10 μmol/L)作用于MHCC97H细胞后不同时间,应用MTT法及流式细胞仪检测该种细胞生长活力及凋亡细胞数目的改变;应用Transwell实验检测该种细胞的运动能力及侵袭能力;应用蛋白质印迹法检测该种细胞内磷酸化Akt(p-Akt)和Akt表达量的变化.结果:上述3种浓度的URB597作用于该种细胞3～7d后,细胞活力明显降低,呈时间及剂量依赖性;10 μmol/L URB597作用3～7 d可显著增加凋亡细胞数目.URB597作用于细胞48 h后,与对照组比较,5、10 μmol/L URB597可显著抑制MHCC97H细胞侵袭能力(P＜0.01,P＜0.001).3种浓度URB597作用于细胞24 h后,5、10 μmol/L URB597可显著下调细胞内p-Akt水平(P＜0.05,P＜0.01).结论:URB597对体外生长的人肝癌细胞MHCC97H的生长和侵袭有明显抑制作用,该作用可能与其抑制磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt信号通路有关.
关键词： 脂肪酸酰胺水解酶抑制剂 URB597 肝肿瘤 PI3K/Akt信号通路
