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恶性疟原虫Pf332分子DBL、TM和WR功能区蛋白质的转运分析
目的 分析恶性疟原虫Pf332分子的DBL、TM和WR 3个功能区蛋白质在虫体内的表达和分布以及与肌动蛋白的结合情况,探讨其在感染红细胞内的转运过程及功能,为进一步研究疟原虫侵入机制及筛选红内期疫苗候选抗原提供理论依据.方法 将构建融有GFP基因的恶性疟原虫Pf332分子的Pf332DBL-GFP、Pf332TM-GFP和Pf332WR-GFP重组质粒分别转染到3D7虫株恶性疟原虫,通过活体荧光实时观察DBL、TM和WR蛋白质表达及其在染虫红细胞内的分布,运用间接免疫荧光共定位方法观察蛋白质DBL、TM和WR与肌动蛋白的结合情况.结果 转染试验表明,重组DBL-GFP、TM-GFP和WR-GFP基因能在虫体中正常表达蛋白质,该蛋白均分布在染虫红细胞的纳虫泡内,但未能转运到红细胞的胞浆内.间接免疫荧光共定位表明恶性疟原虫Pf332分子的DBL、TM和WR等3个功能区蛋白质均未与肌动蛋白(β-actin)结合.结论 Pf332分子的DBL、TM和WR等3个功能区蛋白在单独表达后自身均不能发生跨膜反应,即不能通过虫体的纳虫泡膜.南此推测,Pf332分子在虫体内合成后很可能通过多个功能基团协同作用转运到红细胞膜部位.
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基于PBL与DBL交互模式对传染病学教学的探讨
以图为基础的学习(Diagram-based learning,DBL)教学是在以问题为基础的学习( Problem-based learning,PBL)教学基础上改革创新的一种新型教学模式,将DBL与PBL进行交叉呼应的教学是一种新近推广并受到学生好评的一种教学方法.从老师教学的角度提供了一种新的教学思维和思想,为如何培养大学生从感性方面理解传染病学中的概念及树立诊治思维提供了基础.
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恶性疟原虫海南株var2csa基因DBL区蛋白的原核表达及功能分析
目的 克隆、表达恶性疟原虫海南株变异抗原基因(var)家族之一var2csa基因的血型抗原结合基团(duffy antigen-binding ligand,DBL)4、DBL5、DBL6区,比较其与硫酸软骨素A (chondroitin sulfate A,CSA)黏附能力的差异.方法 PCR扩增恶性疟原虫海南株基因组DNA中3个目的片段,将扩增产物与pMD18-T克隆载体连接,经酶切、测序鉴定正确后克隆至表达载体pET-22b上,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,并用组氨酸标签融合蛋白纯化柱(His GraciTrap)纯化,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹(Western blotting)检测目的蛋白.ELISA检测不同DBL区重组蛋白与CSA的结合情况.结果 PCR扩增获得目的片段分别为996、859和894 bp,酶切及DNA测序结果均显示重组质粒构建成功,在大肠埃希菌BL21(DE3)中成功表达并纯化3个DBL区重组蛋白,DBL4区、DBL5区和DBL6区的相对分子质量分别为Mr 439800,Mr 34500,Mr 36000.Western blotting检测结果显示,目的蛋白具有反应原性.ELISA结果显示,不同蛋白浓度条件下DBL5区均明显比其他两个DBL区的吸光度(A405值)高(P＜0.05),表明DBL5区与CSA的黏附能力较强.结论 var2csa基因3个DBL区重组蛋白表达成功,DBL5区与CSA的黏附能力较强.
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恶性疟原虫海南株var2csa基因的克隆、表达及疫识别研究
目的 克隆、表达恶性疟原虫海南株HN (2)var2csa基因DBL4、DBL5、DBL6区,通过ELISA方法比较其与硫酸软骨素A(CSA)的亲和能力差异,以及人体对恶性疟原虫海南株HN(1)、(2)VAR2CSA不同DBL区的免疫应答差异.方法 根据DBL区序列设计3对引物,PCR扩增目的片段,并与pMD 18-T克隆载体连接.经PCR、酶切、测序鉴定正确后克隆至表达载体pET-22b,通过转化、诱导、纯化表达重组蛋白质,SDS-PAGE和Western blot检测.通过ELISA方法进行重组蛋白质与CSA的粘附实验以及与患者血清的免疫识别实验.结果 酶切及DNA测序结果均表明表达载体构建成功,表达并纯化3个DBL区重组蛋白质,分子量与预计大小相同,Western blott检测目的蛋白质具有免疫反应性,ELISA显示不同蛋白浓度条件下DBL5区均明显比其它两个DBL区有更高的OD405值,并且DBL5区被妊娠相关疟疾病人血清识别水平显著高.结论 var2csa基因3个DBL区重组蛋白质表达成功,DBL5区与CSA的粘附能力较强,人体对DBL5区的免疫应答反应可能在抗病免疫过程中起到关键作用.
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CBL+DBL模式在传染病教学国际化背景下的应用与思考
随着当前国际上医学交流的大力拓展,越来越多医学院附属医院承担着留学生的临床教学任务,结合留学生传染病学临床课程的教育实践特点,我们采取因材施教,对留学生应用案例教学法(Case-Based Learning,CBL)结合图像教学法(Diagram-based learning,DBL)进行了探索；并对医学留学生教学过程中存在的问题进行了思考与讨论。
