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PDLLA/HA接骨系统固定兔下颌骨骨折愈合过程中外源性rhBMP-2的作用
探讨rhBMP-2在PDLLA/HA接骨系统固定兔下颌骨骨折愈合过程中的作用.对36只新西兰白兔实施骨折模型,采用PDLLA/HA接骨系统、PDLLA/HA接骨系统+胶原膜、PDLLA/HA接骨系统+含rhBMP-2的胶原膜3种不同方法,进行兔下颌骨骨折处的固定.在术后2周、4周、8周、12周,进行大体观察、X线观察和组织病理学的分析,对3组结果进行比较,并考察rhBMP-2膜在PDLLA/HA接骨系统固定兔下颌骨骨折愈合过程中的作用.各组动物伤口均Ⅰ期愈合,骨折无移位,咬合正常;X线显示,术后2～12周,骨折线逐渐由清晰变为模糊后消失.但加入rhBMP-2组比另两组在同一时间段骨折线密度更高,在第2周、4周、8周显示,rhBMP-2组愈合加快,HE染色显示,在早期(2～4周)rhBMP-2组即有大量成骨细胞和成软骨细胞及新生骨样组织,12周rhBMP-2组骨折线不可见,骨小梁走向趋于规则.不含rhBMP-2的两组骨小梁呈网状,不如rhBMP-2组规则,骨折线模糊.PDLLA/HA接骨系统具有良好的固定骨折和使骨折愈合的效果,而rhBMP-2膜与PDLLA/HA接骨系统联合使用来固定兔下颌骨骨折可提高愈合速度,具有很好的促骨愈合效果,为临床上解决固定期过长的问题提供了一种新的途径.
关键词： rhBMP-2 下颌骨 兔 PDLLA/HA接骨系统 -
手术联合口服中药膏方治疗胫骨骨折不愈合的疗效观察
目的 观察中医三期辩证中药膏方联合手术治疗胫骨骨折不愈合的临床疗效.方法 回顾性分析自2012-09-2016-11诊治的21例胫骨骨折不愈合,清理骨折断端后更换内固定材料,植入混有重组骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)的自体髂骨,同时口服中药膏方治疗.结果 21例均获得随访,随访时间平均20.2(18～24)个月.术后6个月疗效评定:15例治愈,4例显效,2例有效;术后9个月疗效评定:18例治愈,2例显效,1例有效;术后12个月疗效评定:20例治愈,1例显效;术后18个月时所有患者均治愈,骨折获得骨性愈合.结论 更换合适的内固定材料、植入混有rhBMP-2的自体髂骨同时口服三期中药膏方治疗胫骨骨折不愈合可取得良好的临床疗效.
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不同浓度rhBMP-2对MC3T3-E1细胞增殖、ALP活性及成骨分化的影响
目的 研究不同浓度rhBMP-2对MC3T3-E1细胞增殖、ALP活性及成骨分化的影响规律.方法 MC3T3-E1细胞接种到培养板24 h后,试验组分别加入1.25、2.5、5、10μg/ml的rhBMP-2进行药物干预,对照组加入全培.试验组应用CCK-8法检测细胞增殖活性,PNPP法检测细胞ALP活性,RT-PCR法检测成骨标志蛋白mRNA的表达情况.结果 rhBMP-2浓度为2.5 μg/ml时开始促进细胞的增殖(P＜0.05),rhBMP-2浓度为5μg/ml时促进作用达到峰值(P＜0.05).rhBMP-2浓度为2.5 μg/ml时ALP活性显著提高(P ＜0.05);rhBMP-2浓度为5μg/ml和10 μg/ml时,ALP活性较浓度为2.5 μg/ml时继续升高,但差异无统计学意义(P＞0.05).ALP、COL1-α以及转录因子RUNX-2的mRNA含量均在加入浓度5μg/ml rhBMP-2后明显升高(P＜0.05),继续加大rhBMP-2浓度,mRNA含量没有明显增加.结论 在研究范围内,rhBMP-2对MC3T3-E1的影响呈浓度依赖性.
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rhBMP-2诱导脂肪成体干细胞向成骨细胞分化的量效作用
目的 探讨体外条件下rhBMP-2诱导脂肪成体干细胞(adipose-derived adult stem cells,ADASCs)向成骨细胞分化和增殖的情况,并观察其量效关系.方法 从成年兔颈后部获取脂肪组织,采用酶消化法分离并培养脂肪成体干细胞.稳定传代后,用不同浓度rhBMP-2对ADASCs进行诱导分化,采用碱性磷酸酶染色及Ⅰ型胶原免疫组织化学染色进行成骨细胞鉴定,采用碱性磷酸酶活性测定及MTT比色法进行分化和增殖活性比较.结果 碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原免疫组织化学染色为阳性;当rhBMP-2浓度在100～400 ng/ml时,各组碱性磷酸酶活性提高明显(P＜0.05),在400 ng/ml以上各组则无明显差异(P＞0.05);当rhBMP-2浓度在800 ng/ml以下时,各组增殖活性无明显差异(P＞0.05),在800 ng/ml以上则存在明显的抑制作用,各组存在明显差异(P＜0.05).结论 研究表明,在体外条件下rhBMP-2能诱导脂肪来源干细胞向成骨细胞分化;并且当其浓度在400～800 ng/ml时,能促进脂肪来源干细胞的增殖和分化.
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新型rhBMP-2载体20%β-TCP/PDLLA修复兔桡骨缺损的研究
目的探讨新型rhBMP-2载体20%β-TCP/PDLLA骨修复能力及特点.方法采用浇铸盐析技术制备三维多孔20%β-TCP/PDLLA、PDLLA并与rhBMP-2复合.30只兔制作双桡骨骨缺损,随机分为3组分别植入PDLLA/rhBMP-2、20%β-TCP/PDLLA/rhBMP-2材料及不植入材料作为空白对照组,在2、4、8、12周处死兔子,行大体观察、X线检查、组织学切片观察、电镜观察、及生物力学检查.结果12周时,对照组骨缺损两端髓腔闭合骨缺损区无骨长入,植入材料PDLLA/rhBMP-2、20%β-TCP/PDLLA/rhBMP-2组骨缺损均已修复但抗弯强度有明显差别:20%β-TCP/PDLLA/rhBMP-2＞PDLLA/rhBMP-2.结论20%β-TCP/PDLLA是理想的rhBMP-2载体,其结构、降解产生微环境及力学特征有利于rhBMP-2发挥作用,有利于骨组织细胞长入.
关键词： β-TCP/PDLLA PDLLA rhBMP-2 骨缺损 -
局部注射唑来膦酸和 rhBMP-2对兔骨质疏松模型血清生化指标及骨小梁生长速率的影响
目的：研究局部注射唑来膦酸和rhBMP-2对兔骨质疏松模型血清生化指标及骨小梁生长速率的影响。方法30只5月龄雌性新西兰大白兔，随机选取24只摘除双侧卵巢制造骨质疏松模型，另外6只切开暴露卵巢后即关腹，作为假手术对照组。造模成功后，24只骨质疏松兔按注射药物不同分为BMP组（rhBMP-2）、ZOL组（唑来膦酸）、B＋Z组（rhBMP-2＋ZOL）、空白对照组（生理盐水）及假手术组，每组6只动物。分别在注射后当天、2周、4周、6周、8周、10周、12周，由兔耳缘静脉取血，分离血清，使用相应试剂盒检测血清碱性磷酸酶（ ALP）、抗酒石酸酸性磷酸酶（ TRACP）活性；同时应用四环素-钙黄绿素荧光标记在第6周、第12周处死取材，观察并测量骨小梁生长速率。结果①注射后第4周，BMP、B＋Z组ALP活性均明显高于ZOL组和NON组（P＜0.05）；从第6周开始，BMP与B＋Z组的ALP活性与假手术组均无明显差异（P＞0.05）；②在第8、10周，B＋Z组TRACP活性明显低于假手术组（ P＜0.05）；ZOL和B＋Z组TRACP活性较早即开始下降，并且与BMP组相比下降更快（P＜0.05）。③BMP组骨小梁生长速率在各个时间点均明显高于其他三组（P＜0.05）。结论 rhBMP-2＋ZOL联合应用，能够更好地抑制破骨细胞的骨吸收作用，而rhBMP-2则能够增强成骨细胞的成骨作用，提高骨小梁的生长速率。
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重组人骨形态发生蛋白-2联合后椎弓根螺钉系统固定加椎间植骨融合治疗退变性腰椎滑脱的效果
目的 探讨重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)联合后椎弓根螺钉系统固定加椎间植骨融合(PLIF)在退变性腰椎滑脱中的疗效分析.方法 回顾性分析2015年5月～2016年5月武汉大学人民医院收治的50例退变性腰椎滑脱患者的临床资料,将其分为试验组30例采用rhBMP-2联合PLIF手术,对照组20例采用单纯PLIF手术.对患者术前及术后随访测量的Prolo评分、滑脱率、奥斯沃斯特里功能障碍指数(ODI)、视觉疼痛模拟评分(VAS)及腰椎融合率进行统计学分析.结果 术后3个月、6个月两组患者ODI、VAS评分均低于术前(P＜0.05),且试验组均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).术后3个月、6个月试验组腰椎植骨融合率均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).术后两组滑脱率低于术前(P＜0.05),Prolo评分高于术前(P＜0.05);且术后试验组滑脱率低于对照组(P＜0.05),Prolo评分高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PLIF是治疗退变性腰椎骨滑脱较为有效合理、简单易行的方法,联合使用rhBMP-2能提高手术疗效,表现为提高术后Prolo评分,降低术后ODI脊柱评分和VAS疼痛模拟评分,降低术后滑脱率和提高腰椎植骨融合率等,近期预后佳,值得临床上推广.
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胶原蛋白海绵复合BMP-2修复兔耳软骨缺损的实验研究
目的 探讨以胶原蛋白海绵为载体,复合重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)植入兔耳软骨损体内诱导软骨膜再生软骨的效果.方法 选用日本大耳白兔9只,随机将兔分为3组,分别完整去除1 cm×1cm软骨,完整保留软骨膜.A组植入胶原蛋白海绵组、B组植入含0.5mg/ml的rhBMP-2/胶原蛋白海绵复合物、C组不植入任何材料.术后4、8、12周分批处死动物,取材,去除软骨膜观察新生软骨情况、面积;通过HE染色、Masson染色和醛品红染色,观察标本中细胞浸润和分化生长情况、新生软骨情况和弹力纤维变化和生成情况.采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图像分析仪测定新生软骨的面积.结果 组织学评分A组、B组和C组在各个时期均存在显著性差异,有统计学意义(P<0.01).两个实验A、B组4、8、12周比较差异有统计学意义(P<0.01),同一时间点两实验组间比较差异均无统计学意义(P>0.05).新生软骨面积,胶原蛋白海绵组、rhBMP-2/胶原蛋白海绵复合物组、空白对照组像素分别为1452±549.8、1962±524.4、1197±496.2.方差分析,三组结果差异有统计学意义(P<0.05).结论 rhBMP-2能促进促进软骨膜处的软骨再生.胶原蛋白海绵可作为rhBMP-2安全有效的载体,同时为软骨膜再生软骨提供条件,二者复合体的应用为软骨切取术后的修复软骨缺损提供了一种新方法.提示胶原蛋白海绵有利于软骨膜再生的作用.
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中药淫羊藿与RHBMP-2干预股骨干骨缺损模型家兔骨愈合的比较
目的：探讨中药淫羊藿与人重组骨形成蛋白-2（RHBMP-2）干预股骨干骨缺损模型家兔骨愈合的疗效比较。方法将40只实验动物随机分为淫羊藿组和RHBMP-2组，每组各20只，将40只实验动物左侧股骨干处造成1.5cm长的骨缺损，RHBMP-2组在缺损处注入RHBMP-2，淫羊藿组不植入任何材料，术后给予淫羊藿组动物淫羊藿煎液喂养，RHBMP-2组以等剂量的生理盐水喂养，术后连续喂养第8、12、16周采用Lane-Sandhu法X线评分。结果对两组动物术后第8、12、16周采用Lane-Sandhu法X线评分，淫羊藿组动物评分结果明显高于RHBMP-2组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论中药淫羊藿干预股骨干骨缺损模型家兔骨愈合疗效较好，值得推广应用。
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rhBMP-2/聚乳酸与聚乙醇酸共聚物载药微球的制备及成骨活性研究
目的制备一种具有良好降解性和成骨活性可注射的rhBMP-2载体材料.方法采用复乳-溶剂蒸发技术制备携载rhBMP-2的聚乳酸与聚乙醇酸共聚物(PLGA)微球.测定材料的制备参数及其特性,包括材料的形貌、载药率、释药速度,并将载药微球植入鼠股部肌袋,通过X线、组织学评价载体材料的异位成骨能力.结果载药微球粒径为(253±64)μm,载药率0.52%±0.14%,载药微球rhBMP-2体外释放24 h时为15.2%±0.8%,随后呈持续缓慢释放,28 d时总计达48.6%±5.3%.载药微球植入鼠股部肌袋4周,材料周围有明显的骨形成.结论载有rhBMP-2的PLGA微球具有良好的缓释效果和生物活性,是一种较为理想的生长因子载体材料和释放系统.
关键词： 聚乳酸与聚乙醇酸共聚物 rhBMP-2 载药微球 异位成骨能力 -
rhBMP-2/无定形磷酸钙纳米缓释微粒成骨活性的实验研究
目的 探讨无定形磷酸钙(ACP)对rhBMP-2的缓释作用,检测rhBMP-2/ACP纳米缓释微粒的成骨活性.方法 用扫描电镜观察已制备rhBMP-2/ACP缓释微粒的大小、形态;测定rhBMP-2的体外释放情况并描绘曲线:用MTT法检测缓释微粒对兔骨髓间充质干细胞(MSC)增殖情况的影响:用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞ALP活性以反映缓释微粒对其分化的影响,并与ACP的作用进行比较:将缓释微粒植入大鼠股部肌袋,通过X线、组织形态学观察评价缓释微粒的异位成骨能力.结果 缓释微粒大小为100nm左右,具有典型的无定形球形面貌.开始时为快速释放期,随后呈缓慢持续释放.缓释微粒能显著促进MSC的增殖和分化,植入大鼠股部肌袋12周,材料大部分降解,有明显的骨形成.结论 ACP可作为rhBMP-2合适的缓释载体材料,生成的纳米缓释微粒具有良好的降解性能和成骨活性.
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rhBMP-2、胶原、珊瑚复合人工骨植入智齿牙槽窝的临床研究
目的研究重组人骨形成蛋白(rhBMP-2)、胶原、珊瑚复合人工骨在修复口腔颌面部骨缺损和整复颌面畸形的作用.方法将rhBMP-2、胶原、珊瑚复合人工骨植入阻生智齿拔除后的牙槽窝内,并设单纯珊瑚和空白对照组,术后进行临床和X线检查,记录邻近的第二磨牙远中牙槽嵴的高度.结果术后12周复合骨组牙槽窝骨缺损和牙槽嵴高度均得到良好的恢复,珊瑚骨组得到较好的恢复,而空白对照组结果不明显.结论rhBMP-2、胶原、珊瑚复合人工骨植入智齿牙槽窝可较好地修复牙槽窝骨缺损及邻近的第二磨牙远中牙槽骨缺损.
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rhBMP-2聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微球缓释系统对骨髓间充质干细胞的生物学效应
目的制备rhBMP-2聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微球缓释系统,检测其对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的生物学效应.方法采用改良的乳化溶液聚合法制备rhBMP-2纳米微球;采用MTT法检测微球对BMSCs的增殖状况的影响;碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测细胞ALP活性以反映微球对其分化状况的影响,并与单纯rhBMP-2的作用进行比较.结果该微球缓释系统有生物活性,能显著促进BMSCs的增殖及分化,并呈剂量依赖性.其效应高于单纯施加rhBMP-2的效应.结论在组织工程技术中应用生长因子缓释系统的作用明显优于单纯生长因子的作用.
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凝胶型E基质在大鼠脊柱后外侧融合中的应用
背景:重组人骨形态发生蛋白(recombinant human bone morphogenetic protein,rhBMP)的骨诱导能力已在各种动物模型和临床试验中得到验证.目的:利用大鼠脊柱后外侧融合模型,分析凝胶型E基质作为rhBMP-2的新型载体在脊柱后外侧融合中的作用.方法:建立大鼠后外侧融合模型,105只Lewis雄性大鼠在相同条件下分别在L4-5横突间植入可吸收明胶海绵复合不同质量的rhBMP-2,对加或不加凝胶型E基质进行分组观察.结果及结论:10 μg和3 μg rhBMP-2两组融合率100%,1,0.5,0.1 μg rhBMP-2组的融合率分别是40%,10%,0%.加E基质的0.5 μg以上的rhBMP-2组全部融合,而0.1,0.05 μg rhBMP-2组未发现融合迹象.Micro-CT扫描提示3 μg rhBMP-2复合明胶海绵加E基质与10 μg rhBMP-2复合明胶海绵组融合节段形成的新生骨骨量相似,而0.1,0.05 μg rhBMP-2不管有无E基质,都无新骨形成.说明应用E基质作为载体能明显提高rhBMP-2在脊柱后外侧的融合成功率,但当rhBMP-2的剂量过小时,使用E基质做载体也不能达到预期的脊柱融合.
关键词： 凝胶型E基质 重组人骨形态发生蛋白 rhBMP-2 脊柱后外侧融合模型 新生骨 -
重组人骨形态发生蛋白2缓释微球的制备与评价
目的:针对重组人骨形态发生蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2)在体内半衰期短、易被稀释代谢的问题,探讨利用聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)制备载rhBMP-2微球的可行性和制备工艺,并观察其载药、释药特性.方法:①采用W/O/W型复乳化-溶剂挥发技术制备rhBMP-2/PLGA缓释微球,并对微球的粒径和形态、包封率和载药量,体外释放性质进行测定.②异位成骨实验:昆明小鼠12只,在右侧大腿股内侧肌袋内植入含rhBMP-2的50 mg PLGA微球,4周后取材,观察成骨情况以初步检测微球中的蛋白质活性.结果:①rhBMP-2/PLGA缓释微球形态良好,粒径主要集中在50～60 μm,包封率为(37.52±4.31)%,载药率为(5.12±1.32)%.②微球的释放存在突释,7 d内释放的药物量超过40%,大约90%的药物量于42 d内释放完全.③载药微球植入鼠股部肌袋4周,材料周围有明显的骨形成.结论:制备的rhBMP-2/PLGA微球可以缓慢释放有活性的rhBMP-2,具有临床应用的可行性.
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新型含重组人骨形态发生蛋白2骨修复材料的制备及生物学评价
背景:含有重组人骨形态发生蛋白2的骨修复材料(骨优导)已经作为国内第1个Ⅲ类医疗器械注册并获得国家食品药品监督管理局(SFDA)的批准.目的:制备骨修复材料(骨优导),并对其进行生物学评价.设计:分组对比,多角度评估观察实验,于2008-01/07在杭州华东医药集团投资有限公司实验室进行.材料:骨修复材料(骨优导)由杭州华东医药集团投资有限公司提供,是在无菌的洁净车间内,采用基因工程方法,用大肠杆菌发酵技术大规模生产重组人骨形态发生蛋白2,然后与载体材料混合制备得到.方法:根据GB/T 16886.12-2005中的规定制备骨修复材料(骨优导)浸提液,按照医疗器械生物学评价方法进行了一系列体内外试验,包括成骨试验、无菌检验、细胞毒性试验、植入试验、热原试验、致敏试验和遗传毒性试验,评价骨修复材料(骨优导)的生物学特性.主要观察指标:各项体内外试验的结果.结果:骨修复材料(骨优导)符合无菌要求,无细胞毒性、无致热原性、无遗传毒性、无致敏性、无组织刺激性,具有良好的组织相容性,且具何异何诱导成骨能力.结论:骨修复材料(骨优导)符合医疗器械骨科植入材料的生物学评价的各项要求.
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不同剂量rhBMP-2对兔下颌骨牵引成骨区新骨生成的影响及其OPG表达
目的 研究不同浓度rhBMP-2在不同时间对兔下颌骨牵引成骨区新骨生成的影响及牵引区新骨中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)的表达.方法 在48只成年大耳白兔的一侧下颌骨前部行骨切开术,分别将空白胶原、rhBMP-21.5 mg和rhBMP-2 3 mg胶原复合物植入下颌骨切开处,用牵引器延长一侧下颌骨4mm,稳定期第1、3、7、14天,分别处死各组动物,取牵引区新生骨痂行OPG免疫组化染色.结果 下颌牵引延长后牵引间隙均有新骨形成,免疫组化染色OPG主要定位于成骨细胞的胞浆中.在同一时间内,应用rhBMP-2组较对照组有显著性差异(P<0.05),且rhBMP-23 mg剂量组较rhBMP-2 1.5 mg剂量组有显著性差异(P<0.05).结论 动物实验表明,rhBMP-2能促进兔下颌骨牵引成骨区新骨的生成并具有浓度依赖性.
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人骨形成蛋白纳米微粒的制备与生物活性鉴定
目的制备重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微球缓释系统,检测其对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的生物学效应.方法采用改良的乳化溶液聚合法制备rhBMP-2纳米微球;采用MTT法检测微球对BMSCs增殖的影响;碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测细胞ALP活性.结果该微球缓释系统具有一定的生物活性,可促进BMSCs的增殖,并呈剂量依赖性.其效应高于单纯施加rhBMP-2的效应.结论纳米材料是一种较好的缓释系统,作用效果优于单纯使用rhBMP-2.
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rhBMP-2和FGF-2对成骨细胞矿化及ENPP1、ANK、TNAP表达的影响
目的:研究重组人骨形态发生蛋白(rhBMP-2)和重组人碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)对成骨细胞(MC3T3-E1 Subclone 1 4)矿化及焦磷酸合成酶(ENPP1)、跨膜蛋白(ANK)和组织非特异性碱性磷酸酶(TNAP)表达的影响,探讨生长因子影响细胞矿化的机制.方法:将MC3T3-E1 Subclone 14细胞分成3组:成骨细胞诱导液(0S)成骨诱导培养组(对照组),OS与rhBMP-2培养组(rhBMP-2组),OS与FGF-2培养组(FGF-2组).培养12 d后进行ALP活性检测及茜素红染色,实时荧光定量PCR检测矿化相关基因ENPP1、ANK和TNAP表达的差异.结果:rhBMP-2组ALP活性以及钙化结节明显高于对照组,ENPP1、ANK和TNAP均高表达;FGF-2组ALP活性以及钙化结节明显低于对照组,ENPP1和ANK呈高表达,TNAP低表达.结论:rhBMP-2和FGF-2通过调节ENPP1 、ANK和TNAP的表达变化来影响骨的矿化.
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rhBMP-2、胶原、珊瑚复合人工骨临床研究
目的探讨rhBMP-2/胶原/珊瑚复合人工骨临床应用的骨修复能力。方法将rhBMP-2/胶原/珊瑚复合人工骨植入阻生智齿拔除后的牙槽窝内，并设单纯珊瑚和空白对照组，术后进行临床和X线检查，记录邻近的第二磨牙远中牙槽嵴的高度和第二磨牙的松动度。结果术后12周复合骨组牙槽窝骨缺损和牙槽嵴高度均得到良好的恢复，珊瑚骨组得到较好的恢复，而空白对照组结果不明显。结论 rhBMP-2/胶原/珊瑚复合人工骨植入智齿牙槽窝可较好的修复牙槽窝骨缺损。这种新型的复合骨可能是临床应用的一种较理想的生物性植骨材料。
