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G蛋白偶联受体激酶2活性和表达的调控及其在治疗恶性肿瘤中的作用
G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族,广泛分布于各种组织中,能够特异性的使活化的G蛋白偶联受体(GPCRs)发生磷酸化及脱敏,从而终止GPCRs介导的信号传导通路.GRK2不仅能够调节GPCRs和非GPCRs,其自身活性和表达也可受到多种因素的调节.GRK2具有多种不同的生理及病理作用,其涉及的许多信号通路与恶性肿瘤的发生发展密切相关.
关键词： G蛋白偶联受体 G蛋白偶联受体激酶2 活性调控 表达调控 恶性肿瘤 -
β受体阻滞剂对急性冠脉综合征Th17/Treg的作用研究
目的：探讨β受体阻滞剂对急性冠脉综合征（ACS）患者淋巴细胞G蛋白偶联受体激酶2（GRK2）和Th17/Treg的作用及意义。方法选择2013年2月至2015年12月千佛山医院心内科收治的CHD患者104例以及非CHD住院患者35例（NCA组）作为研究对象。ACS患者随机分为美托洛尔和卡维地洛治疗组。流式细胞仪测定淋巴细胞IL-17和Foxp3水平，酶联免疫吸附法测定GRK2水平。随访6个月。结果 ACS患者GRK2及IL-17/Foxp3比值均较非冠心病组明显升高（P<0.01）。治疗6个月后，GRK2及IL-17/FoxP3比值较治疗前均明显下降（P<0.01），两种方法比较差异无统计学意义（P>0.05）。GRK2与IL-17/FoxP3比值呈显著正相关（P<0.01）。结论 ACS患者Th17/Treg失调与GRK2升高有关。β受体阻滞剂可降低GRK2水平，改善Th17/Treg平衡，具有免疫调节作用。
关键词： 急性冠脉综合征 G蛋白偶联受体激酶2 β受体阻滞剂 Th17/Treg -
2型糖尿病患者外周血淋巴细胞G蛋白偶联受体激酶2基因表达升高
目的 探讨糖尿病对G蛋白偶联受体激酶2(GRK-2)基因的影响及其机制.方法 56例40～65岁非高血压2型糖尿病(T2DM)患者为T2DM组,以年龄、性别相匹配的高血压糖尿病患者46例(HT-DM组)和体检健康者29例(NC组)为对照组,提取外周血淋巴细胞RNA,通过RT-PCR半定量检测GRK-2 mRNA表达.结果与HT-DM组相似,T2DM组外周血淋巴细胞GRK-2 mRNA表达水平较NC组明显增加(P<0.05).Pearson 线性相关分析提示T2DM组患者GRK-2基因表达水平升高与PG、HbA1c、糖尿病病程、年龄、TC水平正相关(P<0.05).结论 T2DM患者外周血淋巴细胞GRK-2基因表达升高,血糖升高可能是其重要原因.
关键词： 糖尿病 G蛋白偶联受体激酶2 -
轻度认知功能障碍大鼠模型评价及G蛋白偶联受体激酶2的作用
目的 探讨轻度认知功能障碍(MCI)大鼠模型的制备方法,研究大鼠轻度认知功能障碍的病理生理特点. 方法 14～18月龄SD大鼠随机分为模型组(20只)和假手术组(20只),模型组造成双侧颈总动脉(CCA)重度狭窄,假手术组只分离双侧颈总动脉但不结扎.造模后30天从Morris水迷宫实验、脑组织的病理形态学及电镜观察、逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测海马组织中G蛋白偶联受体激酶2 (GRK2) mRNA表达、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织GRK2蛋白表达等方面评价模型组和假手术组大鼠. 结果 模型组大鼠的死亡率为10％,死亡率较低.病理形态学及超微结构显示,假手术组大鼠海马组织细胞结构较正常,而模型组大鼠海马CA1区椎体细胞缺血脱失,排列较疏松,部分细胞出现胞核固缩、深染,脑白质未见明显梗死灶,部分白质纤维变稀疏且走行较紊乱变,出现核仁变小靠边,胞浆电子密度增高,偶见脂褐素,粗面内质网及高尔基体扩张,胞浆游离核糖体增多,线粒体肿胀,部分出现空泡.Morris水迷宫测试结果显示,模型组大鼠平均逃避潜伏期均较假手术组大鼠延长(P＜0.05),空间探索实验结果显示模型组大鼠目标第1次穿原平台所在位置平均时间为(36.80±7.68)s,明显长于假手术组的平均时间(20.87±6.16)s;模型组大鼠60秒平均穿越原平台次数为(1.13±0.51)次,显著少于假手术组的(3.10±1.45)次,差异均具有统计学意义(P＜0.05).模型组大鼠海马组织中GRK2 mRNA和GRK2蛋白相对表达量均较假手术组明显增强(P＜0.05). 结论 CCA重度狭窄大鼠模型的稳定性和可重复性较好,可以作为MCI动物模型.模型组大鼠细胞形态和超微结构均出现较明显病理学改变,且认知功能有轻度损害.GRK2可能在MCI发生发展过程中起到重要作用.
关键词： 认知障碍 颈动脉狭窄 G蛋白偶联受体激酶2 -
心力衰竭时心肌β肾上腺素信号通路的变化
心力衰竭是许多心脏疾病的终末阶段,这些心脏疾病包括心肌梗死、高血压、心肌病、先天性心脏病等.心力衰竭的一个显著特点是交感神经系统活性增加,循环中儿茶酚胺增多,心肌β肾上腺素受体(βARs)过度激活,信号通路发生变化.为防止心力衰竭,了解参与βARs信号通路内稳态的分子事件至关重要,现报道如下.
关键词： β肾上腺素受体 G蛋白偶联受体激酶2 钙转运 心力衰竭 -
靶向抑制G蛋白偶联受体激酶2在心力衰竭基因治疗中的研究进展
心力衰竭是许多器质性心脏疾病发展的终末阶段,其发病机制及病理生理过程复杂.传统的药物治疗虽然能有效缓解心力衰竭的症状,降低患者住院率,但其5年病死率仍超过50％[1].随着分子生物学的发展及对心血管疾病发病机理认识的逐渐深入,基因治疗为心力衰竭提供了一种新的治疗途径.
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GRK2在帕罗西汀治疗大鼠Ⅰ型复杂区域疼痛综合征中的变化
目的 研究帕罗西汀治疗大鼠上肢Ⅰ型复杂区域疼痛综合征(CRPS-Ⅰ)时颈上交感神经节(SCG)中G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)的变化.方法 采用单侧前肢缺血再灌注法制备SD大鼠前肢CRPS-Ⅰ模型.模型成功后随机分为帕罗西汀(P)组、溶媒(S)组、对照(C)组.模型建立后第3天,P组大鼠经尾静脉注射帕罗西汀10 mg-kg-1;S组大鼠注射3％乙醇生理盐水溶液1 mL· kg-1,均连续注射7 d;C组不予处理.于术前及术后1、2、7、14、21 d采用Von Fery纤毛测痛法与丙酮滴定法分别测量各组的机械痛阈值与冷刺激痛.采用免疫组化法定量颈上交感神经节内GRK2含量.结果 C组和S组大鼠实验侧缺血再灌注后的前趾机械痛阈值和冷痛觉阈值在术后2d内均有下降,并持续至术后21 d.颈上交感神经节内GRK2含量在缺血再灌注后下降.对侧相应各项指标无明显改变.P组静脉给予帕罗西汀后,实验侧机械痛阈值和冷痛觉阈值的下降小于C组和S组,颈上交感神经节GRK2含量下降也较C组和S组弱.结论 大鼠上肢CRPS-Ⅰ模型在机械刺激与冷刺激痛觉敏感增强的同时,SCG神经元内的GRK2明显下降,而帕罗西汀治疗后,机械刺激与冷刺激痛敏感减轻,颈上交感神经节内GRK2含量上升.
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G蛋白偶联受体激酶2对EGF诱导的cAMP生成的调控
目的研究G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor kinase 2,GRK2)对表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)诱导cAMP生成的调控作用及其可能的机制.方法用放射免疫竞争法测定EGF刺激前后细胞内cAMP浓度.用免疫共沉淀的方法检测GRK2与EGF受体(EGF receptor,EGFR)的相互作用.结果(1)EGF刺激使HEK293细胞内第二信使cAMP的浓度显著升高,约是Forskolin刺激诱导的cAMP浓度升高的30%～40%.而过表达GRK2后,EGF刺激诱导的cAMP的浓度升高仅为Forskolin刺激诱导的cAMP浓度升高的不足10%(P＜0.01),说明过表达GRK2能显著抑制EGF刺激的cAMP的生成.(2)免疫共沉淀实验的结果显示EGF刺激后,EGFR受体免疫沉淀复合物中检测到大量GRK2,说明EGF刺激能诱导EGFR-GRK2复合物的形成.结论GRK2对EGF刺激诱导的第二信使cAMP生成有负反馈调控作用,这种调控作用可能是通过EGF刺激的GRK2与EGFR的相互作用来实现的.
关键词： G蛋白偶联受体激酶2 表皮生长因子 表皮生长因子受体 cAMP -
美托洛尔对老年男性非ST段抬高型心肌梗死病人淋巴细胞GRK2表达水平的影响
目的 观察美托洛尔对老年男性心肌梗死病人外周血淋巴细胞G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)表达的影响.方法 选取65岁以上急性非ST段抬高型心肌梗死病人80例,分为对照组和美托洛尔组.对照组行常规治疗,美托洛尔组在常规治疗基础上应用美托洛尔,随访2年.分别于发病24 h内和治疗3、6、12、24个月时行心脏超声检查,并分别抽取外周血2 mL,分离淋巴细胞,提取RNA及蛋白,检测GRK2 mRNA和蛋白的表达水平.结果 治疗前2组心脏超声各项指标、外周血淋巴细胞GRK2的表达无明显差异;治疗后,美托洛尔组GRK2表达逐渐降低,治疗12个月后GRK2表达水平明显低于对照组,而心脏射血分数则显著高于对照组.结论 老年急性非ST段抬高型心肌梗死病人经美托洛尔治疗后,外周血淋巴细胞GRK2表达水平明显降低,心脏射血分数等指标无明显变化.随着疗程的增加,治疗效果越显著.
关键词： 老年人 急性非ST段抬高型心肌梗死 美托洛尔 G蛋白偶联受体激酶2 -
呼吸道合胞病毒感染对肺组织GRK2的影响及其与哮喘的关系
目的:探讨呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染鼠肺组织后,G蛋白偶联受体激酶2(G protein coupled receptor kinase 2,GRK2)的变化规律及其与哮喘的关系.方法:Balb/c雌性小鼠100只,随机分为5组,每组20只.正常对照组,于第1、14天予生理盐水0.2 ml腹腔注射,第21～25天用37℃生理盐水20 ml雾化吸入30 min;RSV感染组,于第19、20、21天,以RSV按浓度1×106PFU、100 μl/次鼻腔滴入;哮喘组,第1、14天予以鸡卵白蛋白(ovalbumin,OVA) 100 μg、AL(OH)32mg腹腔注射,第21天开始激发,以2％OVA生理盐水20 ml雾化吸入30 min,持续激发5d;双重感染组,模型制备同哮喘组,第19、20、21天,以RSV按浓度1×106 PFU、100 μl/次鼻腔滴入;地塞米松干预组,RSV感染同RSV组,第21～25天予腹腔注入地塞米松0.2 mg/(kg·d).末次激发后24 h,10％水合氯醛腹腔注射麻醉(0.3 ml/kg),处死小鼠,取左肺上叶和右肺中叶,4％甲醛固定,分别用于免疫荧光检测GRK2的表达和组织病理改变检测;取右肺下叶用于Western blot检测各组GRK2的表达;无菌条件下取左肺下叶,用于肺组织病毒分离及免疫荧光鉴定.结果:RSV组GRK2表达较正常组显著增加,与哮喘组相比差异有统计学意义;双重感染组GRK2表达较RSV组显著增加;地塞米松干预组GRK2表达较RSV组显著减少.结论:RSV感染小鼠肺组织后GRK2表达增加,合并哮喘时表达显著增加,地塞米松干预对GRK2的表达有一定的抑制作用.
关键词： 呼吸道合胞病毒 G蛋白偶联受体激酶2 哮喘 -
缬沙坦与硝苯地平对自发性高血压大鼠左心室肥厚心肌细胞G 蛋白偶联受体激酶2的表达及亚细胞分布的影响
目的 观察缬沙坦及硝苯地平对自发性高血压大鼠(SHR)左心室肥厚心肌细胞G 蛋白偶联受体激酶2(GRK2)的表达及亚细胞分布的影响.方法 选择自发性高血压大鼠(SHR)为研究对象(n=30),随机分为对照组(n=6),低剂量缬沙坦组[L 缬沙坦,10 mg /(kg·d),n=6],高剂量缬沙坦组[H缬沙坦,30 mg /(kg·d),n=6],低剂量硝苯地平组[L 硝苯地平,10 mg /kg,2 次/ d,n=6],高剂量硝苯地平组[H 硝苯地平,30mg /(kg·次),2 次/d,n=6],由6 月龄喂养至8月龄,处死后分离心脏,通过免疫荧光标记、激光共聚焦显微镜及Werstern Blot 等方法,观察左心室心肌细胞GRK2的表达及亚细胞分布的变化.结果 与对照组比较,两药物干预的SHR 左心室心肌细胞膜蛋白GRK2表达及分布减少,高剂量较低剂量又有进一步减少,差异均有统计学意义(均P＜0.05).缬沙坦组左心室心肌细胞膜蛋白GRK2表达及左心室重量较硝苯地平组减少,差异有统计学意义(P＜0.05).相关性分析结果示两药物干预组大鼠左心室心肌细胞膜蛋白GRK2透光密度与左心室重量呈正相关(缬沙坦组r＝0.837,硝苯地平组r＝0.829,均P＜0.01).结论 缬沙坦与硝苯地平改善左心室肥厚可能与抑制SHR 左心室心肌细胞膜蛋白GRK2表达有关,缬沙坦较硝苯地平能更好地改善心肌肥厚可能与其抑制GRK2表达使其进一步减少有关.
关键词： G蛋白偶联受体激酶2 心肌肥大 缬沙坦 硝苯地平 -
叶酸改善老年期轻度认知功能障碍大鼠学习记忆能力的机制
目的：探讨叶酸改善老年期轻度认知功能障碍（MCI）大鼠学习和记忆能力的机制。方法老年SD大鼠40只，随机等分为假手术对照组（SC）、模型对照组（MC）、低剂量给药组（LD）和高剂量给药组（HD）。造模后30 d起对LD组4 mg·kg-1·d-1、HD组12 mg·kg-1·d-1连续叶酸灌胃，SC组及MC组给予相同剂量生理盐水灌胃，30 d后分别检测其学习记忆能力、血清叶酸和同型半胱氨酸（Hcy）浓度、海马组织G蛋白偶联受体激酶2（GRK2）mRNA及蛋白表达。结果HD、LD组学习记忆能力、血清叶酸浓度均高于MC组（P＜0．05）；HD、LD组血清Hcy浓度、GRK2mRNA及蛋白表达均低于MC组（P＜0．05）。结论补充叶酸可以改善老年期MCI大鼠学习记忆能力，其机制可能与提高血清叶酸水平、降低血浆Hcy水平、减轻海马组织GRK2基因及蛋白表达有关。
关键词： 认知障碍 叶酸 半胱氨酸 G蛋白偶联受体激酶2 大鼠 Sprague-Dawley -
佐剂性关节炎大鼠脾脏组织GRK2免疫荧光法建立
建立了适合佐剂性关节炎大鼠脾脏组织G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)免疫荧光测定法.考察了免疫荧光测定的4个关键条件:①渗透剂Triton X-100的影响;②不同抗原修复液:柠檬酸缓冲液和pH 9.0乙二胺四乙酸(EDTA)缓冲液的影响;③5％胎牛血清封闭不同时间(20、30、40、50min)的影响;④不同一抗浓度(1∶50、1∶100、1∶200、1∶400、1∶500)的影响.实验结果显示,Triton X-100通透增强了抗原的表达;1∶100的一抗浓度对荧光信号强度合适;封闭50 min能显著去除背景非特异性染色;柠檬酸缓冲液优于pH 9.0 EDTA缓冲液,提高了抗原表达.
关键词： G蛋白偶联受体激酶2 脾脏组织 免疫荧光 -
心肌纤维化模型大鼠心肌组织中GRK2的表达以及对胶原合成的影响
目的 探讨G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)在心肌纤维化发生过程中的作用.方法 皮下注射异丙肾上腺素诱导大鼠心肌纤维化,采用HE染色观察模型大鼠心肌组织学变化,差速贴壁法分离培养心肌成纤维细胞,检测成纤维细胞中GRK2的表达和胶原Ⅰα含量,采用siRNA干涉法抑制GRK2表达,采用cAMP检测试剂盒检测细胞内cAMP含量.结果 HE染色显示大鼠心肌纤维化模型心肌细胞出现坏死、肥大、淋巴细胞浸润等变化.Western blotting结果显示,异丙肾上腺素诱导模型大鼠心肌成纤维细胞中GRK2表达增加(P＜0.05),胶原Ⅰα表达增加(P＜0.01).GRK2特异性siRNA可以显著抑制GRK2的表达(P＜0.05).cAMP含量分析显示,异丙肾上腺素诱导心肌纤维化模型大鼠中心肌组织cAMP含量明显下降(P＜0.01),在siRNA抑制GRK2表达后,心肌组织中cAMP水平显著升高(P＜0.05).结论 采用siRNA法抑制GRK2表达可以增加细胞内cAMP的含量.GRK2有望成为心肌纤维化防治靶点.
关键词： 心肌纤维化 G蛋白偶联受体激酶2 环磷酸腺苷 -
高葡萄糖培养增加H9C2成心肌细胞G蛋白偶联受体激酶2基因表达
目的 前期临床研究发现2型糖尿病患者淋巴细胞G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)基因表达升高,为进一步探讨GRK2表达升高的分子机制,检测高糖对GRK2基因表达的影响.方法 H9C2成心肌细胞随机分成5组分别加入以下培养液:空白对照组和不同葡萄糖梯度浓度组(0,5.5,12.5 ,25,33mmol/L),培养72 h后采用RT-PCR.WESTERNBLOTTING分别测定GRK2-mRNA和磷酸化Akt(Ser473)蛋白含量比值.结果 随着葡萄糖浓度升高,H9C2成心肌细胞的GRK2-mRNA表达水平呈剂量依赖性增加,pearson相关分析提示提示两者间存在直线相关(R= 0.683,P<0.001),采用Student Newman-Keuls'q检验,各葡萄糖培养组与无糖培养比较均存在统计学差异(P=0.028,P=0.009,P<0.001).而磷酸化Akt(Ser473)蛋白表达水平减少,各组间比较存在统计学意义(F=369.1,P<0.001),回归分析和pearson相关分析提示葡萄糖浓度与磷酸化AKt(Ser473)蛋白的表达呈线性负相关(R=0.913,P<0.001).结论 高糖培养使GRK2表达升高,可能是参与心肌细胞葡萄糖利用受损的重要机制之一.
关键词： 葡萄糖 成心肌细胞 G蛋白偶联受体激酶2 糖尿病 -
甘油三酯对血管内皮细胞GRK2表达时序性的研究
[目的]探讨甘油三酯对血管内皮细胞G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)时序性表达的影响.[方法]体外培养人血管内皮细胞(EAhy926),在培养基中加入终浓度为150mg/L的甘油三酯进行时间效应实验,于0、3、6、12、24、36h收集细胞后立即进行蛋白抽提,用Westernblot检测甘油三酯作用后血管内皮细胞GRK2的改变.[结果]0、3、6、12、24和36h组GRK2/Actin灰度比值分别为0.31±0.02、0.41±0.02、0.49±0.03、0.54±0.04、0.61±0.11、0.59±0.05.随着甘油三酯作用时间延长,GRK2含量呈时间依赖性增加,24h达到高峰.[结论]甘油三酯可能通过上调血管内皮细胞的GRK2,导致内皮细胞功能障碍,从而参与了动脉粥样硬化的发生发展进程.
关键词： 动脉粥样硬化 血管内皮细胞 G蛋白偶联受体激酶2 -
G蛋白偶联受体激酶:心肌肥厚潜在的生物标志
G蛋白偶联受体激酶有多个亚型,参与多种疾病的发生发展,其中G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)在压力负荷诱导的心肌肥厚的调控中起重要作用.心肌肥厚是心力衰竭的早期病理学改变,目前临床上对心力衰竭监测常用的生物标志为氨基末端脑钠肽前体,其监测心血管不良事件与GRK2相比相对较晚.GRK2结构特点及在心肌肥厚调控中的机制使其有望成为监测心肌肥厚的潜在生物标志,临床上可通过监测患者外周血淋巴细胞GRK2 mRNA的表达水平对早期心肌肥厚进行有效干预或者后期GRK2与传统生物标志合用以提高对心力衰竭的诊治率.
关键词： G蛋白偶联受体激酶 G蛋白偶联受体激酶2 生物标志 心肌肥厚 心力衰竭 -
鞘内注射米诺环素对大鼠持续性术后痛脊髓G蛋白偶联受体激酶2表达的影响
目的 探讨鞘内注射小胶质细胞活化特异性抑制剂米诺环素对皮肤肌肉切口牵拉(SMIR)持续性术后痛大鼠脊髓G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)表达的影响.方法 选择鞘内置管成功的健康清洁级雄性SD大鼠40只,采用随机数字表法分为4组(n=10):假手术+鞘内注射生理盐水组(Ⅰ组)、假手术+鞘内注射米诺环素组(Ⅱ组)、SMIR+鞘内注射生理盐水组(Ⅲ组)和SMIR+鞘内注射米诺环素组(Ⅳ组).Ⅰ组和Ⅲ组分别于术前30 min和术后1、2、3d时鞘内注射生理盐水20 μl;Ⅱ组和Ⅳ组分别于术前30 min和术后1、2、3d时鞘内注射米诺环素(100 μg/10μl),并于每次注药后经导管注射生理盐水10μl冲洗导管.Ⅰ、Ⅱ两组行假手术,Ⅲ、Ⅳ两组采用皮肤肌肉切口牵拉法制备大鼠持续性术后痛模型.应用Yaksh法鞘内置管.4组大鼠分别于术前1d、术后第3、7、14、21日测定机械缩足反应阈值(MWT);于术后14 d时痛行为学测定后,各组随机抽取4只大鼠处死,取L4～6节段脊髓组织,采用Western blot法检测脊髓GRK2表达.结果 Ⅰ组与Ⅱ组MWT和脊髓GRK2蛋白表达比较差异无统计学意义(P＞0.05);与Ⅰ组比较,Ⅲ组在术后3、7、14、21d时的MWT明显下降(P＜0.05),术后14d时的脊髓GRK2蛋白表达明显下调(P＜0.05);与Ⅲ组比较,Ⅳ组在术后3、7、14、21d时的MWT明显增加(P＜0.05),术后14d时脊髓GRK2蛋白表达明显上调(P＜0.05).结论 持续性术后痛时脊髓小胶质细胞活化与脊髓GRK2表达下调有关.
