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脂氧素A4通过抑制Jurkat T细胞钙池操纵的钙通道电流而抑制其激活和增殖
目的 通过研究脂氧素A4(LXA4)对Jurkat T细胞内游离钙离子浓度变化、钙池操纵的钙通道电流(Isoc)及细胞激活和增殖的影响,初步探讨其对T细胞的调节作用及机制.方法 钙离子荧光探针 Fluo-3/AM负载细胞后,用激光共聚焦扫描显微镜技术动态检测活细胞内游离钙离子浓度的变化;全细胞膜片钳技术记录Isoc;ELISA测IL-2水平;3H-TdR掺入法测细胞增殖情况,并结合流式细胞仪进行细胞周期分析.结果 (1)用含钙细胞外液时,LXA4降低正常Jurkat T细胞内游离钙离子浓度,而用无钙细胞外液时则无显著差异;(2)IXA4呈剂量依赖性抑制钙池操纵的钙通道(SOC)激活剂thapsigargin(TG)引起Jurkat T细胞内游离钙浓度的增高,100 nmol/L LXA4也能抑制anti-CD3或植物血凝素(PHA)引起的细胞内钙离子浓度的增高,SOC阻滞剂2-aminoethoxydiphenylborate(2-APB)能显著抑制TG引起的钙内流;(3)膜片钳结果显示,LXA,抑制正常Jurkat T细胞Isoc,TG能显著增大Isoc,而LXA,呈剂量依赖性抑制,TG引起的Isoc的升高;(4)LXA4剂量依赖性抑制anti-CD3和anti-CD28诱导的Jurkat T细胞IL-2表达及细胞增殖,细胞周期分析发现LXA4阻止Jurkat T细胞由G1期进入S期,降低S期细胞比例.结论 LXA4可能通过抑制Jurkat T细胞Isoc引起的胞质内游离钙离子浓度的升高而抑制其激活和增殖.
关键词： 脂氧素A4 Jurkat T细胞 钙池操纵的钙通道 膜片钳 细胞激活和增殖 -
脂氧素A4对小鼠巨噬细胞钙池操纵的钙通道及活性氧的影响
目的 研究脂氧素A4对LPS诱导的小鼠RAW 264.7巨噬细胞钙池操纵的钙通道活化及活性氧产生的影响,探讨脂氧素A4保护内毒素性肺损伤的具体机制.方法 小鼠RAW 264.7巨噬细胞,随机分为对照组、LPS组、Thapsigargin组、脂氧素A4+LPs组、脂氧素A4+Thaosigargin组、2-Aminoethoxydiphenylborate+Thapsigargin组.采用细胞内钙离子特异性荧光探针Fluo3/AM和活性氧特异性荧光探针DCFH-DA标记小鼠巨噬细胞.激光共聚焦显微镜动态观察巨噬细胞游离钙浓度变化,流式细胞仪测定活性氧产生变化.结果 脂多糖呈剂量依赖升高细胞内游离钙浓度和活性氧的产生.脂氧素A4抑制脂多糖引起的钙内流(抑制率为93%),脂氧素A4同时可抑制Thapsigargin激活钙池操纵的钙通道引起的钙内流(抑制率为75%).脂多糖诱导巨噬细胞产生大量活性氧(阳性细胞百分比为28.87%±4.5%),脂氧素A4抑制脂多糖诱导巨噬细胞产生活性氧(阳性细胞百分比11.16%±2.5%,P<0.05).结论 脂多糖通过促进内钙释放而开放钙池操纵的钙通道,大量细胞外钙内流引起钙超载,活性氧大量产生,组织细胞损伤.脂氧素A4可能通过抑制钙池操纵的钙通道,使外钙内流减少,保持细胞钙稳态,减少活性氧的生成而起到抗炎促炎症消退作用.
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钙池操纵的Ca2+通道对人肝癌细胞增殖的影响
目的:对比研究人肝癌细胞与人正常肝细胞的钙池操纵的Ca2+通道(store-operated Ca2+channel,SOC)功能改变,探讨SOC对肝癌细胞增殖能力的影响.方法:培养人肝癌细胞(SMMC7721)与人正常肝细胞(HL-7702),应用膜片钳技术检测两组细胞的细胞膜SOC电流,应用激光共聚焦显微镜检测两组细胞的细胞内游离Ca2+离子浓度,应用MTT法检测两组细胞的增殖能力,应用流式细胞仪检测两组细胞的增殖周期.结果:人肝癌细胞的SOC电流密度为19.36 pA/pF±4.9 pA/pF,明显高于人正常肝细胞的电流密度8.90 pA/pF±2.78 pA/pF;人肝癌细胞的细胞内钙荧光强度增加31.81％±8.89％,明显高于人正常肝细胞的21.58％±6.01％; MTT生长曲线显示从第3天开始,人肝癌细胞的增殖能力明显高于人正常肝细胞,且时间越长,增殖能力差别越大；流式细胞仪研究提示人肝癌细胞的S期细胞比例(S-phase cells ratio,SPF)、增殖指数(proliferation index,PI)明显大于人正常肝细胞,从而提示人肝癌细胞的增殖能力明显高于人肝细胞.结论:与人正常肝细胞相比,人肝癌细胞的SOC电流密度增大、细胞内游离Ca2+浓度升高、增殖能力增强,提示人肝癌细胞增殖能力提高与其SOC功能增强有关.
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钙池操纵的钙通道与支气管哮喘气道平滑肌功能调控
钙信号是调控气道平滑肌细胞功能的重要机制.细胞内钙离子浓度受肌浆网内钙释放和胞外钙内流的双重调控.钙池操纵的钙通道(SOC)是哮喘气道平滑肌细胞外钙内流的重要机制,在哮喘气道高反应性和气道重塑中具有重要作用.近年来,通过分子生物学方法,已经发现了SOC相关调控分子STIM1和通道组成分子Orai1,为深入研究气道平滑肌SOC的结构和功能关系,以及在哮喘防治中的作用提供了基础.本文就SOC及其与气道平滑肌功能的关系作一综述.
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钙池操纵的钙通道与支气管哮喘气道平滑肌功能调控
钙信号是调控气道平滑肌细胞功能的重要机制.细胞内钙离子浓度受肌浆网内钙释放和胞外钙内流的双重调控.钙池操纵的钙通道(SOC)是哮喘气道平滑肌细胞外钙内流的重要机制,在哮喘气道高反应性和气道重塑中具有重要作用.近年来,通过分子生物学方法,已经发现了SOC相关调控分子STIM1和通道组成分子Orail,为深入研究气道平滑肌SOC的结构和功能关系,以及在哮喘防治中的作用提供了基础.本文就SOC及其与气道平滑肌功能的关系作一综述.
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脂氧素A4对Jurkat T细胞游离钙浓度变化及增殖的影响
目的 研究脂氧素A4(LXA4)对Jurkat T细胞内游离钙离子浓度变化及细胞增殖的影响.方法 钙离子荧光探针Fluo-3/AM负载细胞后,用激光共聚焦扫描显微镜动态检测活细胞内游离钙离子浓度的变化;CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,并结合流式细胞仪进行细胞周期分析.结果 ①采用含钙细胞外液时,LXA4降低正常Jurkat T细胞内游离钙离子浓度,而用无钙细胞外液时,细胞内游离钙离子浓度下降不明显;②LXA4呈剂量依赖性抑制钙池操纵钙通道(SOC)激活剂thapsigargin(TG)引起的Jurkat T细胞内游离钙离子浓度的增高,100 nmol/L LXA4也能抑制抗CD3单抗(a-CD3)引起的细胞内钙离子浓度的增高,SOC阻滞剂2-Aminoethoxydiphenylborate(2-APB)能显著抑制TG引起的钙内流;③LXA4呈剂量依赖性抑制a-CD3和抗CD28单抗(a-CD28)诱导的Jurkat T细胞增殖,细胞周期分析发现LXA4阻止JurkatT细胞由G1期进入S期,降低S期细胞比例、细胞增殖指数(PI)和DNA含量.结论 LXA4可能通过抑制Jurkat T细胞钙池操纵的钙通道引起的胞质内游离钙浓度的升高而抑制其增殖.
关键词： 脂氧素A4 Jurkat T细胞 钙池操纵的钙通道 细胞增殖 -
STIM1及其相关蛋白在脂筏介导的细胞内钙信号中的作用机制
脂筏是膜脂双层内富含特殊脂质(胆固醇和鞘脂)和蛋白质的微区,脂筏作为独特的信号转导平台不仅可以为内部分子提供一个"交流"的环境,也有助于加快信号传递.Ca2+作为重要的信号分子,参与调控细胞许多生理功能.细胞内Ca2+浓度受各种信号分子,钙泵和钙池操纵的Ca2+内流等多种因素调节.新研究发现:瞬时受体电位通道的一些成员、基质相互作用分子1以及Orai1在钙池操纵的钙通道介导的Ca2+内流过程中发挥着重要的作用.大量Ca2+通道和蛋白质(包括钙信号途径的关键蛋白)在脂筏微区集聚,脂筏功能越来越受到人们的关注.
