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超声分子成像对小鼠肾脏急性微血管炎症的可视性评价
目的 应用超声分子成像技术可视性评价小鼠肾脏急性微血管炎症.方法 缺血再灌注处理制备小鼠肾急性微血管炎症模型 (IR组,6只)及肾假手术处理模型(SH组,6只),所有实验小鼠均经静脉随机(间隔30 min)弹丸注射携带抗小鼠P-选择素单抗靶向超声微泡(MBp)、同型对照抗体超声微泡(MBc)及普通脂质超声微泡(MB),10 min后行肾对比超声(CEU)检查,测量肾脏显影的声强度(VI).并采用平行板流动腔技术在微血管生理血流条件下体外评价MBp的靶向黏附效能.结果 在缺血再灌注肾,MBp呈显著的超声显影,而MBc和MB呈轻度的超声显影;3种超声微泡在假手术肾均无明显的超声显影.MBp的VI值在缺血再灌注肾较假手术肾明显增大(P<0.05),同时较MBc和MB在缺血再灌注肾的VI值也都明显增大(P<0.05);而MBc及MB在缺血再灌注肾的VI值较各自假手术肾轻度增大(P<0.05).在微血管生理血流剪切应力环境下MBp可与小鼠P-选择素Fc段(PSFc)实现有效的靶向性特异结合.结论 超声分子成像技术可对肾脏急性微血管炎症进行有效的可视性评价,该技术将可用于可视性评价微血管炎症或相关的血管内皮反应.MBp在微血管生理血流条件下具有良好的靶向黏附效能.
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携抗白细胞介素-2受体α单抗靶向超声微泡黏附效能的体内外评价
目的 构建小鼠携抗白细胞介素-2受体α(IL-2Rα)单抗靶向超声微泡(MBIL-2Rα)及体内外评价其靶向黏附效能.方法 采用"亲和素-生物素"桥连法构建携带荧光FITC的MBIL-2Rα和普通超声微泡(MB).首先利用平行板流动腔体外评价在不同时间点、不同浓度小鼠IL-2Rα包被下MBIL-2Rα结合数目.然后,分别随机经静脉将MBIL-2Rα和MB弹丸式注入对照组(10只)和TNF-α处理组(10只)的小鼠提睾肌炎症模型.同时,200倍荧光显微镜直视下观察并记录5 min内两组中不同微泡在提睾肌微血管中的黏附数量和黏附情况.结果 体外结果显示,MBIL-2Rα结合数量随着IL-2Rα包被浓度的增高而增加(P<0.05),并与结合时间呈明显相关(P<0.05);体内荧光显微镜下TNF-α处理组MBIL-2Rα黏附数量[(4.6±1.1)个/200倍视野)]明显高于MB黏附数量[(3.0±0.7)个/200倍视野](P<0.05);且TNF-α处理组MBIL-2Rα黏附数量分别为对照组MBIL-2Rα和MB黏附数量的(2.8±0.8)和(3.7±1.4)倍(P<0.01).结论 MBIL-2Rα可与IL-2Rα特异、有效地结合,其高效黏附性能将有助于进一步对移植排斥反应的靶向超声分子显影.
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靶向超声微泡MBICAM-1的制备及靶向实验研究
目的 制备载抗ICAM-1(细胞间黏附分子-1)的靶向超声微泡MBICAM1,鉴定制备微泡的基本性质,研究其在体内及体外的靶向能力.方法 通过“生物素-亲和素”桥接法将抗ICAM-1结合到生物素化脂质微泡,制成MBICAM1;检测制备微泡的浓度、粒径,观察微泡的形态;检测抗ICAM-1与微泡的结合率;ICAM-1质粒转染Hela细胞,观察转染后的Hela细胞与MBICAM-1结合,验证MBICAM-1体外靶向功能;制备家兔左侧跟腱炎症模型,用制备的微泡对家兔双侧跟腱行造影检查,验证MBICAM-1体内靶向能力.结果 三种微泡平均粒径1.00～2.4 μm,浓度2.4×108～1010/ml;微泡的形态完整、规则,分布较匀;微泡和抗ICAM-1单抗的平均结合率为(86.5±5.3)％.MBICAM-1环绕在转染后的Hela细胞周围.MBICAM-1对家兔左侧跟腱造影呈高增强.结论 采用“生物素-亲和素”桥接法可制备MBICAM-1;MBICAM-1在体外、体内均具有靶向功能.
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在生理血流条件下靶向超声微泡对P-选择素的靶向黏附效能
目的 平行板流动腔评价在生理血流条件下携抗小鼠P-选择素单抗靶向超声微泡(MBp)的靶向黏附效能.方法 采用"亲和素-生物素"桥接法构建MBp;在3种浓度(10、100和1000 ng/ml)小鼠P-选择素Fc段(PSFc)包被的平行板流动腔和固定剪切应力下,以及大包被浓度和不同剪切应力(0.2～1.7 dyn/cm2)下分别检测MBp的每分钟结合数量(结合率),以抗小鼠P-选择素单抗封闭组和空白组为对照.在3种包被浓度下检测MBp达半数解离的剪切应力.所有分组样本数均为3.结果 两对照组均未见有明显的MBp结合.实验组MBp结合率随包被浓度的增高而增加(P<0.05),然而与剪切应力呈现双向性(P<0.05).MBp达半数解离的剪切应力随包被浓度的增加而增大(P<0.05).结论 MBp在生理条件下可与PSFc特异有效地结合,体外对靶向超声微泡的靶向黏附效能评价将有助于判定超声分子成像的效果和靶向微泡的在体应用环境条件.
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携带抗P-选择素单抗靶向微泡和对比超声评价肾缺血再灌注损伤
目的 探讨携带抗小鼠P-选择素单抗的靶向超声微泡(MBp)和对比超声(CEU)评价肾缺血再灌注损伤的可行性.方法 12只实验小鼠随机均分为2组:缺血再灌注 (IR组)和假手术组(SH组),应用"亲和素-生物素"桥连法构建MBp.所有小鼠分别随机(间隔30 min)经静脉弹丸注射给予普通脂质微泡(MB)和MBp,10 min后行肾CEU检查,测量肾显影的声强度(VI),后进行肾组织免疫组化检测.结果 第一帧CEU图像显示MBp及MB在IR组缺血再灌注肾分别可见显著及轻度的超声显影,而两者在SH组假手术肾均无明显的超声显影.VI值在IR组MBp较IR组MB及SH组MBp均明显增大(P<0.05);而在IR组MB较SH组MB轻度增大(P<0.05).免疫组化检测显示缺血再灌注肾血管内皮P-选择素表达较假手术肾明显增加.结论 应用MBp行CEU检查可有效评价小鼠肾缺血再灌注损伤,将可用于评价微血管炎症或相关的血管内皮反应.
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亲和素桥连构建携抗P-选择素单抗靶向超声微泡及体外荧光鉴定
目的 体外荧光方法鉴定生物素-亲和素-生物素(BSB)桥连技术构建携带抗P-选择素单抗靶向超声微泡(MB-BSBp)的町靠性.方法 不同荧光标记物分别标记MB-BSBp的不同部位,观测微泡荧光强度(0、1、2和3级),以普通脂质超声微泡(MB)作对照.结果 加入FITC荧光亲和素孵育,生物紊化脂质微泡(MB-B)呈现明亮的绿色荧光(3级),而MB无荧光显示(0级).以两个浓度梯度(1:4和1:16)的DTAF荧光二抗(抗抗P-选择素单抗抗体)标记MB、MB-B、MB-BS和MB-BSBp,MB-BSBp在两个浓度梯度下均发出明亮的绿色荧光(3级);而MB-B、MB-BS仅在1:4时显示微弱的绿色荧光(1级),MB在两个浓度梯度下均无荧光显示(0级).结论 抗P-选择素单抗通过亲和素桥连有效装配在MB-B表面,体外荧光法是鉴定靶向微泡配体连接可靠性的简便方法.
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靶向超声分子成像评价血管新生的研究进展
靶向超声分子成像技术~([1])是指将带有特定配体的靶向超声微泡经静脉注入体内,通过配体与受体结合的方式,使超声微泡选择性地聚集于靶组织或靶器官,并通过对比超声检查产生靶组织细胞水平、分子水平显影的一种新兴的成像技术.该技术标志着超声影像学从非特异性的物理成像向特异性的靶向分子成像的转变,是当今世界研究的热点之一,本文就应用靶向超声分子成像评价血管新生的相关进展作一简述和探讨.
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携带抗白细胞介素-2受体α单抗靶向超声微泡和对比超声结合评价肾缺血-再灌注损伤
目的 探讨携带抗白细胞介素-2受体α(IL-2Rα)单抗靶向超声微泡和对比超声结合评价肾缺血再灌注损伤(IRI)的可行性.材料与方法 采用"亲和素-生物素"桥接法构建携抗IL-2Rα靶向超声微泡(MBIL-2Rα)和携同型抗体对照微泡(MB).10只左肾缺血50min的小鼠,再灌注24h后,随机先后注入MBIL-2Rα和MB(间隔30min),分别于注入5min后行对比超声检查,并测量肾的声强度(Ⅵ).结果 对比超声图像显示MBIL-2Rα组左肾造影显著增强,Ⅵ值高达21.6±4.8U,而在MB组左肾仅见轻度造影增强,Ⅵ值为9.7±2.9U,两组间差异有统计学意义(P<0.05).但无论是MBIL-2Rα组还是MB组左肾Ⅵ值均明显高于右侧肾脏Ⅵ值(3.8±1.5U,3.7±1.7U,P<0.05).两组右侧肾脏之间Ⅵ值未见明显差异.结论 MBIL-2Rα和对比超声相结合能够有效评价肾IRI,从而对肾移植后的排斥反应提供有价值的信息.
关键词： 超声造影 靶向超声微泡 再灌注损伤 白细胞介素2受体α亚单位 -
靶向超声微泡靶点和配体的研究进展
靶向超声分子成像技术[1]是利用超声微泡表面的固有生物学特性或将靶向病变组织特定分子的特异配体连接于微泡外壳构建成靶向超声微泡,并采用对比超声产生靶组织分子水平显影的一种新兴的超声成像技术.
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靶向超声微泡在卵巢癌诊断治疗中的研究进展
卵巢癌病死率居妇科恶性肿瘤之首,因其发病隐匿,80%患者就诊时已属中晚期,因此,对其早期诊断是提高患者生存率的关键因素之一.靶向超声分子显像为早期定性、定位诊断卵巢癌提供了可能.纳米级微泡造影剂具有血管穿透力强和聚集显像特点.将特异性抗体或配体连接到微泡表面,构建出肿瘤靶向性微泡造影剂,当这种造影剂进入体内后,通过配体与受体结合,就能选择性聚集并较长时间驻留于靶组织和器官,从而产生分子水平显像,显著提高了超声对早期病变组织的检测能力.包裹治疗基因、药物的靶向造影剂被超声破坏后,在靶部位释放治疗基因、药物,实现主动和被动靶向,从而提高治疗效果.
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靶向超声微泡在肿瘤诊断与治疗领域的研究进展
近年来靶向超声微泡在肿瘤诊断和治疗方面的研究进展十分迅速.实验研究表明,靶向超声微泡用于评价肿瘤血管新生和肿瘤血管内皮分子的变化,具有无创性的优势,并且能够大大提高肿瘤诊断的准确性.同时,靶向超声微泡作为一种新的基因或药物运载的有效工具,通过携带基因和药物对肿瘤组织实现靶向性释放,介导肿瘤细胞坏死、凋亡以及肿瘤微血管的栓塞和阻断,从而起到靶向治疗的作用.
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载STEAP-1抗体前列腺癌靶向超声微泡的制备及体外寻靶实验研究
目的:采用生物素-亲和素法制备载前列腺跨膜上皮抗原-1(STEAP-1)抗体的靶向超声微泡,检测其结合率、稳定性及体外寻靶能力.方法:(1)体外培养人前列腺癌细胞LNCaP和PC3;(2)采用生物素-亲和素法将STEAP-1抗体与普通声诺维微泡结合,显微镜下观察靶向微泡荧光情况,通过流式细胞术检测其结合率与稳定性;(3)检测所制备的靶向微泡体外结合能力.结果:(1)荧光显微镜下两种前列腺癌细胞表面均发出绿色荧光,即呈阳性表达;蛋白免疫印迹实验结果显示,LNCaP细胞中STEAP-1呈相对高水平表达.(2)载STEAP-1抗体靶向微泡涂片后荧光显微镜下观察,微泡表面呈现环状绿色荧光,普通对照组镜下视野丢失;流式细胞术检测显示,所制备的靶向微泡大小均一,结合率明显高于对照组(P<0.05),振荡后结合率略小于振荡前,但差异无统计学意义(P>0.05). (3)靶向微泡与前列腺癌细胞孵育反应后出现微泡向细胞区域聚集的现象;靶向微泡于细胞周边呈花环状黏附,LNCaP细胞的黏附率高于PC3细胞(P<0.05);两种细胞的前、后黏附率比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论:(1)STEAP-1蛋白在人前列腺癌细胞LN-CaP和PC3中均呈阳性表达,且前列腺癌分化早期代表细胞株LNCaP 细胞呈相对高水平表达;(2)载STEAP-1抗体的靶向微泡可经生物素-亲和素法制备,STEAP-1 抗体与普通微泡的结合率高且稳定性好;(3)载STEAP-1抗体靶向微泡体外寻靶可与人前列腺癌细胞牢固结合,且LNCaP细胞较PC3细胞结合率高.
关键词： 前列腺跨膜上皮抗原-1 靶向超声微泡 前列腺癌 生物素-亲和素 -
应用琼脂糖流动腔模型评价携αvβ3-整合素单抗超声微泡靶向血栓效能
目的 体外评价携αvβ3-整合素单抗超声微泡(MBp)靶向血栓的黏附效能.方法 将采用"亲和素-生物素"桥接法构建的MBp和同型对照微泡(MB)随机注入自制琼脂糖流动腔模型内,与人血栓孵育30 nun后.PBS液15 cm/s流速不间断冲洗血栓,分别在冲洗血栓2、4、6、8、10 min时行对比超声检查并测量声强度(VI)值.结果 MBp孵育组血栓VI值较冲洗前减小了28%～66%,而对照MB孵育组血栓VI值减小了87%～94%.VI值在各时间点MBP组均较MB组大(P<0.05).结论 MBp具有较好的靶向结合血栓效能,靶向血栓黏附后能抵抗一定的剪切应力.体外模拟体内剪切应力血流环境评价MBp的靶向血栓黏附效能将有助于预测MBp应用于体内血栓超声分子成像的效果.
