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戊型肝炎病毒新潜在中和性表位的发现
目的 探讨戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白是否存在除主要免疫优势中和表位aa459～606以外的其他中和表位.方法 通过对几株单克隆抗体及其表位的性质进行分析,对比位于主要免疫优势表位区aM59～606和位于该表位N端序列aa394～458区域的数个表位的中和活性.结果 发现位于aa423～437的表位对应的单抗具有潜在中和活性,不同于已知的HEV中和性表位(aa459～606),该表位是一个线性非免疫优势表位.结论 HEV ORF2 aa423～437为新的潜在的线性非免疫优势中和表位,该发现丰富了对HEV衣壳结构的认识,为HEV预防与治疗提供了新的针对靶点.
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戊型肝炎病毒衣壳蛋白特异性人源单克隆抗体的筛选与鉴定
目的:建立从外周血快速筛选戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)衣壳蛋白特异性人源抗体的方法,从疫苗免疫者外周血中筛选出相应抗体并进行鉴定.方法:采用分选型流式细胞仪获得外周血中HEV衣壳蛋白特异性的记忆B细胞,通过单细胞RT-PCR的方法获得抗体序列,并进行重组表达,后对获得的人源单克隆抗体进行初步性质鉴定.结果:成功筛选到识别HEV衣壳蛋白的6株人源单克隆抗体,6株抗体均具有抗原结合活性,4株抗体具有中和活性.结论:成功获得HEV衣壳蛋白特异性人源单克隆抗体序列,并进行真核表达,对抗体的性质进行初步鉴定,为后期研究疫苗免疫的人体内的抗体演化打下基础.
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Grp78/Bip介导戊型肝炎病毒衣壳蛋白对宿主细胞的吸附
目的 探讨Grp78/Bip在戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白进入宿主细胞过程中的作用.方法 采用pull-down和免疫共沉淀技术进一步验证p239与Grp78/Bip的相互作用;采用激光共聚焦显微镜技术检测p239与细胞膜表面Grp78/Bip共定位情况;采用原核表达纯化的Grp78/Bip蛋白封闭p239的Grp78/Bip结合位点,检测其阻断p239吸附细胞的效果.结果 p239与Grp78/Bip可以直接结合,而且这种结合是可逆的生理性结合;p239与Grp78/Bip在细胞膜上存在部分共定位;Grp78/Bip能部分阻断p239对肝细胞的吸附.结论 Grp78/Bip参与并介导HEV衣壳蛋白对宿主细胞的吸附.
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作为基因转移载体的乙肝病毒衣壳的制备及其功能的初步鉴定
目的:构建具有肝脏靶向性的乙型肝炎病毒衣壳基因转移载体.方法:采用PEG 8 000病毒浓缩法提取HepG 2.2.15细胞上清液中的乙型肝炎病毒,用β-丙内酯法制备乙型肝炎病毒衣壳,用它包裹5.3kb的绿色荧光蛋白质粒以测试其装载能力,并用ELISA法、PCR法、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、透射电镜等对它进行定量、定性研究,后将其转染HepG 2细胞,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况,通过流式细胞仪检测细胞发光率.结果:制备的乙型肝炎病毒衣壳载体保留病毒衣壳的表面蛋白HBsAg+pre S1+pre S2,无病毒DNA;该载体对绿色荧光蛋白质粒较高装载容量,装载绿色荧光蛋白质粒后在肝癌细胞中有很高的转移效率,并能实现高表达.结论:采用PEG 8 000病毒浓缩法、β-丙内酯法可从HepG2.2.15细胞上清液中制备乙型肝炎病毒衣壳基因转移载体,该载体具有良好的生物学功能.
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江门株诺如病毒重组鉴定及分析
目的:对诺如病毒(norovirus,NoV)NoV/Jiangmen056/2006/china和NoV/Jiangmen380/2006/china株进行重组鉴定分析.方法:用JV12Y/JV13I、COG2F/GⅡ SKR、JV12Y/GⅡ SKR三对引物对NoV基因组不同区域分别进行RT-PCR,PCR产物纯化回收、测序,利用Clustal X、MEGA4.1、SimPlot3.5.1软件分析其基因序列.结果:NoV/Jiangmen056/2006/china株由Lordsdal株的RdRp区和Mexico株的capsid区重组而成,而NoV/Jiangmen380/2006/china株由NLV/VannesL169/2000株的RdRp区和SaKaeo-53株的capsid区重组而成.结论:Nov/Jiangmen056/2006/china和NoV/Jiangmen380/2006/china是两种不同型别NoV重组株,而后者是国内首次检出的新型G Ⅱ.b NoV重组株,上述结果丰富了我国重组NoV的研究资料.
关键词： 诺罗病毒 重组 RNA依赖RNA聚合酶 衣壳 开放阅读框架
