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慢性乙型肝炎高胆红素血症患者氧化损伤的研究
目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)高胆红素血症患者氧化损伤的情况.方法 75例血清总胆红素(TBIL)高于正常上限值(ULN)的CHB患者,按TBIL为ULN的倍数分为A、B、C、D、E五组.测定患者血清丙二醛(MDA)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、维生素C(V_C)、维生素E(V_E)浓度,并做出统计分析.11例健康志愿者为正常对照组,16例乙肝表面抗原(HBsAg)携带者为携带者组.结果 各患者组与正常对照组比较:MDA、XOD浓度升高,差异有统计学意义(P＜0.05),V_C、V_E浓度降低,差异有统计学意义(P＜0.05);携带者组与正常对照组比较:XOD浓度升高,差异有统计学意义(P＜0.05),MDA、V_C、V_E浓度差异无统计学意义(P＞0.05).在CHB高胆红素血症患者中,MDA、XOD浓度与TBIL水平呈正相关(r=0.670,P＜0.01;r=0.737,P＜0.01);V_C、V_E浓度与TBIL水平呈负相关(r=-0.463,P＜0.01;r=-0.247,P＜0.05).各患者组间的比较:除A、B组间外,其余各组间MDA浓度差异有统计学意义(P＜0.05);A、B、C组与D、E组间XOD浓度差异有统计学意义(P＜0.05);A组与D、E组,B、C、D组与E组间V_C浓度差异有统计学意义(P＜0.05);A、B组与E组间V_E浓度差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CHB高胆红素血症患者体内存在氧化-抗氧化功能障碍,血清TBIL水平升高时氧化损伤程度加重.HBsAg携带者体内氧化损伤程度不高.抗氧化损伤可能有助于CHB高胆红素血症患者的治疗.
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WWOX和p73基因在急性淋巴细胞白血病中表达的研究
目的 研究含有氧化还原酶的WW域(WW domain containing oxidoreductase,WWOX)和p73基因在急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia,ALL)中异常表达的临床意义及其机制.方法 采用病例对照研究,收集2010-2011年广西医科大学第一附属医院收治的ALL患者骨髓样本48份,其中包括初诊患者32例、缓解患者11例、复发患者5例；收集同期非白血病患者骨髓样本31份作为对照组.抽取骨髓3 ml,EDTA抗凝,1 ml骨髓样本采用离心柱法立即提取RNA,取纯度在1.8～2.0范围内的产物逆转录后进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),检测WWOX和p73基因mRNA的表达情况；2 ml骨髓样本采用离心柱法提取DNA,取纯度在1.7 ～1.9范围内的产物进行甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR),检测WWOX基因启动子区和p73基因第1外显子的甲基化情况.不同组别间甲基化状态的比较采用x2检验或Fisher确切概率法.结果 31份对照组标本中,WWOX与p73基因mRNA阳性表达率均为94.00％(29/31).48份ALL标本中,WWOX mRNA阳性表达率为48.00％(23/48),低于对照组,差异有统计学意义(x2=17.434,P =0.000)；其中初诊组为34.38％(11/32),低于缓解组的90.91％(10/11),差异有统计学意义(x2=10.471,P=0.001).p73基因mRNA阳性表达率为56.00％( 27/48),低于对照组,差异有统计学意义(x2=12.697,P=0.000)；其中初诊组为43.75％( 14/32),低于缓解组的90.91％(10/11),差异有统计学意义(P=0.012).31份对照组标本中,WWOX与p73基因均未见甲基化现象(0/31).48份ALL标本中,WWOX基因甲基化率为44.00％( 21/48),明显高于对照组,差异有统计学意义(x2=18.473,P=0.000)；其中初诊组为56.25％ (18/32),高于缓解组的9.09％ (1/11),差异有统计学意义(P=0.012);p73基因甲基化率为35.00％(17/48),明显高于对照组,差异有统计学意义(x2=13.990,P=0.000),其中初诊组为46.88％( 15/32),高于缓解组的9.09％ (1/11),差异有统计学意义(P=0.033).WWOX与p73基因mRNA阳性表达率均与各自基因甲基化状态呈负相关(r=-0.678、-0.577,P=0.000).结论 WWOX与p73基因的甲基化可能导致基因的沉默,使其mRNA减少或缺失；WWOX与p73基因甲基化的检测可能对ALL的诊断和疗效评估有一定意义.
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耐氟康唑白念珠菌临床株ERG11基因突变检测
目的 筛查耐氟康唑白念珠菌ERG11基因突变,探讨其与耐药的关系.方法 用柯玛嘉显色培养基和25S rDNA转座内含子保守区分型方法,收集鉴定白念珠菌临床株.联用微量稀释法和Rosco药敏纸片扩散法体外测定试验菌株对氟康唑的敏感性.以ERG11序列明确的白念珠菌标准耐药株ATCC 76615-19和达令顿株为质控,以标准敏感株C1b和临床敏感株02928为对照,分3段扩增临床耐药株ERG11基因并测序.结果 获得15株A型白念珠菌临床耐药株.ERG11基因测序共发现16处同义突变和11处错义突变.质控株突变与既往报道一致.敏感株共出现9处同义突变和3处错义突变G640A(E165K)、A945C(E266D)、G1609A/G(V488I).耐药临床株中的14株均出现2处共有的错义突变G487T(A114S)和T916C(Y257H),不伴其他突变;另1株出现8处同义突变和4处错义突变R541C(Y132H)、T495A(D116E)、A530C(K128T)、T1493A(F449Y),其中T1493A(F449Y)未见报道.结论不同来源的白念珠菌临床耐药株集中发生G487T(A114S)和T916C(Y257H)突变,暗示这2处突变极可能参与菌株耐药.耐药株可以发生T1493A(F449Y)突变.
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血红蛋白氧化酶诱导剂Hemin在乙酸诱导大鼠胃溃疡中的作用
目的众多研究表明血红蛋白氧化酶(Heme Oxygenase,HO)具有内源性组织细胞保护作用,诱导HO表达能减轻和限制炎症引起的组织损伤.本研究目的旨在研究HO诱导剂Hemin在乙酸诱导大鼠胃溃疡模型中所起的作用及可能的机制.方法用RT-PCR,Western blotting分别检测乙酸诱导大鼠胃溃疡1,3,7 d后胃粘膜中两种诱导型酶,HO-1和一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达.以溃疡面积判断胃粘膜损伤程度,研究HO-1诱导剂Hemin对乙酸诱导胃溃疡形成过程中胃粘膜损伤的影响,同时研究Hemin对胃粘膜iNOS表达及活性的影响以探讨其可能的作用机制.结果乙酸诱导大鼠胃溃疡后,胃粘膜HO-1和iNOS表达明显增强.HO诱导剂Hemin能显著增强HO-1 mRNA和蛋白质表达,但溃疡面积反而增大,炎症加重.处理组大鼠溃疡面积1 d为(77±5)mm2,明显大于对照的(51±3)mm2(P＜0.01,n=10);3 d为(53±4)mm2,明显大于对照(36±3)mm2(P＜0.01,n=10).同时Hemin能显著增强胃粘膜iNOS的表达及iNOS的活性,溃疡诱导1 d Hemin组iNOS的活性为5.3±0.3,对照3.1±0.3(P＜0.01,n=10);3 d Hemin组5.7±0.5,对照3.8±0.4(P＜0.01,n=10,单位为pmol[3H]瓜氨酸·min-1·g蛋白-1).结论在乙酸诱导的胃溃疡模型中,HO-1表达增加对胃粘膜可能存在一定程度的保护作用,但这一保护作用不足于抵消其他损害因素如NO过度产生所导致的粘膜损伤.HO代谢产物可能尚具有双向作用,即生理性产生增加具有粘膜保护作用,过度产生可能存在细胞毒性作用.
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遗忘型轻度认知功能障碍患者血清炎性因子与氧化还原水平研究
目的 观察遗忘型轻度认知功能障碍(aMCI)患者血清中超敏C反应蛋白(hs-CRP)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH Px)活力及丙二醛(MDA)水平的变化. 方法 采用病例对照研究,选取68例老年aMCI患者作为病例组,56例认知正常老年人作为对照组,比较aMCI患者和对照组老年人血清中hs-CRP、SOD、GSH-Px和MDA水平. 结果 aMCI组患者hs CRP、SOD、MDA和GSH-Px分别为(3.57±3.75)mg/L、(26.88±8.34)×103U/L、(9.12±4.51)μmol/L和(175.08±41.66)酶活力单位,对照组分别为(2.33±2.03)mg/L、(28.27±6.79)×103 U/L、(8.07±2.74)μmol/L和(177.84±47.80)酶活力单位;与对照组比较,aMCI组hs-CRP水平明显升高(t=2.34,P=0.021),SOD、MDA及GSH-Px水平差异无统计学意义(t=-1.00、1.58、0.34,P=0.319、0.116、0.732). 结论 hs-CRP水平变化提示炎性反应可能参与aMCI的病理生理过程,为早期采用抗炎治疗、预防aMCI发生提供可能的参考依据.
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吸烟对老年慢性阻塞性肺疾病稳定期患者中性粒细胞还原型辅酶Ⅱ氧化酶的影响
目的 探讨吸烟对老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期患者外周血中性粒细胞膜蛋白质及还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶p47-PHOX因子磷酸化表达的影响.方法 选择134名受试者,分为4组:(1)吸烟COPD组39例;(2)吸烟无COPD组36例;(3)无吸烟COPD组31例;(4)无吸烟无COPD组28例.细胞色素C还原法测外周血中性粒细胞释放超氧阴离子(O2-)的水平.Western blot检测外周血中性粒细胞膜蛋白质和NADPH氧化酶p47-PHOX因子磷酸化表达,并分析O2-的水平与其肺功能、血气之间关系.结果 吸烟COPD组及吸烟无COPD组外周血中性粒膜细胞蛋白质和NADPH氧化酶p47-PHOX因子磷酸化(呈黑色)明显强于无吸烟无COPD组(呈浅灰色).吸烟COPD组中性粒细胞释放的O2-水平与其第1秒用力呼气容积(FEV1)、FEV1占预计值百分比(%)、FEV1/用力肺活量、动脉血氧分压呈负相关(r分别为-0.898、-0.878、-0.874、-0.890,均为P＜0.01).结论 吸烟能激活NADPH氧化酶产生O2-,并且吸烟能使NADPH氧化酶亚单位p47-PHOX发生磷酸化.
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环氧化酶-2表达在单磷酰脂A诱导的大鼠延迟性心肌保护中的作用
目的探讨单磷酰脂A(MLA)预处理对大鼠缺血再灌注心肌的影响及环氧化酶-2(COX-2)表达的作用.方法雄性Wistar大鼠24只分为4组:健康对照组(NC组)、单纯缺血再灌注组(I/R组)、单磷酰脂A预处理组(MLA-DP组)、单磷酰脂A预处理与COX-2抑制剂NS-398组(MLA+NS-398组);检测各组心功能、心肌梗死的范围;测定MLA预处理后24 h COX-2蛋白表达及心肌中前列腺素类化合物的含量.结果与NC组比较,MLA-DP组心功能明显改善[左室内压峰值(LVSP)分别为:(124.1±12.0)mm Hg和(112.0±26.3)mm Hg,P<0.01],与MLA-DP组比较,MLA+NS-398组心功能下降(P<0.01)、心肌梗死范围增大[分别为(14±3)%和(32±9)%,P<0.01].与NC组比较,MLA-DP组COX-2蛋白水平明显增加(P<0.01),心肌中前列腺素类化合物含量明显增加(P<0.01).同MLA-DP组比较,MLA+NS-398组蛋白水平无明显变化,但MLA+NS-398组前列腺素类化合物含量明显减少(P<0.01).结论 MLA预处理适度上调了心肌细胞COX-2蛋白表达,增加心肌前列腺素类化合物前列腺素Ez的量,从而对大鼠缺血再灌注心肌有延迟保护作用.
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爱普列特对大鼠前列腺凋亡相关基因及5α还原酶mRNA表达的影响
目的 评价爱普列特对对大鼠前列腺Bcl-2、Bax、CD34、eNOS及5α还原酶mRNA 表达的影响. 方法分别给予雄性大鼠爱普列特(爱普列特组)、非那雄胺(非那雄胺组)和生理盐水(正常对照组),观察大鼠Bcl-2、Bax、eNOs、微血管密度(MVD)以及2种5α还原酶mRNA的表达情况. 结果爱普列特组Bcl-2、eNOS、MVD(148±42、72.3±48.5、4.6±2.2)与非那雄胺组(152 ±59、144.8±80.8、4.9±1.3)及正常对照组(216±52、293.9±116.0、8.0±3.0)比较,3个指标均下降(F值分别为6.6、0、26.45、9.52、均P<0.01);Bax在爱普列特组为(390±167)、非那雄胺组为(311±155),较对照组(185±73)上升(F＝6.35,P＝0.004),三组Srd5_(α1)及Srd5_(α2)还原酶mRNA的表达差异无统计学意义(F值分别为0.427和0.58,均P>0.05). 结论爱普列特可以促进前列腺细胞凋亡,抑制血管牛成,减少微血管密度,但可能不能影响5a还原酶mRNA的表达,且其作用与非那雄胺相似.
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线粒体损伤在幽门螺杆菌诱导胃癌细胞凋亡中的作用
目的研究线粒体途径在幽门螺杆菌(Hp)诱导胃癌细胞凋亡过程中的作用.方法采用Western blotting检测细胞内线粒体DNA细胞色素氧化酶(COX)Ⅰ蛋白表达的含量;流式细胞术测定细胞凋亡和线粒体膜电位变化.结果 Hp培养滤液呈剂量和时间依赖性地直接诱导SGC-7901细胞凋亡,随着其浓度的增加,细胞的凋亡率呈上升的趋势.Hp培养滤液处理SGC-7901细胞4 h后,线粒体膜电位开始降低,8 h后下降更明显,12 h 已基本降至低,24 h后无明显变化. Hp培养滤液作用胃癌细胞后, 线粒体DNA COXⅠ蛋白表达明显低于对照组(632.8±40.6 vs 895.1±44.2,P<0.05).结论线粒体途径可能在Hp诱导SGC-7901胃癌细胞凋亡过程中起重要作用.
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抑制NADPH氧化酶拮抗兔心力衰竭后室性心律失常
目的 探讨抑制还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶对心力衰竭后室性心律失常的影响及其机制.方法 家兔随机分为假手术安慰剂组、假手术NADPH氧化酶抑制剂(apocynin)组、心力衰竭安慰剂组、心力衰竭apocynin组.通过容量超负荷联合压力超负荷建立家兔心力衰竭模型.apocynin和安慰剂以15 mg/d口服.8周后,行超声心动图检查观察动物心脏结构和功能的变化.通过在体电生理研究分析兔左心室3层心肌单相动作电位复极90％的时限(MAPD90),观察室性心律失常诱发情况,检测心室颤动(室颤)阈值.运用比色法检测心肌超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平.利用Western blot法检测心肌缝隙连接蛋白43(Cx43)的蛋白表达.结果 心力衰竭兔出现明显心脏扩大和心功能异常,3层心肌MAPD90延长[内层(179.8±5.8)ms对(137.0±4.5) ms;中层(180.6±8.6)ms对(137.3±4.8) ms；外层(175.0±11.3)ms对(136.3±3.9)ms；P＜0.05],室性心律失常诱发增多,室颤阈值显著降低(10.8±2.4)V对(21.0±2.8)V(P＜ 0.05),心肌SOD活力降低(91.0±10.1)U/mg protein对(160.3±14.2)U/mg protein(P＜0.05),MDA水平升高(3.0±0.3)nmol/mg protein 对(1.2±0.1)nmol/mg protein(P＜0.05),Cx43蛋白表达显著降低(0.5对0.9,P＜0.05),且以磷酸化Cx43降低为主(P＜0.05).apocynin干预可显著改善心力衰竭兔心脏功能,降低氧化应激水平[SOD(132.7±8.8)U/mg protein对(91.0±10.1)U/mg protein;MDA(1.9±0.2) nmol/mg protein对(3.0±0.3)nmol/mg protein(P＜0.05)],减少室性心律失常诱发,提高室颤阈值(17.4±1.6)V对(10.8±2.4)V(P＜0.05),增加Cx43蛋白表达(P＜0.05).结论 心力衰竭后氧化应激水平升高导致Cx43蛋白降低,是心力衰竭后室性心律失常发生的病理生理机制之一,抑制NADPH氧化酶可能是治疗心力衰竭后室性心律失常的方向之一.
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环氧化酶在大鼠缺血心肌血管生成及内皮祖细胞动员中的作用
目的 探讨环氧化酶(COX)1、2在缺血心肌血管生成和内皮祖细胞动员中的作用及机制.方法 实验大鼠随机分为心肌缺血加选择性COX2抑制剂罗非昔布组、心肌缺血加选择性COX1抑制剂valeryl salicylate(VS)组和单纯心肌缺血组.心肌缺血组于术后1周取血浆测血管内皮生长因子(VEGF),外周血分离单个核细胞培养计数内皮祖细胞和缺血心肌组织检测缺氧诱导因子-1αmRNA,28天后取缺血区心肌免疫组化法测毛细血管密度.结果 心肌缺血加罗非昔布组与单纯心肌缺血组、心肌缺血加VS组比较,血浆VEGF水平、循环血内皮祖细胞计数、缺血心肌毛细血管密度和缺氧诱导因子-1α mRNA表达均显著减少(P＜0.05),其余指标两组差异无统计学意义.结论 COX2在心肌缺血时内皮祖细胞动员和缺血心肌血管生成中起重要作用,其可能机制与增加缺氧诱导因子-1α和VEGF的表达有关,而COX1没有作用.
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抑制NADPH氧化酶对心力衰竭兔心肌钙调节蛋白的影响
目的 探讨抑制NADPH氧化酶对心力衰竭(心衰)兔心功能的影响及其机制.方法 通过超容负荷联合压力负荷建立家兔心衰模型,以NADPH氧化酶特异性抑制剂apocynin给予干预.8周后,观察兔心脏结构和功能的变化,并检测心肌NADPH氧化酶活性以及心肌肌浆网钙泵(sarcoplasmic reticulum Ca~(2+) ATPase,SERCA2a)、雷诺定受体2(ryanodine receptor 2,RyR2)、受磷蛋白(phospholamban,PLB)和钠钙交换体(sodium-calcium exchanger,NCX)基因表达的变化.结果 心衰兔出现明显的心脏扩大和心功能异常,这些改变与心肌NADPH氧化酶活性增加、SERCA2a、RyR2和PLB mRNA表达降低以及NCX mRNA表达增加相关.apocynin显著抑制心衰兔心肌NADPH氧化酶活性(P<0.05),上调SERCA2a、RyR2和PLB mRNA表达(SERCA2a/GAPDH比值:0.63±0.11与0.34±0.08,RyR2/GAPDH比值:0.23±0.04与0.17±0.06,PLB/GAPDH比值:1.28±0.13与0.95±0.09,P<0.05),下调NCX mRNA表达(NCX/GAPDH比值:0.67±0.10与0.95±0.12,P<0.05),并改善心功能[左室射血分数(60.06±10.07)%与(38.87±3.31)%,左室短轴缩短率(30.12±6.56)%与(17.40±2.45)%,P<0.05].结论 抑制NADPH氧化酶能够调节心衰时心肌钙调节蛋白异常表达,这可能是其改善心衰时心功能的分子机制.
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WWOX基因转染对卵巢上皮性癌细胞生长的影响
目的 研究抑癌基因WWOX对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞生长的影响,寻求卵巢癌基因治疗的新途径.方法 将携有WWOX基因的真核表达载体体外转染卵巢癌细胞系HO8910细胞(重组质粒组),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染空载质粒(空质粒组)及未经转染(空白对照组)的HO8910细胞作为对照,用蛋白印迹法检测重组质粒组细胞中WWOX蛋白的表达情况.体外实验:分别用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、体外侵袭实验、琼脂克隆形成实验及流式细胞仪等分析WWOX基因对HO8910细胞生物学活性的影响.体内实验:将转染细胞接种于BALB/c裸鼠腹腔,观察裸鼠生存时间和肿瘤生长情况.结果 (1)重组质粒组细胞中WWOX蛋白能稳定表达,空质粒组及空白对照组细胞未检测到WWOX蛋白的表达.(2)MTT比色法检测显示,重组质粒组各时间点的细胞增殖能力较空质粒组及空白对照组明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)重组质粒组细胞的琼脂克隆形成率(19.8%)明显低于空质粒组(54.5%)及空白对照组(56.0%),差异有统计学意义(P＜0.05).(4)流式细胞仪检测显示,重组质粒组中(72.08±0.39)%的细胞被阻滞于G0/G1期,分别与空质粒组[(41.02±1.08)%]及空白对照组[(39.31±0.67)%]比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(5)体外侵袭实验显示,重组质粒组穿膜细胞数为(89.7±3.1)个,分别与空质粒组[(91.2±1.3)个]及空白对照组[(91.4±1.3)个]比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(6)裸鼠体内实验表明,重组质粒组裸鼠体内的成瘤能力(包括转移灶数目、转移灶重量及移植瘤大直径、腹水量)明显低于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 抑癌基因WWOX可干扰卵巢癌细胞的细胞周期并抑制其生长增殖,可为卵巢癌的基因治疗提供一种新方法.
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WWOX基因干扰对卵巢上皮性癌细胞顺铂耐药的影响
目的 研究应用RNA干扰(RNAi)技术逆转卵巢上皮性癌(卵巢癌)耐药细胞中WWOX基因的表达,并探讨WWOX基因与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系.方法 将设计合成的针对WWOX基因的特异性小分子干扰RNA(siRNA),用脂质体瞬时转染法将其转染进WWOX基因高表达的卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/SB细胞中,用RT-PCR技术和蛋白印迹法分别测定转染前后SKOV3/SB细胞中WWOX Mrna及蛋白表达的变化;采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测转染前后SKOV3/SB细胞对顺铂的耐药指数;应用流式细胞仪检测转染前后SKOV3/SB细胞的生长周期,高效液相色谱仪测定转染前后SKOV3/SB细胞中顺铂的药物浓度.实验分为5组:(1)SKOV3组:接种SKOV3细胞;(2)SKOV3/SB组:接种SKOV3/SB细胞;(3)SKOV3/SB阴性对照转染组:接种转染阴性对照序列的SKOV3/SB细胞;(4)SKOV3/SB脂质体转染组:接种转染脂质体的SKOV3/SB细胞;(5)SKOV3/SB siRNA转染组:接种转染siRNA的SKOV3/SB细胞.结果 转染48 h后,SKOV3、SKOV3/SB、SKOV3/SB阴性对照转染、SKOV3/SB脂质体转染、SKOV3/SB siRNA转染组细胞中WWOX Mrna的表达水平分别为0.647±0.025、2.239±0.030、2.392±0.041、2.379±0.047、1.219±0.032,WWOX蛋白的表达水平分别为1.368±0.028、1.639±0.031、1.580±0.025、1.552±0.034、0.653±0.017,SKOV3/SB siRNA转染组与其他各组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).转染siRNA前、后,SKOV3/SB细胞对顺铂的耐药指数由5.04降至3.89;细胞周期中G1期由39.2%增至45.6%,S期由50.4%降至37.5%;耐药细胞内顺铂浓度由9.43 ns/L升至23.45 w/L,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 针对WWOX基因合成的特异性siRNA能明显抑制SKOV3/SB细胞中WWOX Mrna和蛋白的表达,并能在一定程度上恢复其对顺铂的敏感性,推测WWOX基因可能参与了卵巢癌细胞的顺铂耐药过程.
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WWOX基因对卵巢上皮性癌细胞黏附能力的影响
目的 探讨WWOX基因对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞黏附能力的影响.方法 采用RT-PCR技术、蛋白印迹法检测WWOX基因转染的卵巢癌PEO1细胞WWOX mRNA和蛋白的表达;采用黏附实验检测WWOX基因转染的PEO1细胞对纤连蛋白(FN)介导的黏附性.将WWOX基因的小分子RNA(siRNA)转染人具有内源性WWOX基因表达的卵巢癌A2780细胞,黏附实验检测细胞黏附性的变化.结果 WWOX基因转染的PEO1细胞(H6、H7、H8细胞)均有WWOX mRNA的表达,也均有WWOX蛋白的表达.H6、H7、H8细胞在FN包被的培养孔中培养2 h,其黏附性分别为0.098±0.003、0.091±0.004、0.099±0.003,较未转染的PEO1细胞(0.211±0.007)明显减小,分别比较,差异有统计学意义(P＜0.01).转染WWOX siRNA后,转染组A2780细胞在FN包被的培养孔中培养0.5 h,其黏附性为0.059±0.005,明显高于空白对照组(0.029±0.003),两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 WWOX基因能抑制卵巢癌细胞的黏附能力,WWOX基因缺失可增强卵巢癌细胞对盆腹腔黏膜的黏附,进而发生盆腹腔的种植及扩散.
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血浆同型半胱氨酸、叶酸、5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与先天性心脏病的相关性研究
目的研究母亲血浆同型半胱氨酸(HCY),叶酸及5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)第677位核苷酸多态性与子女先天性心脏病(CHD)的相关性. 方法选择CHD患儿母亲32例和正常儿童母亲23例,应用高压液相色谱检测血浆HCY水平,放射免疫法检测血浆叶酸水平,PCR-RELP方法检测MTHFR基因型. 结果以正常值15 μmol/L为界,CHD母亲组发生高HCY血症的有11例,占该组的34%,对照组均在正常范围无增高者,经χ2检验两组差异有高度显著性(P<0.01).血浆叶酸CHD母亲组为(4.9±3.6) μg/L,小于对照组(6.8±2.2) μg/L,差异有显著性(P<0.05).两组母亲MTHFR纯合突变率的差异无显著性. 结论母亲血浆HCY升高及叶酸降低是子女CHD发生的危险因素,叶酸预防CHD的途径可能与降低血浆HCY有关,母亲MTHFR基因第677位的突变与子女CHD的发生无相关性.
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胃癌组织中环氧化酶-2的表达与微血管密度和VEGF的关系
目的:探讨环氧化酶-2(COX-2)在胃癌组织中的表达及其与微血管密度(microvessel density,MVD)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的关系.方法:采用免疫组织化学法,检测43例胃癌患者手术切除标本中COX-2和VEGF的表达,并计数MVD.结果: COX-2在胃癌组织的阳性表达率为60.5%,明显高于对照组,P<0.01;并且与胃癌淋巴结的转移和临床分期有关,与肿瘤大小、浸润深度、分化程度均无关.COX-2和VEGF表达一致符合率为53.5%,两者表达有显著相关性,P<0.01.COX-2阳性和VEGF阳性组MVD值(22.08±3.69、22.12±3.50)均高于COX-2阴性和VEGF阴性组(17.68±3.50、16.15±3.23),P＜0.05;COX-2和VEGF均为阳性者的MVD值高(22.86±3.40),P＜0.05.结论:COX-2、VEGF的表达以及MVD的测定可作为判断胃癌恶性潜能的重要生物指标.COX-2、VEGF的表达对肿瘤血管形成可能起重要作用,联合检测COX-2、VEGF的表达对了解肿瘤血管形成的机制有一定的作用.
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乳腺癌组织中环氧化酶-2的表达及其意义
目的:观察环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在乳腺癌中的表达,并探讨其临床病理意义.方法:采用免疫组织化学方法检测了80例乳腺癌、27例乳腺不典型增生以及20例正常乳腺组织中COX-2表达并分析其与临床病理的相关性.结果:乳腺癌组织中COX-2阳性表达率为57.5%(46/80),明显高于乳腺不典型增生11.1%(3/27)和正常乳腺组织10.0%(2/20),P<0.01.COX-2表达与淋巴结转移、临床分期、组织学分级相关,P<0.05.COX-2高表达的乳腺癌术后5年无病生存率明显高于COX-2低表达者,P<0.05.结论:COX-2表达可以作为判定乳腺癌恶性程度和预后的有效生物学指标.
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环氧化酶-2蛋白在复发性原发上皮性卵巢癌中的表达
目的:探讨环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)与上皮性卵巢癌化疗疗效(耐药或敏感)及临床病理的关系.方法:1999年1月～2003年6月,从临床资料及随访资料完整的卵巢癌病例中筛选出60例原发上皮性卵巢癌(primary epithelia ovarian carcinoma,PEOC)作为研究对象.另选取6例宫颈癌切除术后病理证实双卵巢为正常组织的病例作为对照.根据临床诊断、初治后复发时间等因素将60例卵巢癌患者分为化疗耐药组(30例)和化疗敏感组(30例).与6例正常人作为对照组全部66例均有随访结果.用流式细胞术定量分析66例标本组织中COX-2蛋白的表达量.结果:COX-2蛋白的表达量化疗耐药组＞化疗敏感组＞正常卵巢组织,单向方差分析两两比较差异均有统计学意义.P＜0.005.随临床分期、病理分级、化疗疗程数的增加及有淋巴结转移,COX-2蛋白的表达量也随之增加,但是差异无统计学意义,P＞0.05.结论:COX-2蛋白的表达量与上皮性卵巢癌的复发、发展及疗程有关,与化疗耐药呈正相关.
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肺癌组织中环氧化酶-2表达的研究
目的:探讨肺癌组织中COX-2的表达及其与临床病理生理特征之间的关系.方法:应用免疫组织化学SABC法,检测72例肺癌患者的癌组织癌旁组织及16例转移淋巴结标本中的COX-2蛋白表达水平.结果:肺癌癌组织中COX-2蛋白阳性表达率为 48.6%(35/72),显著高于癌旁组织的6.9%(5/72),χ2=46.239,P=0.000; COX-2在肺腺癌组织中的表达率为71.9%(23/32),高于肺鳞癌组织的42.8%(12/28),χ2=5.173,P=0.023,而在小细胞肺癌组织中无表达.COX-2蛋白阳性表达率与肺癌患者的年龄、性别、细胞分化程度、吸烟史、TNM分期、淋巴结转移均无明显关系,P＞0.05(P值分别为0.354、0.052、0.490、0.658、0.587和0.726).结论: COX-2蛋白过度表达可能与非小细胞肺癌的发生、发展有关.
