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胎儿生长受限孕妇血浆、胎盘、羊水中妊娠特异性β1糖蛋白(SP1)与胎盘功能的研究
目的:探讨胎儿生长受限孕妇血、胎盘、羊水中SP1与与胎盘功能的相关性,方法:对胎儿生长受限组与正常对照组孕妇血、分娩后胎盘以及羊水采取固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)检测其SP1含量.结果:胎儿生长受限组与正常妊娠组比较SP1含量明星降低(P <0.05).结论:动态观察血清SP1含量变化可作为胎儿生长受限孕妇监测胎盘功能以及胎儿宫内安危的重要指标之一.
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不同截短型癌基因 AEG －1启动子活性分析
目的：分析不同截短型癌基因 AEG －1启动子活性，证实与 E6／E7表达相关的转录调控因子对AEG －1启动子活性的影响。方法：以宫颈癌 HeLa 细胞基因组 DNA 为模版，扩增 AEG －1启动子全长序列（－2710／－491），并应用本实验室改造的启动子活性研究专用绿色荧光蛋白报告载体构建 pGL3－basic －EGFP／AEG －1质粒，通过转染 HeLa 细胞及血管内皮细胞 ECV304检测启动子活性。同时，根据 AEG －1启动子序列上与 E6／E7作用相关的转录调控因子结合位点位置，设计不同截短型 AEG －1启动子序列引物，应用 pGL3－basic －EGFP 载体构建不同截短型 AEG －1启动子载体，并分别转染细胞检测启动子活性。结果：AEG －1启动子全长序列 pGL3－basic －EGFP／AEG －1载体转染 HeLa 细胞可见明显绿色荧光蛋白表达，而在血管内皮细胞 ECV304中表达为痕量。包含不同转录调控因子 C －Myc、SP1、NF －κB、E2 F 结合位点的不同截短型 AEG －1启动子载体在肿瘤细胞中有活性但存在差异。结论：AEG －1启动子为肿瘤特异性启动子，含有与 E6／E7表达相关的转录调控因子 NF －κB、E2 F 结合位点的启动子序列为影响 AEG －1基因启动子活性的关键区域。
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MMP-11与转录因子Sp1在胃癌组织的表达及相关性
目的 探讨MMP-11与转录因子Sp1在胃癌组织的表达及相关性.方法 本研究以120对胃癌组织标本Tissue array片为对象,检测MMP-11及SP1的表达情况,并行相关分析.结果 Tissue array免疫组化法检测结果显示MMP-11在高、中、低分化胃腺癌及正常组织中的阳性率分别为59.1％、70.0％、73.5％、25.0％.高、中、低分化胃腺癌MMP-11阳性率均高于正常组织(P＜0.05),显示MMP-11在胃腺癌组织中过度表达.在高、中、低分化胃腺癌细胞及正常组织中Sp1阳性率分别为50.0％、55.0％、75.4％、20.0％.高、中、低分化胃腺癌细胞中Sp1蛋白阳性率均高于正常组织(P＜0.05).将Sp1和MMP-11在不同分化程度胃癌组织中的表达阳性率作相关分析,相关系数r =0.951,P＜0.05.通过两者阳性表达率的相关分析证实两者有相关性(r=0.951,P＜0.05),且呈直线相关.结论 Sp1、MMP-11在不同分化程度的胃癌组织中表达,且高于正常组织;Sp1、MMP-11在不同分化程度的胃癌组织中的表达呈相关关系.
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手术创伤中腹膜组织Sp1、COL1A1和TIMP-1的表达
目的探讨人手术创伤腹膜组织中核转录因子Sp1激活,COL1A1和TIMP-1表达变化与腹膜纤维化之间的关系.方法采用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测手术创伤后不同时间的腹膜组织核转录因子Sp1的表达水平,Western Blot检测COL1A1和TIMP-1蛋白表达,Masson染色观察腹膜组织中胶原纤维的变化.结果 Sp1在手术创伤后0.5 h被活化,随着手术时间延长Sp1活性逐渐增强,至创伤后4 h时达高峰,同时创伤腹膜组织中的COL1A1和TIMP-1蛋白表达水平逐渐升高,存在差异显著性(P<0.01).在手术创伤期内随手术时间的延长腹膜组织中胶原纤维增加.结论核转录因子Sp1活化导致Ⅰ型胶原合成增加,细胞外基质降解减少,从而启动腹膜纤维化进程.
关键词： Sp1 Ⅰ型胶原 基质金属蛋白酶抑制剂-1 纤维化 -
Sp1对肠三叶因子启动子基础转录活性的影响
目的 寻找维持肠三叶因子(ITF)启动子基础转录活性的反应元件. 方法 以ITF启动子序列为模板,采用PCR方法获取不同长度及突变的ITF基因5'侧翼序列,插入pGL3-basic质粒,构建截短及突变荧光报告载体,进行以下实验.(1)按照随机数字表法(分组方法下同)将人胚胎肾293(HEK293)细胞分为pGL3-basic组、pGL3-300组、pGL3-280组、pGL3-260组、pGL3-240组、pGL3-220组、pGL3-200组,每组3孔,分别转染对应的质粒500 ng及15 ng海肾荧光素酶报告质粒pRL-TK,培养48 h,单管型多功能检测仪检测细胞荧光素酶相对活性.(2)另取HEK293细胞,分为pGL3-basic组、pGL3-300组及突变体1、2、3、4组,每组3孔,分别转染pGL3-basic、pGL3-300及突变体1、2、3、4质粒500 ng及15 ng pRL-TK质粒.培养48 h,同(1)检测荧光素酶相对活性.(3)另取HEK293细胞,分为空白对照组及10、50 μmol/L光神霉素组,每组3孔,转染500 ng pGL3-300质粒及15 ng pRL-TK质粒后,空白对照组不加,后2组分别加10、50 μmol/L光神霉素,培养24 h,同(1)检测荧光素酶相对活性.(4)另取HEK293细胞,分为空白对照组及0.1、0.2、0.3 μg pcDNA3.1-Sp1组,每组3孔,转染500 ng pGL3-300质粒及15 ng pRL-TK质粒后,空白对照组不转染,后3组分别转染0.1、0.2、0.3 μg pcDNA3.1-Sp1质粒.培养48 h,同(1)检测荧光素酶相对活性.对数据行单因素方差分析、LSD检验. 结果 (1)pGL3-basic组、pGL3-300组、pGL3-280组、pGL3-260组、pGL3-240组、pGL3-220组、pGL3-200组细胞荧光素酶相对活性分别为1.00、7.99 ±0.51、2.03 ±-0.55、2.50 ±0.40、2.50±0.15、1.72±0.19、2.10 ±0.21,pGL3-280组、pGL3-260组、pGL3-240组、pGL3-220组、pGL3-200组细胞荧光素酶相对活性较pGL3-300组显著下降(P值均小于0.01).(2)pGL3-basic组、pGL3-300组及突变体1、2、3、4组细胞荧光素酶相对活性分别为1.00、7.99 ±0.51、2.10 ±0.56、7.03±1.05、5.09±1.40、8.15±1.48,其中突变体1组细胞荧光素酶相对活性较pGL3-300组显著下降(P＜0.01),突变体2、3、4组细胞荧光素酶相对活性与pGL3-300组相近(P值均大于0.05).(3)10、50μmol/L光神霉素组细胞荧光素酶相对活性分别为3.07 ±0.60、2.93 ±0.55,均显著低于空白对照组的8.05±0.83(P值均小于0.01).(4)0.1、0.2、0.3 μg pcDNA3.1-Sp1组细胞荧光素酶相对活性分别为12.74±1.12、14.52±1.25、15.66±1.82,均显著高于空白对照组的8.13±0.71(P值均小于0.05). 结论 ITF启动子的-301～-293 bp区域存在一个Sp1反应元件,是维持ITF启动子基础转录活性的核心元件.
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转录因子 Sp1对胆酸转运蛋白 MRP3、MRP4表达的影响
目的：研究胆汁淤积时 Sp1对 MRP3、MRP4表达的影响，以完善 MRP3、MRP4表达调控机制。方法构建 Sp1过表达质粒及 Sp1 siRNA 片段，分别转染 HepG2细胞，筛选稳转细胞株。提取细胞总 RNA 和总蛋白，RT-qPCR 检测 MRP3、MRP4 mR-NA 水平的变化，Western blot 检测 MRP3、MRP4蛋白水平的变化。结果成功构建了 Sp1-OE-HepG2和 Sp1siRNA-HepG2稳转细胞株。在 Sp1-OE-HepG2细胞中，MRP3、MRP4 mRNA 和蛋白水平表达均增高，其中 MRP3 mRNA 水平表达增高2．8倍，MRP3蛋白水平表达增高3．0倍；MRP4 mRNA 和蛋白水平分别增高3．2倍和2．5倍；而在 Sp1 siRNA-HepG2细胞中，MRP3、MRP4则表达下降，其中 MRP3 mRNA 表达降低52％，MRP4 mRNA 表达降低58％，MRP3蛋白表达降低57％，MRP4蛋白表达降低60％。结论转录因子 Sp1能够调控胆酸转运蛋白 MRP3、MRP4的表达。
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Sp1反义寡核苷酸抑制Jurkat T细胞hTERT表达而抑制端粒酶活性
目的:研究转录因子S p1反义寡核苷酸(0DN)对Jurkat T细胞端粒酶活性和端粒酶催化亚基hTERT表达的影响.方法:设计Sp1反义ODN并用脂质体转染细胞,用端粒酶PCR-ELISA方法检测端粒酶活性;用逆转录PCR方法检测Sp1和hTERT mRNA水平,用Western blot检测蛋白水平.结果:Sp1反义ODN(1 μmol/L)明显抑制Jurkat T细胞Sp1 mRNA和蛋白表达,抑制率分别为44.8%(P＜0.05)和57%(P＜0.01),并抑制hTERT mRNA表达,抑制率为43.7%(P＜0.01);当浓度从0.25到2.0 μmol/L,Sp1反义ODN对端粒酶活性抑制率从27.1%到64.6%,呈明显的剂量依赖性关系.结论:Sp1反义寡核苷酸通过抑制hTERT mRNA表达而抑制端粒酶活性.
关键词： Sp1 反义寡核苷酸类 端粒酶 hTERT Jurkat T细胞 -
ERK1/2-Sp1信号通路对肺癌细胞VEGF的调控作用
背景与目的:了解ERK1/2-Sp1信号通路对肺癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)基因的调控作用.材料与方法:采用激酶特异抑制剂PD98059抑制ERK1/2的活性,Western blot检测ERK1/2的表达.RNA干扰技术沉默Sp1基因,Mercury信号通路系统检测Sp1的转录活性.RT-PCR检测VEGF和Sp1基因的变化. 结果:ERK1/2激酶的活性几乎可被150μmol/L PD98059完全抑制,ERK1/2激酶活性下调伴随VEGF的表达下降.PD98059下调Sp1转录因子的活性.Sp1基因沉默后VEGF的表达量下调. 结论:在肺癌细胞中存在ERK1/2-Sp1-VEGF信号通路,ERK1/2激酶调控VEGF的表达可能部分依赖于转录因子Sp1的活性.
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Ghrelin和SP1与特发性胎儿生长受限的相关性
目的 研究特发性胎儿生长受限新生儿脐血中生长激素释放多肽Ghrelin、妊娠特异性β1糖蛋白(Sp1)的表达水平,探讨二者与特发性胎儿生长受限的关系.方法 选择不明原因胎儿生长受限新生儿30例为观察组,正常新生儿30例为对照组,用酶联免疫吸附测定法分别检测观察组和对照组新生儿脐血中Ghrelin和SP1的含量.结果在观察组新生儿中,新生儿出生体质量与脐血Ghrelin水平(r=-0.215,P=0.041)呈负相关,与脐血SP1水平(r=0.376,P=0.035)呈正相关.在对照组新生儿中,新生儿出生体质量与脐血Ghrelin水平(r=-0.218,P=0.097),与SP1水平(r=-0.225,P=0.099)的关系均不明显.另外,观察组Ghrelin水平高于正常对照组,SP1水平低于正常对照组,差异有统计学意义.结论 高水平的Ghrelin,低水平的SP1可能是造成特发性胎儿宫内生长受限的原因.
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大黄素甲醚调节miR-370诱导肝癌细胞凋亡的实验研究
目的:观察大黄素甲醚调节miR-370诱导肝细胞癌(HCC)细胞的凋亡情况,并探讨其作用机制.方法:将大黄素甲醚作用于SMMC7721和HepG2两组HCC细胞,使用TaqMan探针用实时定量PCR法检测miR-370的表达;用Western blot检测Sp1和DNMT1相应的蛋白表达水平.结果:大黄素甲醚抑制肝细胞癌细胞增长和诱导凋亡.肝细胞癌细胞中通过上调miR-370造成大黄素甲醚诱导型细胞凋亡.大黄素甲醚处理的细胞中通过miR-370抑制剂抑制miR-370水平能明显降低凋亡细胞的百分比(P<0.01).大黄素甲醚通过AMPK/Sp1/DNMT1信号调节miR-370的水平(P<0.01).AMPK/Sp1/DNMT1信号参与大黄素甲醚诱导的HCC细胞凋亡.结论:大黄素甲醚通过上调miR-370诱导HCC细胞凋亡,通过调节AMPK/Sp1/DNMT1信号通路对miR-370发挥调节作用.
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Sp1蛋白与胃癌的研究新进展
胃癌是世界范围内发病率高的胃肠道恶性肿瘤,死亡率居所有恶性肿瘤第二位,而在我国胃癌居恶性肿瘤死亡原因之首.即使患者接受了标准的根治性切除手术,且术后进行规范化的治疗,但进展期胃癌的5年生存率仍然徘徊在30％～40％左右[1].Sp1是近几年来研究较多的一种DNA结合蛋白,其过度表达可正向调节肿瘤增殖和转移潜能.其中转录因子Sp1作为Sp1 /kruppel [2]家族中的代表因子,它在肿瘤组织中的高表达提示了肿瘤恶性程度高、预后差,这种现象在消化道的多种肿瘤都有所体现.随着近年来不断的研究,Sp1的高表达在胃癌的诊断、治疗过程中的临床意义日益得到重视.
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胃腺癌中Sp1的表达与临床病理参数关系的研究
目的 研究转录因子Sp1在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达特征,并探讨其与临床病理参数之间的关系.方法 用免疫组织化学SP法,检测63例胃腺癌组织、19例胃黏膜不典型增生组织及10例因胃良性病变行部分切除的正常胃黏膜组织中Sp1的表达.结果 Sp1在胃癌组织中的阳性表达率为59%,明显高于在胃黏膜不典型增生组织(21%)及正常胃黏膜组织(10%)中的表达率,差异具有统计学意义(P<0.05).Sp1蛋白的表达与肿瘤的浸润深度及TNM分期、淋巴结转移密切相关.结论 Sp1蛋白对胃癌的发生发展起重要作用,检测其蛋白表达水平对于评价患者的预后有一定价值.
