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Fasudil 对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型巨噬细胞的免疫调节作用研究
目的：探讨Fasudil（法舒地尔）介导的细胞治疗对实验性自身免疫性脑脊髓炎（ exper-imental autoimmune encephalomyelitis， EAE）巨噬细胞的免疫调节作用。方法雌性C57BL／6小鼠，采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）诱导建立主动免疫EAE模型，免疫后第9天制备脾脏单个核细胞（ MNCs），在添加／或无Fasudil条件下体外培养。72 h后收集上述细胞，应用流式细胞术检测巨噬细胞亚群的变化，Griess法检测NO含量，ELISA法检测Arg-1水平；并以5×107个细胞／只小鼠腹腔注射诱导建立被动转移EAE模型，分为PBS-MNCs组和Fasudil-MNCs组，观察各组小鼠临床评分和体重变化。结果主动免疫第9天EAE小鼠脾脏MNCs可诱导被动转移EAE模型的建立，而体外Fasudil处理72 h的MNCs可影响EAE的发生、发展。体外实验显示，Fasudil可部分逆转M1表型至M2表型，即M1型标志CD16／32、iNOS、IL-12降低，而M2型标志CD206、IL-10、CD23升高。 Fasudil还可抑制NO产生，促进Arg-1分泌。结论 Fasudil通过转化炎性M1型巨噬细胞为抗炎的M2型巨噬细胞影响EAE的发生、发展。
关键词： Fasudil 实验性自身免疫性脑脊髓炎 巨噬细胞 抗炎作用 -
Fasudil对EAE小鼠脊髓内细胞ROCK-Ⅱ表达的影响
目的 探讨Fasudil对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脊髓内细胞及血管内皮细胞KOCK-Ⅱ表达的影响.方法 雌性C57BL/6小鼠随机分为佐剂组、EAE组和Fasudil干预组.EAE和Fasudil组小鼠用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG<,35-55>)进行免疫,佐剂组小鼠以生理盐水代替MOG<,35-55>作为EAE的对照.Fasudil干预组于免疫后第7d腹腔给予Fasudil(50mg/kg/d),连续14d.佐荆组和EAE组给与等量生理盐水作为对照.免疫后隔天观察各组小鼠临床评分和体重变化.在免疫4周后处死动物,取小鼠脊髓腰膨大处,进行HE和免疫荧光染色,观察各组小鼠脊髓的病理变化与ROCK-Ⅱ的表达情况.结果 Fasudil能够改善EAE的临床症状(P<0.05),减轻炎性细胞浸润(P<0.05),同时减少EAE小鼠脊髓及其血管内皮细胞ROCK-Ⅱ的表达.结论EAE小鼠脊髓及其血管内皮细胞ROCK-Ⅱ的表达明显上调,推测可能与炎性细胞浸润和疾病的发生发展有关.Fasudil可以改善EAE的临床症状,可能与脊髓及其血管内皮细胞KOCK-Ⅱ降低,及由此引起的炎性细胞浸润减少有关.
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Rho激酶抑制剂Fasudil对Aβ1-42诱导AD模型大鼠抗氧化作用研究
目的 探讨Rho激酶抑制剂Fasudil对β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)诱导阿尔茨海默病大鼠学习、记忆功能和海马区氧化应激指标的影响.方法 80只成年雄性Wistar大鼠随机分成对照组(侧脑室模拟注射+生理盐水腹腔注射)、模型组(侧脑室Aβ1-42注射+生理盐水腹腔注射)、Fasudil低剂量组[侧脑室Aβ1-42注射+Fasudil 5 mg/(kg·d)腹腔注射]、Fasudil高剂量组[侧脑室Aβ1-42注射+Fasudil 10 mg/(kg·d)腹腔注射],每组各20只.采用侧脑室注射Aβ1-42制备AD模型,Fasudil腹腔注射14 d干预.Morris水迷宫实验进行大鼠的行为学测试,采用分光光度法测定海马组织匀浆中谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量.结果 模型组大鼠水迷宫实验的逃避潜伏期明显较对照组延长(P＜0.01),目标象限活动时间和穿台次数明显少于对照组(P＜0.01);海马组织匀浆中SOD、GSH-Px活性明显下降(P＜0.05,P＜0.01),MDA的含量增加(P＜0.05).Fasudil高剂量组逃避潜伏期明显短于模型组(P＜0.01),目标象限活动时间和穿台次数明显多于模型组(P＜0.01);海马组织匀浆中SOD、GSH-Px活性较模型组增加(P＜0.05),MDA含量变化不明显.结论 Fasudil能够剂量依赖性的减少Aβ1-42诱导AD大鼠模型海马区的氧化应激反应,改善其学习、记忆功能.
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RhoA信号转导通路对乳腺癌细胞Ezrin表达的影响
背景与目的:目前研究证实,RhoA在肿瘤发生发展和浸润转移过程中起重要作用,但其具体作用机制尚不完全清楚.Ezrin已经被证实参与了乳腺癌等多种恶性肿瘤的浸润转移过程.本研究初步探讨RhoA信号转导通路对Ezrin表达的调节作用.方法:给予表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)作用MDA-MB-231细胞不同时间后,应用Western blot方法检测细胞内RhoA、RhoA磷酸化形式及Ezrin蛋白表达的变化情况:给予RhoA激酶特异性抑制剂fasudil预处理后.应用Western blot方法在RhoA磷酸化和Ezrin蛋白的表达高峰时间检测二者的表达情况.结果:给予EGF刺激后,p-RhoA水平逐渐升高,于30 min时达高峰;RhoA蛋白的表达无明显变化:Ezrin蛋白水平逐渐升高,于24 h时达高峰.用fasudil预处理细胞后.EGF诱导的RhoA磷酸化水平受到明显抑制,抑制率为72.73%:同时Ezrin蛋白的表达水平亦受到明显抑制,抑制率为51.28%.结论:RhoA可能作为Ezrin的上游信号转导途径参与调控乳腺癌细胞的浸润转移.
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Rho/Rho激酶信号通路介导新生大鼠神经元缺氧缺血损伤的作用机制研究
目的:探讨Rho/Rho激酶(ROCK)信号通路在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中的作用,为新生儿HIBD的治疗提供实验衣据.方法:以体外培养的新生SD大鼠皮质神经元作为研究对象,观察缺氧复氧(H/R)损伤后神经元突起长度、神经元RhoA和ROCK等蛋白的表达量、神经元细胞骨架等指标.结果:缺氧缺血损伤后神经元突起长度明显缩短(P＜0.05),法舒地尔处理后神经元长度较H/R组明显延长(P＜0.05).缺氧缺血损伤后神经元RhoA和ROCKII等蛋白的表达量显著增加(P＜0.05),法舒地尔干预后蛋白表达呈低水平且35 μmol组作用显著.缺氧缺血损伤后细胞骨架F-actin的表达减少且分布丧失规律性,fasudil干预后可部分逆转细胞骨架的分布且表达量显著增加.结论:缺血缺氧损伤通过激活Rho/ROCK信号通路引起神经元突起回缩、细胞骨架降解进而引起细胞凋亡,抑制Rho/ROCK信号通路则可促进神经元突起延长、细胞骨架重构,从而发挥保护作用.
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Fasudil对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠小胶质细胞和星形胶质细胞的作用
目的:确认法舒地尔(Fasudil)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗效果,观察法舒地尔对小胶质细胞和星形胶质细胞的作用.方法:成年雌性C57BL/6小鼠用MOG35-55肽免疫制作慢性EAE模型,分别随机在免疫后第3天(Fasudil早期治疗组)和发病时给予Fasudil(Fasudil晚期治疗组),以同样方式给予生理盐水作为对照.观察临床症状和体质量变化;采用免疫荧光组织化学染色、Western blot 法检测脊髓小胶质细胞和星形胶质细胞iNOS和p-NF-κB/p65的表达,ELISA测定脊髓匀浆中IL-1β和TNF-α水平.结果:Fasudil推迟EAE起病,减轻EAE症状,抑制脊髓中小胶质细胞iNOS以及星形胶质细胞p-NF-κB/p65表达,并伴随炎性因子IL-1β和TNF-α释放降低.结论:Fasudil可抑制EAE小鼠小胶质细胞和星形胶质细胞炎性分子的释放.
关键词： Fasudil 实验性自身免疫性脑脊髓炎 小胶质细胞 星形胶质细胞 炎性反应
