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抽动秽语综合征儿童的IL-1Ra基因多态性与执行功能
目的:探讨白介素1受体拮抗剂第2内含子86bp可重复多态性(IL-1Ra86bp VNTR)与汉族抽动秽语综合征儿童(TS)及执行功能的关系.方法:选取符合美国精神疾病诊断统计手册第4版TS诊断标准的儿童112例,健康对照71例.采用聚合酶链反应(PCR)等位基因分型技术对所有对象的IL-1Ra86bp多态位点进行测定,分析该位点与TS疾病的关联,同时采用Stroop色词测验(Stroop test)测定研究对象的执行功能.结果:全部112例TS组和54例单纯TS组的IL-1 Ra86bp位点基因型频率(54.0％,56.0％ vs.55.1％)和等位基因频率(77.0％,78.0％ vs.77.0％)与对照组相比差异无统计学意义(均P＞0.05).48例TS共病注意缺陷多动障碍(ADHD)组的IL-1Ra86bp长(L)位点基因型频率(79.0％vs.55.1％)和等位基因频率(90.0％ vs.77.0％)明显高于对照组(均P＜0.05).TS共病ADHD组L/L基因型的儿童C错误数多于对照组[(5.8±14.8)vs.(2.8±12.4),P ＜0.05].结论:IL-1Ra86bp基因多态性与共病ADHD的抽动秽语综合征可能存在关联,携带L/L基因型的抽动秽语综合征儿童执行功能可能较差.
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白介素-1受体拮抗剂对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡和caspase-3表达的影响
目的:观察白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)对脊髓损伤(SCI)后继发性神经细胞凋亡和caspase-3表达的影响.方法:60只SD大鼠,随机分为假手术组、脊髓损伤组、IL-1Ra治疗组和生理盐水对照组,每组15只.采用Allen's法建立大鼠急性SCI动物模型,IL-1Ra治疗组和生理盐水对照组于SCI后立即硬膜下腔内分别注射IL-1Ra(10μg/10μl)和等量生理盐水,于伤后24h以损伤为中心(假手术组取相应部位),切取长约8mm脊髓组织,用蛋白印迹法和免疫组化染色法检测caspase-3表达的变化;采用实时定量PCR法检测caspase-3mRNA的表达情况;用原位末端标记法(TUNEL)检测SCI后神经细胞凋亡情况.结果:SCI后24h,SCI组与假手术组比较受损伤的脊髓组织中caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05),且TUNEL阳性细胞明显增多(P＜0.01);IL-1Ra治疗组大鼠受损伤节段脊髓组织caspase-3表达及TUNEL阳性细胞数较生理盐水对照组)均明显减少(P＜0.01).结论:IL-1Ra治疗可减少急性SCI后脊髓组织中caspase-3的表达和神经细胞凋亡的发生.
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Alzheimer病患者脑脊液中炎前和抗炎细胞因子以及凋亡信号分子的变化
目的探讨炎前和抗炎细胞因子以及凋亡在阿尔茨海默病(AD)不同临床阶段神经病理损伤机制中的作用. 方法用夹心式酶联免疫吸附法测定轻、中、重度AD患者、血管性痴呆(VD)患者与正常老年人脑脊液中白介素-1 β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素1受体拮抗剂(IL-1ra)的水平;以蛋白印记法及激酶活性测定法检测半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达和活性.结果各AD组患者脑脊液中IL-1β、TNF-α的水平较其他组不同程度升高,而IL-1ra则不同程度降低.各AD组组间比较结果显示,随着痴呆程度的加重,IL-1β与TNF-α水平相应增高,IL-1ra却相应下降,其中重度与轻度AD比较差异有显著性(P<0.05);轻、中度AD尤其是中度AD患者caspase-3含量和活性较VD患者及正常老年人明显升高(P<0.05或P<0.01),重度AD患者caspase-3含量和活性虽显著高于正常老年人,但较之于轻、中度AD患者反呈下降趋势.相关分析显示,各AD患者脑脊液中炎前和抗炎细胞因子水平与caspase-3表达量和活性之间无显著相关.结论炎前和抗炎细胞因子表达失衡造成的级联反应在AD脑损害过程中起重要作用,过度凋亡可能是轻、中度AD患者神经元退变的主要原因之一,而在重度AD患者凋亡可能不再是其脑损害的主要方式.
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免疫组化研究白介素1和白介素1受体拮抗剂在人发育骨与软骨中的表达
为观察白介素1（IL-1）和白介素1受体拮抗剂（IL-1Ra）在人发育骨与软骨组织中的表达及分布，认识IL-1系统在人发育骨与软骨中的作用，用组织学及免疫组化技术，对临床经过石蜡包埋的人发育关节软骨组织进行定位定性检测，结果显示3月龄胚胎的软骨组织，IL-1β在肥大样改变的软骨细胞染色。在4～6月龄胎儿，生长板软骨细胞自增殖后期到肥大样改变，IL-1β染色阳性。骨骺软骨（未钙化）内新生髓腔周围软骨细胞及骨髓腔内成骨细胞IL-1β也呈阳性染色。IL-1Ra蛋白表达区域基本类似于IL-1β，但表达的量较多，区域分布较广泛。结果显示，IL-1和IL-1Ra可能在人发育骨与软骨组织中通过旁分泌及自分泌方式协同发挥作用。
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IL-1Ra和IL-10真核表达质粒载体的构建及其表达检测
目的:构建人IL-1Ra和人IL-10真核表达质粒载体并检测其表达.方法:用双酶切方法切取PCDI-IL-1Ra和PCDI-IL-10质粒中包含人IL-1Ra和人IL-10 CDS全长序列的cDNA片段,并分别连接到真核表达质粒pcDNA3.1上,然后用壳聚糖转染上述质粒到原代软骨细胞,RT-PCR检测其mRNA水平的表达.结果:成功将人IL-1Ra和IL-10 CDS全长序列的cDNA片段克隆到真核表达载体,mRNA水平检测到目的基因的表达明显提高.结论:真核表达质粒可以用于外源基因的原代软骨细胞导入和表达,为进一步的基因治疗研究提供依据.
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白介素1受体拮抗剂与呼吸系统疾病
细胞因子在多种肺疾病中起到重要作用.其中,白介素1(IL-1)通过介导炎症,免疫损伤及致纤维化作用在肺疾病的发展中扮演重要角色,而作为IL-1特异性的天然拮抗剂白介素1受体拮抗剂(IL-1RA)也越来越受到广泛重视.本文就IL-1RA和肺疾病的相关研究进展作一简要综述.
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IgA肾病、过敏紫癜性肾炎及微型多血管炎患者白介素1受体拮抗剂基因多态性分析
目的:通过对IL-1受体拮抗剂(IL-1ra)基因多态性的分析,探讨IgA肾病(IgAN)的异质性以及新月体型IgAN与系统性小血管炎之间的联系.方法:随机选取200例IgAN患者、90例过敏紫癜性肾炎(HSPN)患者、45例微型多血管炎(MPA)患者及100例健康志愿者.依据解放军肾脏病研究所拟定的分型标准,将IgAN分为六型.PCR法检测样本IL-1ra基因型.分析IL-1ra基因多态性与IgAN患者临床病理特征的联系及其在不同类型IgAN患者中的分布.分析IgAN总体、新月体型(Cres.)IgAN、HSPN、MPA不同组别间IL-1ra基因多态性的异同.结果:(1)IgAN、MPA患者IL1RN*2等位基因频率和携带率与正常对照组无统计学差异,HSPN患者IL1RN*2频率和携带率显著高于正常对照组(21.1% vs 12.0%,P＜0.05;40.0% vs 24.0%,P＜0.05).(2)携带IL1RN*2的IgAN患者反复肉眼血尿发生率、肉眼血尿发作间期尿红细胞≥50万/ml发生率、新月体比例、细胞型/纤维细胞型新月体比例和毛细血管袢坏死发生率显著高于IL1RN*2不携带组(P＜0.05).(3)Cres.IgAN的IL1RN*2携带率(56.3%),显著高于其它类型IgAN及正常人群.(4)HSPN患者IL1RN*2携带组新月体比例、细胞型/纤维细胞型新月体比例以及毛细血管袢坏死发生率显著高于不携带组(P＜0.05).新月体比例≥15%组IL1RN*2携带率显著高于新月体比例＜15%组.(6)新月体型IgAN患者IL1RN*2携带率,无论与HSPN总体还是与新月体比例≥15%HSPN患者相比,均无统计学差异;并且与后者数值非常接近(56.3% vs 57.7%).结论:IL1RN*2等位基因与Cres.IgAN和HSPN的发生均有关.IL1RN*2高携带率可能是Cres.IgAN和HSPN共同的遗传背景之一.
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白介素1受体拮抗剂对紫外线辐射的成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶1的影响
目的探讨白介素1受体拮抗剂(IL-1Ra)对紫外线(UV)辐射的成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶1(MMP-1)的影响.方法模拟环境中UV对人体皮肤的作用方式,UVA辐射的人成纤维细胞换以UVB辐射的HaCaT培养上清继续培养.用ELISA方法检测不同处理后成纤维细胞培养上清中的MMP-1;用实时荧光定量RT-PCR方法(荧光染料掺入法)检测IL-1Ra处理后成纤维细胞C-Jun、C-Fos及内参照GAPDH的mRNA表达变化.结果UVA(10 J/cm2)辐射的成纤维细胞在加入不同剂量UVB(0、1、5、10、15mJ/cm2)辐射HaCaT的培养上清液后,其MMP-1的分泌呈增高趋势.与UVB 0 mJ/cm2比较,于15 mJ/cm2时差异有统计学意义(f=8.413,P=0.014).而IL-1Ra以剂量依赖方式抑制成纤维细胞的MMP-1分泌.统计C-Jun和C-Fos的初始拷贝数以及其与GAPDH初始拷贝数的比值,结果显示IL-1Ra以剂量依赖方式抑制成纤维细胞C-Jun的mRNA表达,对C-Fos的mRNA表达则无显著性影响.本实验应用实时荧光定量RT-PCR,其标准曲线均有良好相关性,熔解曲线证实扩增产物是特异的.结论UVB辐射的HaCaT培养上清液能促进UVA辐射的成纤维细胞分泌MMP-1.IL-1Ra通过抑制C-Jun的mRNA表达降低成纤维细胞的MMP-1分泌.
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白介素1受体拮抗剂对兔实验性增生性玻璃体视网膜病变的抑制作用
目的:评价白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1 receptor anti-gonist,IL-1Ra)对实验性增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的抑制作用.方法:32只兔眼分为对照组、IL-1Ra组、地塞米松组和联合用药组(每组8眼),将2.5×105个视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)注入玻璃体腔内建立PVR模型,各组分别给予IL-1Ra和地塞米松并联合用药,观察PVR的形成,计算各组PVR的发生率.结果:第4周末对照组100%发生视网膜脱离,IL-1Ra组62.5%发生视网膜脱离,地塞米松组有50.0%发生视网膜脱离,而联合用药组25.0%发生牵拉性视网膜脱离.联合用药组比所有其他组的视网膜玻璃体病变轻,视网膜脱离的面积也较小.结论:IL-1Ra可以降低兔实验性PVR的发生率,IL-1Ra与地塞米松联合应用能够增加地塞米松的作用效果.
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白介素1α和白介素1受体拮抗剂对培养的Graves'眼眶成纤维细胞增殖作用的影响
目的探讨白介素1α(IL-1α)和白介素1受体拮抗剂(IL-1ra)对培养的Graves'眼病(GO)患者眼眶成纤维细胞增殖的影响.方法以下述方法分别处理培养的GO和正常人眼眶成纤维细胞:不同浓度的IL-1α刺激成纤维细胞48 h;30 U/ml的IL-1α刺激成纤维细胞24～72 h;不同浓度的IL-1ra或/和30 U/ml的IL-1α处理成纤维细胞48 h;75 ng/ml的IL-1ra和30 U/ml的IL-1α处理成纤维细胞24～72 h.用MTT法测定成纤维细胞增殖的刺激或抑制率.结果IL-1α以剂量和时间依赖的方式刺激GO和正常人眼眶成纤维细胞增殖,而IL-1ra以剂量和时间依赖的方式抑制IL-1α诱导的GO和正常人眼眶成纤维细胞的增殖活性,刺激和抑制作用在GO和正常人眼眶成纤维细胞之间无明显差异.结论IL-1ra是IL-1α诱导的人眼眶成纤维细胞增殖的强有力的抑制剂,可望用于GO的治疗.
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阿尔茨海默病不同临床阶段脑脊液中炎前和抗炎细胞因子水平的变化
目的:观察不同临床阶段阿尔茨海默病(AD)患者脑脊液中炎前和抗炎细胞因子水平与神经病理损伤的关系.方法:用夹心式酶联免疫吸附法测定轻、中、重度AD患者,血管性痴呆(VD)患者与正常老年人脑脊液中白介素-1 β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNFα)和白介素1受体拮抗剂(IL-1ra)的水平.结果: 各AD组患者脑脊液中IL-1β、TNFα的水平较其他组有不同程度升高,而IL-1ra则有不同程度降低,各AD组组间比较,随着痴呆程度的加重,IL-1β与TNFα水平相应增高,IL-1ra却相应下降,其中重度AD患者这种改变与轻度AD患者比较差异有显著性( P＜0.05).结论:炎前和抗炎细胞因子表达失衡造成的级联反应在AD脑损害过程中起重要作用.
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脂多糖刺激脐带间充质干细胞上调 IL-1Ra分泌的研究?
目的：探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活 Toll 样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)对脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)分泌白介素1受体拮抗剂(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra)的影响。方法采用组织块法从脐带华通胶组织中分离培养 UC-MSCs；流式细胞术检测UC-MSCs表面标志物 CD14、CD34、CD29和 CD105的表达；TLR4配体 LPS 以不同剂量和时间刺激 UC-MSCs,采用 qPCR 法和 ELISA 法检测 IL-1Ra 的 mRNA 和蛋白质表达水平。结果原代组织培养7~10 d,组织周边有贴壁细胞爬出,呈长梭形；UC-MSCs 表面标志物 CD29和 CD105呈阳性表达,而 CD14和 CD34呈阴性表达；LPS 刺激 UC-MSCs 后,IL-1Ra 在基因及蛋白质水平的表达均显著增加,差异有统计学意义(P <0.05),并呈剂量与时间依赖性。结论LPS 刺激 UC-MSCs 可上调 IL-1Ra 的分泌。
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痴呆患者血清和脑脊液中炎前和抗炎细胞因子的变化
目的:研究炎前和抗炎细胞因子在不同痴呆患者血清和脑脊液中的变化并探讨其临床意义. 方法:2003-09/2005-08我院和台山市人民医院神经科就诊的70例老年痴呆患者作为观察对象,其中阿尔茨海默病(AD)30例、混合性痴呆(MD)15例、血管性痴呆(VD)25例. 用夹心式酶联免疫吸附法测定各组老年人血清和脑脊液中白介素-1β(IL-1β),白介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子α(TNFα)和白介素1受体拮抗剂(IL-1ra)的水平. 结果:各痴呆组患者脑脊液中TNFα的水平较正常老年人有不同程度升高,而IL-1ra则不同程度降低(P＜0.05或P＜0.01);AD组患者脑脊液中IL-1β水平高于对照组(P＜0.05),IL-6含量较对照组却无增高;VD组患者脑脊液中IL-6水平虽显著高于对照组(P＜0.05),但IL-1β含量与对照组相比无增高; MD组患者IL-1β,IL-6水平较对照组均有增高(P＜0.01). 各痴呆组血清中IL-1β,IL-6,TNFα和IL-1ra的水平与正常老年人相比无差异. 相关分析显示不同痴呆患者血清与其相对应的脑脊液中炎前和抗炎细胞因子水平之间无相关. 结论:痴呆患者脑内炎前和抗炎细胞因子的变化可能是其神经病理损害因素.
