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人膜辅助因子蛋白文献资料
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表达人膜辅助因子蛋白基因的猪内皮细胞可抑制人血清补体的细胞毒作用
目的 研究转染人膜辅助因子蛋白基因的猪内皮细胞抗补体的细胞毒作用.方法 从人胎盘组织提取总RNA,用RT-PCR技术扩增得到人膜辅助因子蛋白(hMCP)基因全长cDNA,将其克隆到带有巨细胞病毒(CMV)IE启动子的pCI-neo哺乳动物表达载体和以pCI-neo为基础构建成的带有人EF-1α启动子的pEF-neo哺乳动物表达载体上,得到质粒pCIM和pEFM.利用电穿孔基因转移方法分别转染猪内皮细胞(PEC),以G418筛选稳定表达克隆.用正常人血清处理此转基因细胞来检测其抗补体作用.结果 Northern杂交结果表明,在EF-1α启动子引导下的hMCP基因得到了高效表达.死细胞计数和LDH释放实验结果表明,表达hMCP基因的PEC可有效抑制人血清补体对其的裂解作用(P＜0.01).结论 克隆的hMCP基因在EF-1α启动子引导下于PEC可高效表达,且使PEC能够抗人补体的细胞毒作用.
