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鼻咽癌中EB病毒LMP1基因的序列变异
目的检测广州地区鼻咽癌中EB病毒LMP1基因N-和C-末端区序列变异的热点,并探讨其产生的机制.方法收集中山大学肿瘤医院未经治疗的鼻咽癌患者鼻咽新鲜活检标本63例.采用巢式聚合酶链反应(PCR)扩增EB病毒LMP1基因N-和C-末端区,用XhoⅠ对N-末端区扩增产物进行酶切分析,并检测C-末端区扩增产物30 bp缺失的情况.采用四色荧光末端终止法对4例患者N-和C-末端区的8份扩增产物进行序列分析.结果 63例鼻咽癌组织EB病毒LMP1基因N-和C-末端区有4种序列变异类型:wt-XhoⅠ/wt-LMP1 (4例, 6.3%)、wt-XhoⅠ&XhoⅠ-loss/del-LMP1 (4例, 6.3%)、 wt-XhoⅠ/del-LMP1(5例,7.9%) 和 XhoⅠ-loss/del-LMP1 (50例,79.5%).序列分析显示:与B95-8细胞相比较,所有检测的鼻咽癌组织中EB病毒LMP1基因均发生了错义点突变和无义点突变.错义点突变数与无义点突变数之间的比值为2.25 (9/4).结论广州地区鼻咽癌中EB病毒LMP1基因的序列变异类型以XhoⅠ-loss/del-LMP1占主导.LMP1基因N-末端区XhoⅠ酶切位点的丢失很可能是在C-末端区30 bp缺失的基础上发生的.LMP1基因的4种序列变异类型可能代表了鼻咽癌变过程中EB病毒在宿主内演变的4个时相.
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不同照射剂量低强度激光血管内照射治疗对脑梗死患者相关分子标志物的影响
目的探讨激光波长、照射强度及疗程长短对低强度激光血管内照射(ILLLI)疗法治疗脑梗死疗效的影响.方法 121例经、中型急性脑梗死病人随机分入A、B、C、D、E 5组.A组为对照组,给予常规药物(尼莫地平、肠溶阿司匹林)治疗;B、C、D组在常规药物治疗的同时分别加用相同功率(1.5 mW)、不同波长(依次为632.8、650、532 nm)的ILLLI;E组在常规药物治疗的同时加用功率3 mW、波长632.8 nm的ILLLI.ILLLI每天1次,每次60 min,共治疗10次.每次照射总能量B、C、D组为5.4 J,E组为10.8 J.治疗前和治疗开始后第4、6或11天测定病人血浆血小板颗粒膜蛋白-140(GMP-140)、内皮素-1(ET-1)和血清铜-锌超氧化物歧化酶(Cu-ZnSOD)含量.结果治疗10次,照射总能量为54 J(每天照射强度为1.72×104 J/cm2)时,632.8、650、532 nm三种波长ILLLI治疗后病人血浆GMP-140含量均下降,但与对照组比较差异无统计学意义;三种波长ILLLI均可降低血浆ET-含量,但三者比较差异无显著意义;三种波长ILLLI均可明显升高血清Cu-ZnSOD含量,其中532 nm ILLLI效果更显著,632.8 nm ILLLI总能量为108 J时疗效优于照射总能量为54 J的疗效.每天照射能量为5.4 J时,治疗10天(总能量54 J)疗效优于治疗5天(总能量27 J)的疗效.结论不同波长ILLLI分子生物学效应不同,相同波长ILLLI在适当范围内增大照射强度、增加治疗次数可提高疗效.
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GP73和AFP单项与联合诊断原发性肝癌的价值
目的 探讨血清高尔基体糖蛋白73(GP73)和甲胎蛋白(AFP)单项与联合诊断原发性肝癌(PHC)的应用价值.方法 选择2011年5月至9月在新疆医科大学第一附属医院80例PHC、65例肝硬化、54例慢性肝炎患者、50名健康人,用ELISA定量检测血清GP73含量,用电化学发光法平行测定AFP,并评价GP73单项和联合AFP诊断PHC的敏感度和特异度.结果 PHC组血清GP73为282.0(163.6 ～ 366.7)μg/L,肝硬化组为211.8(107.5 ～ 295.7)μg/L,慢性肝炎组为100.3(61.8 ～ 191.3)μg/L,健康对照组为58.3(43.4～83.6) μg/L,经Kruskal-Wallis检验,4组间差异有统计学意义(H=106.6,P＜0.01)；经Mann-Whitney检验,PHC组分别与肝硬化、肝炎及健康对照组比较,GP73水平差异均有统计学意义(U值分别为1796.0、826.5、154.0,P均＜0.01).GP73诊断PHC的敏感度[82.5％ (66/80)]高于AFP[66.3％ (53/80),x2=4.65,P＜0.05];GP73的特异度[63.3％ (107/169)]低于AFP[88.7％ (150/169),x2 =28.91,P＜0.05].80例肝癌组中,AFP阴性者27例,其中GP73检出阳性22例,GP73检测AFP阴性肝癌患者阳性率为[81.5％ (22/27)]；PHC组中GP73阴性者14例,其中AFP检出阳性9例,AFP检测GP73阴性肝癌患者阳性率为[64.3％(9/14)].2项指标串联检测诊断PHC的特异度[95.9％ (162/169)]高于单项AFP[88.7％(150/169),x2=6.00,P＜0.05]；2项指标并联检测诊断PHC的敏感度[93.8％ (75/80)]高于单项GP73[82.5％ (66/80),x2=4.84,P＜0.05].PHC患者合并HBV感染52例、HCV感染10例和无病毒感染者18例,GP73浓度分别为309.5(170.5～ 370.5)、351.0 (274.7 ～397.9)、210.1 (156.8 ～306.7)μg/L,经Kruskal-Wallis检验,三组差异无统计学意义(H=4.0,P＞0.05).结论 GP73和AFP单项诊断PHC的敏感度和特异度具有较好的互补性,并联检测能有效避免一些AFP阴性漏检病例.
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水通道蛋白在大鼠急性坏死性胰腺炎结肠中的表达及意义
目的 观察急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠结肠组织内水通道蛋白(AQP)表达的变化.方法 采用经胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠的方法建立ANP大鼠模型.制模后4、8、12、24h处死大鼠,每个时间点6只,取结肠组织行病理学检查,采用RT-PCR法检测近端及远端结肠组织IL-6、TNF-α mRNA和AQP(AQP-3、AQP-4、AQP-8)mRNA的表达;采用免疫组织化学染色方法检测结肠组织中AQP的表达.结果 制模后SD大鼠结肠黏膜连续性被破坏,上皮细胞结构模糊,绒毛断裂、脱落,黏膜下层炎性细胞浸润,病理评分随造模时间延长而升高.除造模后4h远端结肠组织的AQP-4 mRNA无显著变化外,其他时间点ANP大鼠近端及远端结肠组织的IL-6、TNF-α mRNA表达,AQP-3、AQP-4、AQP-8 mRNA及蛋白表达均较假手术组显著升高,差异有统计学意义(P值均<0.05).ANP大鼠近端结肠AQP-3、AQP-8的mRNA表达在造模后8 h时达峰值,AQP-4 mRNA表达在24 h达峰值;远端结肠AQP-3、AQP-4 mRNA表达在8 h时达峰值,AQP-8mRNA表达在24h达峰值;近端及远端结肠AQP-3、AQP-4、AQP-8蛋白表达在12、24 h时强.结论 ANP大鼠近端及远端结肠AQP-3、AQP-4、AQP-8 mRNA和蛋白表达均出现不同程度的上调,并随着病程的进展逐步升高,提示其可能参与ANP时结肠的水代谢过程.
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超声治疗对冠心病患者血中一氧化氮和α颗粒膜蛋白140的影响
目的:探讨冠心病患者超声治疗前后一氧化氮和α颗粒膜蛋白140含量测定及临床意义.方法:选用未使用抗血小板药治疗的冠心病患者进行超声治疗,用采用硝酸还原酶法和ELISA双抗体夹心法测定治疗前后一氧化氮和α颗粒膜蛋白140含量.结果:冠心病患者超声治疗前血清一氧化氮水平[(40.9±12.7)μmol/L]较对照组[(21.4±5.3)μmol/L]显著性升高(P＜0.01),治疗后血清一氧化氮水平[(19.5±9.2)μmol/L]接近正常对照组;冠心病患者超声治疗前血浆α颗粒膜蛋白140含量[(29.34±5.36)μg/L]明显高于正常对照组[(12.08±4.85)μg/L](P＜0.01),治疗后有所下降[(25.53±6.51)μg/L],但无显著性意义.且患者超声治疗前后血清一氧化氮和血浆α颗粒膜蛋白140呈显著正相关.结论:冠心病患者体内存在血小板活化,一氧化氮和血小板活化可能共同参与了冠心病发展过程,超声治疗冠心病可能的机制是通过一氧化氮和α颗粒膜蛋白140多种因素共同作用的结果.
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血清可溶性Fas与胎盘组织胎盘生长因子的表达在早发型重度子痫前期发病中的作用
目的:探讨血清可溶性Fas与胎盘组织胎盘生长因子在早发型重度子痫前期发病中的作用.方法:采用ELISA和免疫组化法分别检测20例早发重度子痫前期患者、35例晚发重度子痫前期患者和40例正常晚期妊娠患者血清可溶性Fas(Soluble Fas,sFas)和胎盘组织胎盘生长因子(placental growth factor,PlGF)的表达.结果:正常妊娠组、早发重度组、晚发重度组血清sFas水平分别为(1.17±0.53)、(6.68±0.97)和(3.17±0.74) mg/L,早发重度组、晚发重度组均显著高于正常对照组,差异有显著性(P＜0.05).早发重度组又明显高于晚发重度组,差异有显著性.正常妊娠组胎盘组织PlGF表达的平均灰度值显著高于早发型及晚发型重度子痫前期组,其中早发型子痫前期重度组表达低.早发重度组中血清sFas与PlGF呈负相关,相关系数-0.748.结论:重度子痫前期患者血清sFas表达升高,且早发重度组表达显著高于晚发重度组,并与PlGF呈负相关,说明其异常表达可能是早发重度子痫前期发病的主要原因.
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冠心病患者超声治疗前后NO、GMP-140和vWF水平变化及其临床意义
目的:探讨冠心病患者超声治疗前后一氧化氮(NO)、α-颗粒膜蛋白(GMP-140)和vWF含量变化及临床意义.方法:选用未使用抗血小板药治疗的冠心病患者35例(冠心病组)进行超声治疗.采用硝酸还原酶法和ELISA双抗体夹心法测定治疗前后NO、GMP-140和vWF含量,并与正常组比较.结果:血清NO水平、血浆GMP-140和vWF含量,超声治疗前冠心病组与正常组比较均显著升高(P<0.01),治疗后冠心病组NO水平及vWF含量接近正常组;血浆GMP-140有所下降,但2组比较差异无显著性,且患者超声治疗前血清NO和血浆GMP-140、vWF呈显著正相关.结论:冠心病患者体内存在血小板活化,并与NO可能共同参与了冠心病发展过程,超声治疗冠心病的机制可能是NO、GMP-140和vWF多种因素共同作用.
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妊高征患者胎盘滋养细胞Fas及FasL表达的研究
目的探讨妊娠高血压综合征(妊高征)患者胎盘滋养细胞Fas及FasL的表达及意义.方法采用免疫组织化学法观察25例妊高征患者(妊高征组)胎盘Fas及FasL的表达及其与妊高征病情及新生儿出生体重的关系,并与25例正常妊娠妇女(正常妊娠组)比较.结果Fas及FasL主要表达于胎盘绒毛合体滋养细胞及细胞滋养细胞的胞膜及胞浆内.与正常妊娠组比较,妊高征组胎盘FasL表达显著降低(P＜0.05),轻度,中度,重度妊高征患者胎盘FasL表达,差异有显著性,而妊高征组滋养细胞表达Fas的水平却显著增加(P＜0.05)且轻度与中度及重度比较,差异有显著性.妊高征组胎盘Fas及FasL的表达与新生儿出生体重均无明显相关性.结论妊高征患者胎盘滋养细胞Fas及FasL表达失衡,通过免疫途径诱导滋养细胞发生级联凋亡反应,可能与妊高征的病因及病理过程有关.
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小儿急性肾炎的一氧化氮和GMP-140水平变化
目的探讨血清一氧化氮(NO)和血浆α-颗粒膜蛋白(MGP- 140)在小儿急性肾炎中的作用及其临床意义.方法发别采用硝酸酶还原法和ELISA双抗体夹心法测定25例急性肾炎小儿和16例正常对照者血清一氧化氮和血浆GMP-140.结果急性肾炎急性期和恢复期血清NO水平和血浆GMP-140含量较对照组均有显著性升高(P＜0.01),急性期血清NO水平显著高于恢复期(P＜0.01);且肾炎组血清NO水平与血浆GMP-140含量呈显著正相关(r=0.61,P＜0.01).结论表明小儿急性肾炎中存在血小板活化,提示活化的血小板和NO可能共同参与了急性肾炎的病理过程.
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Na+-H+交换蛋白与肿瘤
胞膜离子交换蛋白Na+-H+交换泵(Na+-H+ exchanger,NHE)是存在于所有真核细胞的一种跨膜蛋白,是维持细胞内pH值(intracellular pH,pHi)在中性或偏碱性的重要膜蛋白,并涉及到细胞内外离子的跨膜转运、细胞体积及胞内渗透压的控制,是pHi调节的一种重要要机制之一.pHi稳定是维持细胞正常功能的前提,当细胞内出现酸化时,随着酸化程度的加深,细胞可出现凋亡和坏死.在一些细胞因子作用下,细胞发生增殖之前,通常会出现pHi增高.近年来研究发现,NHE在肿瘤细胞中的活性和mRNA表达水平明显增高,与肿瘤细胞的侵袭性生长和远处转移有着密切的关系.现将NHE的分型、分布、结构、活性调节、功能以及与肿瘤的关系作一综述.
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鼻咽癌中EB病毒LMP1基因的序列变异发生机制探讨
目的 检测贵州省鼻咽癌中EB病毒LMPl基因N-和C-末端区序列变异的热点,并探讨其产生的机制.方法 收集贵州省贵阳医学院有明确病理诊断的鼻咽癌患者鼻咽新鲜活检标本30例.采用巢式聚合酶链反应(PCR)扩增EB病毒LMP1基因N-和C-末端区,用XhO 1对N-末端区扩增产物进行酶切分析,从中选取2例患者N-末端区的扩增产物进行序列分析.同时检C-末端区扩增产物30 bp缺失的情况.结果30例鼻咽癌组织EB病毒LMP1基因C-末端区存在两种基因型:缺失型(即30 bp缺失)和野生型,其中病例组有40%的突变率,对照组有10%的突变率,差异有显著性(P<0.05).在本次研究中的30例鼻咽癌及随机收集贵阳医学院体格检查健康成人30例的外周血(EDTA抗凝)2 mL作对照组中EB病毒LMP1基因N-末端区都发生了突变,都存在原有酶切位点的缺失.结论鼻咽癌中EB病毒LMP1基因突变在鼻咽癌的发生发展中起重要的作用.
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变形链球菌表面蛋白遗传多态性与龋病发生关系的研究Ⅱ表面蛋白V区、P区编码基因序列的测定
目的:对不同粘附力变形链球菌临床分离株表面蛋白V区、P区编码基因进行序列测定.方法:实验菌株选自本实验室前期工作所获得的spaP-pv经AluI酶切后呈不同基因型的不同粘附力血清c型变形链球菌临床分离株.提取全菌DNA,经PCR扩增表面蛋白V区、P区编码基因spaP-pv(2 060～3 157 bp)后,进行序列测定. 结果:不同粘附力变链菌临床株spaP-pv经AluI酶切后呈a、b 2 种基因型的菌株测出的spaP-pv序列均有7个AluI酶切位点5′-AG↓CT- 3′.10株a型菌株序列除了几个碱基点突变外均相同,9株b型菌株序列亦如此.a型有2 个DNA片段与b型不同,经分析,这2 个变异片段均位于V区.结论:变链菌临床株表面蛋白粘附性能的差异可能是编码基因可变区域V区出现变异所致.
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变形链球菌表面蛋白和葡糖基转移酶基因疫苗免疫防龋动物实验:体质量影响研究
目的:了解变形链球菌基因疫苗单独及联合免疫对定菌鼠体质量的影响.方法:28 d龄Wistar大鼠36只,随机分为pcDNA3-pac组、pcDNA3-gtfB组、pcDNA3-pac联合pcDNA3-gtfB组、变形链球菌灭活全菌阳性对照组、pcDNA3空载体阴性对照组和PBS液空白对照组,进行3次双侧颌下腺腺周注射免疫, 建立定菌鼠模型及诱龋实验3个月,于实验开始和结束时测定体质量.结果:基因疫苗免疫组体质量与pcDNA3及PBS组无显著差异(P>0.05),而灭活全菌细胞免疫组体质量显著下降(P<0.01).结论: pcDNA3-gtfB和pcDNA3-pac对大鼠体质量无不良影响,较灭活全菌疫苗安全.
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小檗碱对兔红细胞膜流动性及膜蛋白荧光的影响
目的:研究小檗碱对细胞膜流动性及其膜蛋白荧光的影响.方法:以制备的兔红细胞膜为材料,1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene(DPH)为荧光探针,运用荧光偏振技术检测与小檗碱作用后兔红细胞膜流动性的变化,观察小檗碱与兔血红细胞膜蛋白作用后Tyr残基荧光强度的变化.结果:兔血红细胞膜与小檗碱作用后其荧光偏振P值发生了剂量依赖性的下降;小檗碱使兔血红细胞膜蛋白Tyr残基的荧光产生剂量依赖性的淬灭作用.结论:小檗碱在体外能有效提高细胞膜的流动性,可能与小檗碱多种心血管药理活性有关;小檗碱与膜蛋白的作用可能是膜流动性变化的引发机制.
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妊高征患者胎盘滋养细胞Fas及 Fas配体的表达
目的探讨妊娠高血压综合征(妊高征)患者胎盘滋养细胞Fas及 Fas配体的表达及意义.方法采用免疫组织化学法观察25例妊高征患者(妊高征组)胎盘Fas及 Fas配体的表达及其与妊高征病情及新生儿出生体重的关系,并与25例正常妊娠妇女(正常妊娠组)比较.结果 Fas及 Fas配体主要表达于胎盘绒毛合体滋养细胞及细胞滋养细胞的胞膜及胞浆内.与正常妊娠组比较,妊高征组胎盘Fas配体表达显著降低(P<0.05),且随妊高征病情加重表达水平逐渐降低.而妊高征组胎盘滋养细胞表达Fas的水平却显著增加(P <0.05),轻度、中度、重度妊高征患者胎盘Fas配体表达,差异有显著性.妊高征组胎盘Fas及 Fas配体的表达与新生儿出生体重均无明显相关性.结论妊高征患者胎盘滋养细胞Fas及 Fas配体表达失衡,通过免疫途径诱导胎盘滋养细胞发生级联凋亡反应,可能与妊高征的病因及病理过程有关.
