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5-AZA抑制肝癌细胞BEL7402代谢方式转换
目的 研究去甲基化药物5-AZA对miR-34a和miR-34c在肝癌细胞中表达的影响及其抑制肝癌细胞糖酵解的分子机制.方法 用real-time PCR法检测肝癌细胞系中miR-34a/c的表达以及糖酵解途径关键酶的表达;在肝癌细胞中过表达miR-34a、miR-34c或用5-AZA处理肝癌细胞,用乳酸检测试剂盒、葡萄糖检测试剂盒分析miR-34a/c及5-AZA对肝癌细胞BEL7402糖酵解的影响;设计拯救实验研究5-AZA、miR-34a/c与肝癌细胞糖酵解调控的关系.结果 5-AZA可以诱导BEL7402肝癌细胞内源性miR-34a、miR-34c的表达上调(P＜0.01);过表达miR-34a/c可以抑制糖酵解关键酶LDH-A的表达(P＜0.05);LDH-A是miR-34a/c的潜在靶基因;敲低miR-34a/c的表达可以降低5-AZA对肝癌细胞BEL7302糖酵解途径的抑制作用.结论 5-AZA通过诱导miR-34a/c表达上调,发挥抑制肝癌细胞代谢方式转换的功能.
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曲古霉素A抑制肝癌细胞的糖酵解
目的 研究表观遗传药物组蛋白去乙酰化抑制剂曲古霉素A(TSA)对miR-34家族(miR-34a/b/c)在肝癌细胞中表达的影响及其抑制肝癌细胞糖酵解的分子机制.方法 在肝癌细胞系中分别转染miR-34模拟物或相应阴性对照,用real-time PCR法检测miR-34a/b/c的表达以及糖酵解途径关键酶的表达;在肝癌细胞中分别转染miR-34b模拟物、相应阴性对照,或用TSA、DMSO处理肝癌细胞,用乳酸检测试剂盒、葡萄糖检测试剂盒分析miR-34b及TSA对肝癌细胞HepG2、PLC/PRF/5糖酵解途径的影响;设计拯救实验在HepG2细胞中研究TSA、miR-34b与肝癌细胞糖酵解调控的关系.结果 TSA可以诱导HepG2、PLC/PRF/5肝癌细胞内源性miR-34b的表达上调(P＜0.01);过表达miR-34b可以抑制糖酵解关键酶LDH-A的表达(P＜0.05);miR-34b可以抑制含有LDH-A 3’非翻译区的报告基因活性;敲低miR-34b的表达可以降低TSA对肝癌细胞HepG2糖酵解途径的抑制作用.结论 TSA通过诱导miR-34b表达上调发挥抑制肝癌细胞的代谢转换.
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白藜芦醇对H2O2所致乳鼠心肌细胞损伤的保护机制研究
目的 研究白藜芦醇(Res)在H2O2所致乳鼠心肌细胞损伤中的保护机制.方法 将原代培养的乳鼠心肌细胞分成3组:对照组,H2O2处理组和Res+ H2O2处理组,采用MTF比色法检测细胞活性,应用Real Time-PCR技术检测miR-34a的表达水平.结果 H2O2对乳鼠心肌细胞具有损伤作用,Res可明显缓解H2O2对乳鼠心肌细胞的损伤作用,经过H2O2处理后乳鼠心肌细胞内miR-34a的表达水平显著升高,Res可明显降低乳鼠心肌细胞内miR-34a的表达水平.结论 Res通过下调miR-34a的表达水平来发挥对H2O2所致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用.
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miR-34家族抑制肿瘤作用的研究进展
miR-34家族包括miR-34a、miR-34b和miR-34c，广泛分布于节肢动物、线虫纲动物以及哺乳动物中。近研究发现，miR-34家族可通过多种途径参与肿瘤、心血管疾病和衰老相关信号转导网络的调控，与肿瘤、心血管疾病和衰老的发生、发展密切相关。本文对miR-34家族在上述领域中的功能研究进行综述。
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miR-34启动子甲基化在胃癌发病过程中的作用研究
目的 探讨胃癌组织中miR-34基因启动子甲基化状态对miR-34的表达影响及其与患者预后的相关性.方法 采用实时荧光定量PCR法检测50例胃癌组织及癌旁组织中成熟miR-34的表达.采用甲基化特异性PCR法检测miR-34基因启动子的甲基化状态,运用统计学分析miR-34基因启动子甲基化状态与miR-34表达量之间的关系,并随访患者复发和转移情况.结果 胃癌组织中成熟miR-34的表达水平比癌旁组织明显降低(P<0.05).miR-34甲基化水平与淋巴结转移有相关性(P<0.05).miR-34基因启动子非甲基化组的成熟miR-34表达水平明显高于甲基化阳性单一模式组和甲基化阳性混合模式组(P<0.05).与非甲基化组和甲基化阳性混合模式组相比,miR-34基因甲基化阳性组的胃癌患者复发和转移率明显升高(P<0.05).结论 在胃癌患者中,miR-34基因启动子甲基化可导致miR-34表达下调.miR-34基因启动子的甲基化状态与胃癌的复发与转移明显相关.
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miR-34和miR-19与其靶基因在甲状腺乳头状癌中的表达
目的 通过研究miR-34和miR-19与其靶基因在甲状腺乳头状癌中表达情况,探讨其在甲状腺癌发病中的作用.方法 采用荧光定量PCR技术检测miR-34、miR-19、survivin和PTEN基因在甲状腺乳头状癌和非癌组织标本中转录表达水平.结果 基因表达相对量采用癌症组/非癌组=2-△△CT进行数据分析,miR-19基因家族在甲状腺癌与非癌组间表达差异无统计学意义(P＞ 0.05);miR-34基因家族在癌症组表达增加,以miR-34a更显著,与非癌组比较差异有统计学意义(P ＜0.05);PTEN和survivin基因在癌症组中表达均有下降趋势.结论 在甲状腺乳头状癌中,miR-19可能不参与癌症的发生,PTEN基因表达降低和miR-19没有关系;miR-34a作为癌基因,与其靶基因survivin对甲状腺乳头状癌发病有重要作用,两者之间存在负相关.
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miR-34在小鼠心脏组织中的表达和功能研究
目的 探讨miR-34家族中miR-34a、miR-34b、miR-34c在心脏组织的表达情况,确定这个家族中哪一个microRNA是主要表达形式;并比较miR-34家族在年轻小鼠心脏和老年小鼠心脏的表达差异,检测其中哪一个成员对由衰老引起的心脏功能退化具有敏感性,可作为心脏功能的检测标志.方法 提取小鼠心脏总RNA,对miRNA采用加尾法,反转成cDNA.使用RT-PCR的方式检测miR-34a、miR-34b、miR-34c引物的特异性.随后使用实时荧光定量PCR的方法检测miR-34a、miR-34b、miR-34c三个基因在心脏细胞中的表达差异.同时比较年轻小鼠和老年小鼠心脏组织中的miR-34a、miR-34b、miR-34c表达量.结果 提取的总RNA经检测符合要求,反转成cDNA后分别用miR-34a、miR-34b、miR-34c的荧光定量PCR引物检测,确认引物特异性极好,只有单一条带,可以进行下游荧光定量实验.在小鼠心脏组织中miR-34a的表达量较miR-34b和miR-34c高,说明miR-34a在miR-34家族中起主导作用.在老年小鼠心脏中miR-34a的表达量高于年轻小鼠(2.5倍).miR-34b在老年小鼠心脏中也有部分上调(1.4倍),而miR-34c在年轻小鼠和老年小鼠心脏中无明显变化.结论 在miR-34家族中,miR-34a的表达起主导地位,表达量高于miR-34b、miR-34c.随着年龄增加,miR-34a、miR-34b在老年小鼠心脏的表达量比年轻小鼠心脏要高,其中miR-34a 2.5倍的增幅明显大于miR-34b 1.4倍的增幅.故可将miR-34a作为心脏由衰老引起的功能退化的标志基因,也可作诊断心脏功能的重要指标.
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miR-34调控c-Jun蛋白对甲状腺癌细胞生物学行为的影响
目的:探讨miR-34调控c-Jun蛋白对甲状腺癌细胞生物学行为的影响及其机制.方法:qPCR检测不同甲状腺癌细胞株中miR-34和c-Jun的表达水平;双荧光素酶实验检测miR-34和c-Jun的相互关系;Hoechst染色实验检测miR-34对甲状腺癌细胞凋亡的影响;MTT增殖实验检测miR-34对甲状腺癌细胞增殖的影响;Transwell侵袭实验检测miR-34和c-Jun对甲状腺癌侵袭能力的影响.结果:与其他甲状腺癌细胞株相比,FTC-133甲状腺癌细胞中miR-34表达明显较高,c-Jun表达明显较低;双荧光素酶实验显示miR-34可以调控c-Jun蛋白表达水平,Hoechst染色实验显示miR-34可以抑制甲状腺癌的凋亡,c-Jun可以逆转其作用;MTT增殖实验和Transwell侵袭实验显示miR-34可以促进甲状腺癌细胞的增殖和侵袭能力,c-Jun可以逆转其作用.结论:miR-34可以靶向c-Jun蛋白影响甲状腺癌的生物学行为.
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胃癌组织中 miRNA-21和 miRNA-34的表达及其意义
目的：探讨微小 RNA（microRNA，miRNA）miR-21和 miR-34在胃癌组织（T）和癌旁正常胃黏膜组织（N）中的表达及其临床意义。方法运用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（PCR）测定 T 和 N 中的 miR-21、miR-34表达水平。结果（1）T 中 miR-21、miR-34的表达量分别为（8．32±4．48）和（3．40±0．49），N 中两者表达量分别为（4．13±1．29）和（3．86±0．51），T 中 miR-21的水平明显高于 N ，miR-34的水平明显低于 N，差异有统计学意义（P ＜0．05）。（2）T 中 miR-21水平与 TNM 分期、淋巴结转移有关（P ＜0．05）；T 中 miR-34表达量与肿瘤大小、组织学分级、TNM 分期、淋巴结转移有关（P ＜0．05）。结论胃癌组织中 miR-21的升高和 miR-34的下降在胃癌发生、发展中起着重要作用，提示肿瘤的淋巴结转移、侵袭性、远处转移增强。
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miR-34家族在肿瘤及辐射损伤中的研究进展
抑癌基因p53调节多种microRNA的表达,其中典型的是miR-34家族.miR-34以p53依赖的方式诱导下游基因的表达,使细胞周期阻滞,促进细胞凋亡及衰老等.在肿瘤中恢复miR-34的表达可抑制细胞增殖,从而发挥抑癌作用.另外,在辐射损伤中miR-34异常表达以促进DNA损伤修复；增强或抑制miR-34的表达可提高肿瘤的辐射敏感性或增强正常组织的辐射抗性,以达到更好的放疗效果.本文主要综述miR-34在肿瘤中的表达情况及诊断治疗方面的新进展,并介绍了miR-34在辐射损伤及影响辐射敏感性方面的作用.
