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钛种植体复合硫酸软骨素A对骨愈合的影响
目的:研究钛种植体表面复合硫酸软骨素A(chondroitin sulfate-A,CS-A)后能否促进骨的愈合.方法:将钛种植体表面经钙处理及CS-A吸附处理后植入狗的股骨,分别在第15、30、60、120天对种植体周围骨愈合区域作X线、HE染色、四环素荧光标记显微法、扫描电镜观察及转移生长因子β1(transforming growthfactor-β1,TGF-β1)免疫组化染色等方法检查分析.结果:与对照组相比,吸附了CS-A的钛种植体周围早期即有新骨形成,TGF-β1的早期表达活跃.结论:钛种植体复合CS-A后能促进成骨细胞的分化,加速种植体周骨质的矿化.
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恶性疟原虫海南株var2csa基因DBL区蛋白的原核表达及功能分析
目的 克隆、表达恶性疟原虫海南株变异抗原基因(var)家族之一var2csa基因的血型抗原结合基团(duffy antigen-binding ligand,DBL)4、DBL5、DBL6区,比较其与硫酸软骨素A (chondroitin sulfate A,CSA)黏附能力的差异.方法 PCR扩增恶性疟原虫海南株基因组DNA中3个目的片段,将扩增产物与pMD18-T克隆载体连接,经酶切、测序鉴定正确后克隆至表达载体pET-22b上,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,并用组氨酸标签融合蛋白纯化柱(His GraciTrap)纯化,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹(Western blotting)检测目的蛋白.ELISA检测不同DBL区重组蛋白与CSA的结合情况.结果 PCR扩增获得目的片段分别为996、859和894 bp,酶切及DNA测序结果均显示重组质粒构建成功,在大肠埃希菌BL21(DE3)中成功表达并纯化3个DBL区重组蛋白,DBL4区、DBL5区和DBL6区的相对分子质量分别为Mr 439800,Mr 34500,Mr 36000.Western blotting检测结果显示,目的蛋白具有反应原性.ELISA结果显示,不同蛋白浓度条件下DBL5区均明显比其他两个DBL区的吸光度(A405值)高(P＜0.05),表明DBL5区与CSA的黏附能力较强.结论 var2csa基因3个DBL区重组蛋白表达成功,DBL5区与CSA的黏附能力较强.
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恶性疟原虫海南株var2csa基因的克隆、表达及疫识别研究
目的 克隆、表达恶性疟原虫海南株HN (2)var2csa基因DBL4、DBL5、DBL6区,通过ELISA方法比较其与硫酸软骨素A(CSA)的亲和能力差异,以及人体对恶性疟原虫海南株HN(1)、(2)VAR2CSA不同DBL区的免疫应答差异.方法 根据DBL区序列设计3对引物,PCR扩增目的片段,并与pMD 18-T克隆载体连接.经PCR、酶切、测序鉴定正确后克隆至表达载体pET-22b,通过转化、诱导、纯化表达重组蛋白质,SDS-PAGE和Western blot检测.通过ELISA方法进行重组蛋白质与CSA的粘附实验以及与患者血清的免疫识别实验.结果 酶切及DNA测序结果均表明表达载体构建成功,表达并纯化3个DBL区重组蛋白质,分子量与预计大小相同,Western blott检测目的蛋白质具有免疫反应性,ELISA显示不同蛋白浓度条件下DBL5区均明显比其它两个DBL区有更高的OD405值,并且DBL5区被妊娠相关疟疾病人血清识别水平显著高.结论 var2csa基因3个DBL区重组蛋白质表达成功,DBL5区与CSA的粘附能力较强,人体对DBL5区的免疫应答反应可能在抗病免疫过程中起到关键作用.
