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结核分枝杆菌链霉素耐药基因rpsL的检测
目的 探讨结核分枝杆菌(TB)对链霉素(Sm)耐药的分子机制,建立快速检测结核分枝杆菌Sm耐药性的方法.方法 应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测80株结核分枝杆菌临床分离株的rpsL基因.结果 以H37Rv标准株为对照,21株敏感株中,1株(4.76%)SSCP和RFLP分析存在rpsL基因异常;59株耐药株中,36株(61.02%)SSCP和RFLP分析存在rpsL基因异常.结论 结核分枝杆菌对Sm耐药与rpsL基因突变有关,PCR-SSCP和PCR-RFLP技术可快速、准确地检测结核分枝杆菌对Sm的耐药性.
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感染病原体新型分子检测技术 GeneXpert
近年来开展应用的GeneXpert分子生物学检测系统，整合了定量PCR分子检测过程中的样品制备、核酸纯化、基因扩增、结果报告等步骤并将其自动化，具有准确、快速、安全性高等特点，已成为新型分子POCT检测技术平台，为感染性病原体的检测提供了新的手段，尤其是在结核病的诊断方面具有重要意义。在此，介绍GeneXpert的检测原理、在感染病原体诊断方面的临床应用以及存在问题与发展趋势。
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艾滋病合并结核分枝杆菌感染的诊断研究
艾滋病患者由于免疫功能低下，常合并各种机会性感染，其中结核分枝杆菌感染是艾滋病患者常见的机会性感染之一［1-2］。 HIV感染者一旦感染了结核分枝杆菌，会大大缩短病毒感染的潜伏期，迅速发展为艾滋病，病情迅速恶化甚至死亡［3］。因此，及时诊断结核分枝杆菌感染对HIV感染者的临床诊治和降低病死率有着重要的意义［4-5］。然而HIV感染者并发结核病的临床表现多不典型，结核菌素试验（ PPD）阴性率较高，其中艾滋病患者PPD阴性率可达90％，胸部X线表现亦多不典型，易被漏诊和误诊［6］。近年来，在艾滋病研究领域，炎性反应逐渐被重视，研究人员猜测炎性反应细胞因子的迅速上升和病原特异性免疫应答（以免疫重建炎症综合征为特点）是引起艾滋病患者早期死亡的原因，对于有机会性感染的患者来说尤其如此，如结核与进展型HIV［7］。既往研究表明，持续的免疫活化导致HIV感染恶化，而炎症反应在机体免疫激活过程中扮演相当重要的角色，C-反应蛋白（ C-reactive protein，CRP）等被看作免疫功能紊乱的标志物［8-9］。同时，感染HIV 后可引起机体炎性反应，导致血管内皮细胞受损，使得血液纤溶系统被激活，血浆中D-二聚体含量显著增加［10-11］。γ-干扰素释放试验（ TB-interferon gamma release assay，TB-IGRA）技术作为一种体外特异性T淋巴细胞免疫应答检测技术，应用细胞免疫应答原理，与PPD相比无需回访且结果判读更为客观，被广泛应用于结核病的临床辅助诊断和结核分枝杆菌感染的检测［12］。研究显示，IGRA在HIV感染人群中筛查结核潜伏感染的敏感度优于PPD试验，但患有免疫缺陷综合征的肺结核病患者机体免疫应答能力较低，可能会出现假阴性结果［13-14］，只能作为诊断上的参考。本研究对2013年1月至2014年10月浙江省青春医院艾滋病病房收治的艾滋病患者进行CRP、D-二聚体和TB-IGRA检测，分析这些检测结果诊断艾滋病合并结核分枝杆菌感染的价值。
关键词： 获得性免疫缺陷综合征 分枝杆菌 结核 诊断 -
结核病疫苗的研究进展
结核病是由结核杆菌引起的慢性传染病，是流行性广、病死率高的传染病之一。卡介苗是目前唯一用于预防结核病的疫苗，可预防儿童结核性脑膜炎和播散性结核病，但对青少年和成年人肺结核的预防效果不理想。目前已经研发出数十种能够诱导细胞免疫应答的新型结核病疫苗，包括结核杆菌减毒疫苗、重组卡介苗、亚单位疫苗和病毒载体疫苗。部分疫苗已进入临床试验，但有些研究结果不够理想。
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Toll 样受体2／4-核因子κB 信号通路在人结核分枝杆菌侵入小鼠树突细胞2．4中的作用
目的：研究人结核分枝杆菌侵入抗原提呈细胞后诱导树突细胞（ DC ）成熟的机制。方法：选择小鼠DC2．4细胞株为抗原提呈细胞的效应细胞，建立人结核分枝杆菌H37 Rv株的细胞混合培养模型。在不同混合培养时段，采用实时荧光定量PCR检测DC2．4细胞Toll样受体2（TLR2）、TLR4 mRNA的表达量；蛋白质印迹法检测DC的核因子κB （ NF-κB ） p65蛋白的表达；免疫酶联吸附试验定量检测DC产生α肿瘤坏死因子（ TNF-α）的水平；采用间接免疫荧光法和流式细胞术检测DC2．4表面CD80和CD86的表达情况。结果：H37 Rv与DC2．4共培养2 h后开始有细菌侵入；共培养6、8、10、12 h后，细菌侵入率分别为（37．9±5．6）％、（51.2±7．6）％、（57．2±8．9）％、（63.9±12．4）％；TLR2、TLR4 mRNA也开始增量，共培养10 h时达高峰，之后开始下降；共培养6 h时，NF-κB p65的表达量明显增高；TNF-α的表达量在共培养6 h开始上调，8 h时达高峰，随后逐渐下降；共培养6 h时，DC2．4表面CD80、CD86表达量明显增高。结论：人结核分枝杆菌侵入DC2．4时，通过激活TLR2/4-NF-κB 信号通路，诱导 DC 成熟，提高其抗原提呈能力。
