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IgA肾病患者血清IgA1对人肾小球系膜细胞转化生长因子β1/Smads信号通路的影响
目的 研究IgA肾病(IgAN)患者血清IgA1对人肾小球系膜细胞(HMC)转化生长因子β1(TGF-β1)、磷酸化Smad3(p-Smad3)和纤连蛋白(FN)的刺激作用,探讨IgA1对TGF-β1/Smads信号通路的影响.方法 体外培养HMC,分5组.即健康对照组、健康人IgA1(NIgA1)刺激组、健康人聚合IgA1(aNIgA1)刺激组、IgAN患者IgA1(PIgA1)刺激组和IgAN患者聚合IgA1(aPIgA1)刺激组.RT-PCR检测各组细胞TGF-β1、p-Smad3和FNmRNA的表达.Western免疫印迹检测HMC p-Smad3蛋白水平.ELISA检测HMC培养上清液中TGF-β1、FN蛋白水平.结果 PIgA1和aPIgA1能显著上调TGF-β1,P-Smad3、FN mRNA和蛋白的表达(P<0.05).aPIgA1上调三者mRNA表达的能力分别为PIgA1的1.5倍、1.3倍和1.5倍(均P<0.05).aPIgA1上调TGF-β1和p-Smad3蛋白表达的能力分别为PIgA1的2.1倍和1.6倍(均P<0.01).在aPIgA1刺激不同时间,TGF-β1和p-Smad3 mRNA表达于12 h达高峰(0.866±0.055和0.891±0.251),于24h回到基线水平.FNmRNA表达于24 h达高峰(0.968±0.031).TGF-β1和p-Smad3蛋白表达逐渐升高,TGF-β1于12 h达高峰[(246.960±1.270)ng/L],p-Smad3于6 h达高峰(0.490±0.046)后开始下降.FN蛋白表达逐渐升高,24 h达高峰[(1.804±0.038)mg/L](均P<0.01).结论 PIgA1和aPIgA1能显著上调HMC TGF-β1、p-smad3、和FNmRNA表达和蛋白水平.且aPIgA1的作用强于PIgA1,提示IgAN患者血清的IgA1,主要是aIgA1可通过TGF-β1/Smads信号通路在IgAN进展中起作用.
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磷酸化Smad3对糖尿病大鼠肾组织SnoN表达的影响
目的 探讨磷酸化Smad3(p-Smad3)在糖尿病(DM)大鼠肾组织SnoN蛋白表达的影响.方法 链脲佐菌素诱发大鼠DM模型,分为DM2、4、8、12、16和24 w组(n=6),每组均设鼠龄匹配的正常对照组(n=6).生化方法测血糖和24 h尿蛋白;PAS染色观察肾组织病理学改变;免疫组化检测肾组织SnoN、Smad2/3和E3泛素连接酶APC10蛋白的表达;Western印迹方法动态观察肾皮质SnoN、p-Smad3、转化生长因子-β1(TGF-β1)和Smad2/3蛋白的表达;RT-PCR检测SnoN mRNA.结果 DM各组大鼠血糖和24 h尿蛋白较正常对照组均显著升高; SnoN和Smad2/3阳性染色主要见于肾小管上皮细胞,DM 2 w起 Smad2/3和 p-Smad3蛋白表达多于正常对照组,DM 4 w起 SnoN蛋白少于正常对照组;各DM组肾组织TGF-β1、Smad2/3和APC10 蛋白表达均多于正常对照组;DM各组SnoN mRNA与正常组相比差异无统计学意义.结论 糖尿病肾病发病过程中p-Smad3可能与APC一起介导了SnoN蛋白的泛素化降解过程.
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皮肤原位再生医疗技术治疗大鼠糖尿病足溃疡创面的效果及作用机制
目的 探讨皮肤原位再生医疗技术(MEBT/MEBO)治疗大鼠糖尿病足溃疡创面的效果及对转化生长因子(TGF)-β1、磷酸化smad3(P-smad3)、β-catenin mRNA表达的影响.方法 选取50只SPF级雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、模型对照组、MEBT/MEBO组、贝复济组,各10只.比较四组大鼠治疗8 d的创面愈合率、平均创面愈合时间及TGF-β1蛋白、P-smad3蛋白、β-catenin mRNA的表达.结果 正常对照组、MEBT/MEBO组、贝复济组的平均创面愈合时间都低于模型对照组,模型对照组治疗8 d的创面愈合率低于正常对照组、MEBT/MEBO组、贝复济组(P<0.05);MEBT/MEBO组的平均创面愈合时间低于贝复济组,但高于正常对照组(P<0.05).模型对照组的TGF-β1、P-smad3蛋白表达及β-catenin mRNA表达均低于正常对照组、MEBT/MEBO组、贝复济组(P<0.05),MEBT/MEBO组的TGF-β1、P-smad3蛋白表达低于正常对照组(P<0.05).MEBT/MEBO组的β-catenin mRNA表达高于贝复济组(P<0.05).结论 MEBT/MEBO可增强TGF-β1、P-smad3蛋白及β-catenin mRNA的表达,这可能是MEBT/MEBO治疗糖尿病足溃疡的作用机制.
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MEBT/MEBO对大鼠糖尿病足创面组织TGF-β1、Smad3、P-smad3表达及形态学结构的影响
目的:观察皮肤原位再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对大鼠糖尿病足创面组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad3、磷酸化smad3 (P-smad3)表达及形态学结构的影响.方法:将80只健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、贝复济组和MEBT/MEBO组,每组各20只.模型组、MEBT/MEBO组和贝复济组大鼠参照糖尿病模型制备法,采用腹腔注射60 mg/kg链脲佐菌素,建立糖尿病动物模型;空白对照组大鼠则腹腔注射等量柠檬酸一柠檬酸钠缓冲液.分别于干预治疗后第5、14天各取相同部位创面组织,采用Western blot法检测TGF-β1、Smad3和P-smad3蛋白表达水平,常规病理技术观察溃疡创面组织形态学结构,各组间差异比较采用方差分析和秩和检验.结果:治疗后5d,各组大鼠Smad3蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义(F=1.036,P=-0.388);MEBT/MEBO组、贝复济组的大鼠TGF-β1和P-smad3蛋白表达水平则均明显低于空白对照组(P=005、P=-0.026.P=0.001、P=0.005);而且,上述2组大鼠的TGF-β1和P-smad3蛋白表达水平亦明显高于模型组(P=0.000);此外,与第5天结果相比,第14天MEBT/MEBO组与贝复济组的TGF-β1、P-smad3表达水平明显下降,差异均具有统计学意义(P=0.000).治疗后第5天,MEBT/MEBO组、贝复济组及空白对照组溃疡创面肉芽组织中成纤维细胞形态、毛细血管新生情况优于模型组,但空白对照组成纤维细胞排列紊乱:第14天.MEBO组、贝复济组创面组织成纤维细胞及胶原纤维排列致密成形,空白对照组胶原纤维增生明显但排列紊乱,模型组胶原纤维呈团状增生.结论:MEBT/MEBO在创面愈合早期可激活TGF-β1/Smad3信号通路,促进创面损伤修复,而在愈合晚期则抑制该信号通路的活化,控制创面组织过度增生.
关键词： 糖尿病足 皮肤原位再生医疗技术 转化生长因子-β1 smad3 磷酸化Smad3
