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柯里拉京对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响
目的:研究柯里拉京对转移性人肝癌细胞SMMC7721,MHCC97H增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其作用机制.方法:分别通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,划痕实验,transwell实验检测不同浓度的柯里拉京对肝癌细胞SMMC7721,MHCC97H的增殖、迁移和侵袭的作用;通过细胞免疫荧光法观察不同浓度柯里拉京对肝癌细胞SMMC7721,MHCC97H肌动蛋白纤维的分布、丝状和片状伪足形成等的影响;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)研究柯里拉京抑制肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用机制.结果:MTT实验显示,柯里拉京抑制人肝癌细胞SMMC7721,MHCC97H增殖的半数抑制浓度(IC50)分别为388.67,314.42 μmol·L-1.划痕实验显示,200 μmol·L-柯里拉京对SMMC7721细胞迁移的抑制作用强,迁移率为12.16％;120 μmol·L-1柯里拉京对MHCC97H细胞迁移的抑制作用强,迁移率为9.84％.Transwell实验显示,200 μmol·L-柯里拉京对SMMC7721细胞和MHCC97H细胞侵袭的抑制作用强,侵袭的细胞数分别为(40.44±3.01),(36.69±3.36)个.细胞免疫荧光显示,柯里拉京可使SMCC7771,MHCC97H中F-肌动蛋白(F-actin)骨架发生重塑,浓度增高,细胞边缘的丝状伪足和片状伪足形成逐渐减少、张力纤维数目逐渐增多,这种影响在SMMC7721为200 μmol·L-1时显著,MHCC97H为120 μmol·L-1明显.Western blot显示,柯里拉京能明显下调肝癌细胞SMMC7721和MHCC97H上皮-间充质转分化(EMT)的钙黏附蛋白-N (N-Cad)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达(P＜0.05),下调有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的磷酸化-细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白表达(P＜0.05),上调磷酸化-p38(p-p38)蛋白表达(P＜0.05).结论:柯里拉京能抑制2种人肝癌细胞SMMC7721,MHCC97H的增殖、迁移及侵袭,其作用机制可能是通过抑制EMT通路中的N-Cad,Vimentin,MAPK信号通路p-ERK蛋白表达和上调p-p38蛋白表达,从而调控细胞骨架重塑来实现的.
关键词： 柯里拉京 肝癌细胞SMMC7721 肝癌细胞MHCC97H 增殖 迁移 侵袭 -
脂肪酸酰胺水解酶抑制剂URB597诱导人肝癌细胞MHCC97H凋亡的作用及其机制研究
目的:观察脂肪酸酰胺水解酶(fatty acid amide hydrolase,FAAH)抑制剂URB597诱导人肝癌高转移细胞MHCC97H凋亡的作用,并探讨其机制.方法:给予不同浓度(1、5、10μmol/L) URB597与MHCC97H孵育,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率.采用蛋白质印迹技术检测凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)在细胞核中的水平,及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达水平.采用caspase 3试剂盒检测caspase 3的活性变化.结果:(1)不同浓度(1、5、10 μmol/L)URB597作用细胞1、4、7d后,凋亡细胞数目明显增加,呈时间-剂量依赖性;(2)不同浓度URB597作用96 h后细胞内caspase3活性明显升高,且细胞核中AIF水平显著增加;(3)10 μmol/L URB597作用细胞96 h后,与对照组相比,Bcl-2水平明显下调,Bax水平明显上调,Bcl-2/Bax比值显著下降.PI3K抑制剂LY294002亦可显著降低Bcl-2/Bax比值,但与10 μmol/LURB597作用相比,对Bcl-2/Bax比值的影响程度较低.结论:URB597可通过促进入肝癌细胞凋亡抑制其增殖,该作用与其下调Bcl-2/Bax比值,影响线粒体通透性,诱导caspase依赖和非caspase依赖的细胞凋亡有关,且部分依赖于PI3K/Akt通路.
