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eEF1A1基因敲除对Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及其机制探讨
本研究旨在探讨真核翻译延长因子1A1(eEF1A1)表达沉默对人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株Jurkat增殖、凋亡的影响及其作用机制.应用实时PCR法和Western blot法分别别检测Jurkat细胞和3例健康成人外周血单个核细胞(PBMNC)中eEF1A1 mRNA和蛋白的表达.构建eEF1A1-shRNA慢病毒并感染Jurkat细胞,另设空白和阴性对照组,应用实时PCR法和Western blot法分别检测细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达；应用MTT法、Annexin V-APC标记法、DNA倍体法分别检测细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期,Western blot法检测细胞PI3K/Akt信号通路相关信号分子的表达.结果表明,Jurkat细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达水平明显高于健康成人PBMNC中的表达(P＜0.01,P＜0.05)；构建的eEF1A1-shRNA慢病毒高效沉默Jurkat细胞eEF1A1的表达.与阴性对照组相比,eEF1A1-shRNA组Jurkat细胞增殖能力明显下降,凋亡明显增多,细胞周期被阻滞于G0/G1期,p-Akt、NF-κB、p-NF-κB、mTOR、p-mTOR蛋白的表达明显下调.结论:eEF1A1在T-ALL细胞中可能具有潜在的致癌作用,其表达沉默可有效抑制Jurkat细胞的增殖并诱导凋亡,其机制可能与下调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.
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siRNA抑制真核翻译延长因子1 A1表达对结肠癌细胞凋亡和药物敏感性的影响
目的：研究特异性siRNA抑制结肠癌细胞HCT－116真核翻译延长因子1A1（eEF1A1）基因及其对结肠癌细胞HCT－116凋亡和药物敏感性的影响。方法设计针对人源结肠癌细胞HCT－116 eEF1A1基因的siRNA，转染至对数生长期的结肠癌细胞HCT－116，分别用反转录－聚合酶链反应和蛋白质印迹法鉴定eEF1 A1基因沉默的效果，用流式细胞仪检测eEF1 A1基因表达抑制对结肠癌细胞HCT－116凋亡的影响，用噻唑蓝法（MTT）检测eEF1A1基因表达抑制后结肠癌细胞HCT－116药物敏感性的变化。结果 eEF1A1靶向siRNA能显著降低结肠癌细胞HCT－116中eEF1A1的表达，eEF1A1表达抑制后结肠癌细胞HCT－116的增值能力显著低于对照组（P＜0.05），5－氟尿嘧啶和顺铂对eEF1 A1表达抑制的结肠癌细胞 HCT －116的半抑制浓度显著低于对照组（P＜0.05）。结论 eEF1A1靶向siRNA能有效抑制eEF1A1基因表达，并能协同增强5－氟尿嘧啶和顺铂对结肠癌细胞HCT－116的杀伤作用和诱导凋亡作用。
关键词： siRNA 真核翻译延长因子1A1 结肠癌细胞HCT-116 凋亡 药物敏感性
