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AAV介导的H7N9单克隆抗体在体内高效表达
2013年, 我国安徽、上海两地暴发了甲型流感病毒H7N9感染, 造成了巨大的生命财产损失.至今仍无可用H7N9疫苗上市.近来, 研究人员鉴定了多株H7N9中和抗体.但由于抗体在体内半衰期较短, 限制了其作为长效预防手段控制H7N9感染的作用.AAV (Adeno-associated virus) 作为基因治疗载体, 具有低免疫原性的特征, 并可介导外源基因在体内长期稳定表达.本实验中, 我们利用重组AAV介导H7N9的两种单克隆中和抗体HNIgGD5和HNIgGH8在体内长期高水平表达以预防H7N9的感染.结果显示, 我们所构建的重组AAV-抗体表达系统可以在细胞水平和实验动物体内介导病毒中和抗体高水平表达.其中在小鼠体内HNIgGD5表达量达到199.9μg/mL, HNIgGH8高达430.9μg/mL.这将为利用中和抗体预防H7N9感染提供新策略.尤其是对于疫苗非适用人群, 如免疫缺陷患者、老人、儿童和孕妇等预防流感入侵具有重要意义.
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探讨抗体标记物MC联合应用CK19,TPO,Galectin-3,KI-67在甲状腺乳头状病变中应用
目的：通过联合应用MC、CK19、TPO、Galectin-3、KI-67在甲状腺乳头状病变中表达情况，寻求找到甲状腺乳头状癌的抗体的佳组合。方法回顾分析我院2012年2月至2015年2月期间96例甲状腺乳头状病变行免疫组化对MC、CK19、TPO、Galectin-3、KI-67表达。结果该组联合抗体在96例甲状腺乳头状病变中表达如下：甲状腺乳头状癌64例，阳性表达分别为：10%（7/64），96.9%（62/64例）、7.8%(5例弱阳性)，100%（64/64）、62.5%（40/64）。甲状腺乳头状增生表达如下：9.4%（3/32例弱阳性），6.5%（2例阳性），12.5%（4/32）22.5%（7例阳性），31.2%（10/32）。MC、CK19、TPO、Galectin-3、KI-67在两组病变中的表达均具有统计学意义（P<0.01）。MC近年来发现并用于甲状腺乳头状癌的新标记物，在乳头状癌中表达并不弥漫，呈散在表达，在乳头状增生性病变中极少表达，且表达较弱。结论 MC与CK19、TPO、Galectin-3、KI-67联合应用对鉴别甲状腺乳头状病变良、恶性进一步提供了可靠依据，是诊断甲状腺乳头状癌较好参考抗体之一。
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猪软骨多糖对S180荷瘤小鼠免疫功能的影响
皮下注射S180细胞建立动物实体瘤模型,将小鼠随机分为生理盐水对照组和猪软骨多糖治疗组,连续腹腔注射生理盐水或猪软骨多糖21 d,MTT法测定脾细胞增殖能力、免疫荧光法检测CD40和CD40L的表达以及TUNEL法检测瘤细胞的凋亡;免疫组化SP法检测Fas、PCNA、Cyclin D1和p21的表达.结果显示,猪软骨多糖能够促进脾淋巴细胞的转化并提高CD40和CD40L蛋白的表达,治疗组的Fas和p21的抗体表达较对照组显著升高,而PCNA和Cyclin D1的表达则显著降低.提示猪软骨多糖能够活化免疫细胞,提高小鼠的免疫力,通过提高Fas和p21的表达水平和降低PCNA和Cyclin D1的表达水平而诱导瘤细胞的凋亡.
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聚乙二醇干扰素对慢性丙肝患者血清炎症细胞因子及抗体水平的影响
目的：探讨聚乙二醇干扰素对慢性丙肝患者血清炎症细胞因子及抗体水平的影响。方法选择慢性丙肝患者120例，随机分为观察组、对照组各60例。两组均给予改善肝功能等基础治疗，同时口服利巴韦林250 mg、3次／d；在此基础上对照组皮下注射普通干扰素3×106 IU／d，连用4周后改为3次／周；观察组皮下注射聚乙二醇干扰素α-2a 180μg，1次／周；两组均连续治疗6个月。比较两组治疗后病毒学反应，观察两组治疗前后血清γ干扰素、γ干扰素诱导蛋白10（ IP-10）、IL-6、TNF-α、CRP水平，肝功能及抗体水平变化。结果观察组快速应答52例、完全应答35例、持续应答35例，对照组分别为43、22、24例，两组快速应答、缓慢应答及持续应答率比较P均＜0．05。两组治疗后血清IL-6、TNF-α、CRP、IP-10、ALT、AST、TBil、抗HCV及HCV-RNA均低于治疗前，γ干扰素水平均高于治疗前，且观察组效果更明显（P均＜0．05）。结论聚乙二醇干扰素用于慢性丙肝能更好地调节患者机体免疫功能，改善患者预后。
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改良嗅鞘细胞纯化培养技术
嗅神经轴突外的特殊胶质细胞--嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)来源于嗅上皮,与轴突一起从周围的嗅上皮迁延至中枢的嗅球.与其他神经胶质细胞不同,OECs能够连接受损神经两端,促进受损神经元轴突再生并髓鞘化,同时能够分泌大量的促进神经生长的因子,部分恢复神经的功能[1,2].OECs为神经损伤的修复带来了希望,目前已成为中枢神经损伤修复的热点,在这方面的研究中,由体外培养获得高纯度的OECs并导入受损的神经部位是目前研究的方向.但在OECs的培养研究中,不可避免地面对复杂的纯化问题.我们通过相关的实验研究,掌握了重复性高,简单易行的获得高纯度、大量的OECs实验方法.
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单链抗体表达研究进展
单链抗体(single-chain antibody fragment,scFv)由抗体重链可变区和轻链可变区通过15～20个氨基酸的短肽(linker)连接而成.在目标特定的scFv上连接放射性核素、生物毒素、药物,将极大增强对靶细胞的杀伤能力.Kanter等[1]研究发现将个体基因型scFv和细胞因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子或免疫刺激肽组成融合蛋白,是一种有效治疗淋巴瘤的疫苗.Wang等[2]通过抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和抗单端孢霉毒素(ZEN)scFv基因融合.表达为抗DON和抗ZEN scFv,结果显示双功能抗体成功构建.并可应用于DON和ZEN检测.
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悬浮驯化CHO细胞并用于抗前列腺特异性膜抗原的抗体表达
目的 将贴壁状态的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞驯化成用无血清培养基培养的悬浮CHO细胞(CHO-S),并验证用该悬浮细胞进行抗体表达的可行性.方法 将贴壁状态的CH0-S细胞调整为悬浮培养后,再用逐步降低血清含量的方法将其驯化成用无血清培养基悬浮培养的CHO-S细胞.根据从噬菌体抗体库筛选获得的抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)单链抗体的基因序列,人工设计并合成其重链和轻链基因,分别克隆人真核表达载体pcDNA3.1中,所得载体命名为pcDNA3.1-HC和pcDNA3.1-LC.将构建好的2个载体按照轻、重链比例为3∶1的量用FreeStyle MAX转染试剂瞬时转染CHO-S细胞,转染7d后收集培养上清,用SDS-PAGE和Western blot法检测抗体表达情况,用流式细胞术检测其与PSMA阳性细胞的结合活性.结果 成功将贴壁CHO细胞驯化成悬浮CHO-S细胞,成功构建了表达抗PSMA人源性抗体重链和轻链基因的真核表达载体,并在CHO-S细胞中实现了抗体的分泌表达,流式细胞术检测证实其可特异性结合PSMA阳性前列腺癌细胞.结论 成功驯化获得悬浮CHO-S细胞,驯化后的CHO-S细胞可用于抗体的真核表达,为后续抗体的大量表达纯化及功能研究提供了工具.
