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MED12基因突变与子宫平滑肌瘤发病关系的荟萃分析
目的 探讨MED12基因突变与子宫平滑肌瘤发病的关系.方法 检索1995年7月-2013年1月Medline、EMBASE、Ovid、Springer数据库、Cochrane图书馆收录的英文文献,以及1994年1月-2013年1月中国知网全文数据库(CNKI)和1978年1月-2013年1月中国生物医学文献数据库(CBMdisc)收录的中文文献.选择研究子宫肌瘤MED12基因突变情况的文献,探讨MED12基因突变与子宫平滑肌瘤发病的关系,分析不同人种子宫肌瘤MED12突变的情况和MED12突变类型在不同地区的分布.结果 纳入研究9篇文献合并分析共计641例患者,MED12基因突变率为64.90％(416/641),非子宫平滑肌瘤的对照组为0.79％(17/2146),差异有统计学意义(x2=1 540.848,P＜0.001).MED12突变是子宫肌瘤发病的危险因素(OR=61.83,95％CI:33.82～ 113.03).不同人种合并分析显示,白人的MED12基因突变率为68.99％(238/345),黑人为62.75％(32/51),黄种人为63.39％(71/112),不同人种间的突变率比较差异无统计学意义(均P＞0.05).不同地区人群子宫肌瘤MED12基因突变率合并分析显示,亚洲人群突变率为63.39％(71/112),欧洲人群突变率为65.29％(222/340),美洲人群突变率为67.70％(109/161),非洲人群突变率为50.00％ (14/28),非洲人群的突变率低于欧洲、美洲人群(均P＜0.05).结论 MED12基因突变与子宫平滑肌瘤发病危险有关,突变情况与种族无关,部分地区MED12基因突变率存在差异.
关键词： 肌瘤 子宫 RNA聚合酶Ⅱ转录调节物12 突变 Meta分析 -
重组人RNA聚合酶Ⅱ转录调节物12-Fc融合蛋白载体的构建和表达
目的 用pIRES2-EGFP-Fc载体构建重组人RNA聚合酶Ⅱ转录调节物12(MED12)-Fc真核表达质粒,转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达MED12-Fc融合蛋白,纯化和鉴定MED12-Fc.方法 根据GenBank中的序列信息,从基因组上扩增出人MED12基因第2、3和4外显子,并通过Overlap聚合酶链反应(PCR)拼接获得目的基因片段,以pIRES2-EGFP-Fc真核表达质粒为载体,构建重组人MED12-Fc真核表达质粒.使用脂质体瞬时转染293T细胞,48 h收集上清液,用酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定质粒的表达能力.表达质粒电转CHO细胞,通过G418抗性筛选及流式细胞仪荧光筛选,获得高表达的稳定细胞株.使用稳定细胞株培养表达人MED12-Fc融合蛋白,收集上清液,用Proein A亲和纯化柱纯化蛋白.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)检测蛋白质分子量.结果 通过DNA测序和瞬时转染表达鉴定,证实MED12第2、3和4外显子基因序列正确,成功获得重组人MED12-Fc真核表达质粒.通过电转化、G418及流式细胞仪荧光筛选,获得高表达重组人MED12-Fc的稳定表达细胞株.通过细胞培养,亲和层析纯化,获得高纯度的重组人MED12-Fc融合蛋白.结论 成功构建MED12-Fc融合蛋白的表达载体,获得高纯度的重组人MED12-Fc融合蛋白,为进一步研究MED12蛋白功能奠定基础.
关键词： RNA聚合酶Ⅱ转录调节物12 融合蛋白 表达载体
