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BST-2抑制HIV-1病毒样颗粒释放的研究
BST-2是近发现的可以抑制成熟HIV-1(human immunodeficiency virus,HIV)病毒颗粒从哺乳动物细胞表面释放的宿主因子,随之发现其也可以抑制多种包膜病毒的释放.本研究采用密码子优化的表达HIV-1 gag和gag-pol蛋白的质粒所形成的病毒样颗粒作为研究对象,观测BST-2对这两种病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP)的释放抑制情况及其作用机制.结果发现,瞬时表达和稳定表达的BST-2均可以显著抑制病毒样颗粒从哺乳动物细胞释放,同时发现这两种病毒样颗粒(gag/gag-pol)的释放都可以被BST-2抑制；而且,HIV-1中Vpu蛋白可以拮抗BST-2抑制HIV病毒样颗粒释放的作用,另外,通过化学试剂和酶学方法处理,确证BST-2可以被包装进病毒样颗粒中.
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BST-2和Vpu相互作用抑制剂筛选模型的建立
骨髓基质细胞抗原2(Bone marrow stromal cell antigen 2,BST-2,又称Tetherin、CD317、HM1.24)是宿主先天性免疫应答的组成部分,可抑制人类免疫缺陷病毒1(Human immunodeficiency virus 1,HIV-1)的释放,HIV-1的辅助蛋白Vpu可通过跨膜区与BST-2的跨膜区产生相互作用,进而将其降解,下调其在细胞表面的数量,拮抗BST-2的抗病毒功能.本研究将海肾荧光素酶(Renilla luciferase,Rluc)与BST-2的N端连接,增强型黄色荧光蛋白(Enhanced yellow fluorescent protein,EYFP)与Vpu的C端连接,分别构建质粒RB和VE,使两种融合蛋白在细胞内共表达,产生生物发光共振能量转移(Bioluninescence resonance energy transfer,BRET)信号,进而建立稳定双表达细胞系,以BST-2和Vpu的跨膜区相互作用为靶点,应用BRET技术,建立两种蛋白相互作用抑制剂的筛选模型,以期通过BRET信号变化筛选出相互作用抑制剂,发展新型的艾滋病治疗手段.
关键词： 生物发光共振能量转移 BST-2 Vpu 筛选模型 -
宿主抗病毒因子BST-2抑制HBV释放的研究进展
BST-2(Bone marrow stromal antigen 2,BST-2)一种宿主内天然抗病毒因子,自2008年首次报道其具有抗人类免疫缺陷病毒(HIV-1)释放的功能,一直认为BST-2主要在细胞膜上限制病毒释放.近发现BST-2对在细胞内部组装的乙型肝炎病毒(HBV),同样具有抑制作用,扩大了BST-2抗病毒作用的范围.并且BST-2在多囊泡体(MVB)中抑制HBV的释放与抑制HIV-1在细胞膜中释放的作用机制相似.同时发现HBV能够拮抗BST-2的限制作用,而HBV病毒中发挥作用的拮抗因子,目前有两个观点,一是HBV在肝细胞的特定条件下利用调节蛋白HBx拮抗BST-2的限制作用,另一观点认为包膜蛋白HBs对BST-2存在拮抗作用.本文重点概述和讨论了BST-2限制HBV病毒的新研究进展.
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恒河猴 BST-2基因编码区单核苷酸多态性及其对蛋白结构和功能的影响
目的：筛查恒河猴BST-2基因编码区单核苷酸多态性（ coding-region single nucleotide polymorphism， cSNP），研究其对蛋白结构和功能的影响。方法提取恒河猴外周血RNA，RT-PCR扩增，单克隆测序比对，确定猴BST-2的cSNP位点；通过蛋白质结构分析软件对蛋白结构进行分析；比较不同基因型猴体内SHIVSF162 p3复制水平的差异。结果序列比对发现8个非同义突变位点；经Psipred软件预测，其中G41A、T128C、C129和A333C cSNP位点可影响BST-2蛋白二级结构。在SHIVSF162 p 3感染平台期，参考基因型猴（ DLQ）病毒复制水平要高于GLQ型猴（P ＜0.05），其他基因型猴之间无显著差异。结论 cSNP （G41A）可能影响BST-2的抗病毒功能，这为后续研究提供参考信息。
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骨髓基质细胞抗原2在原发性舍格伦综合征中的表达及意义
目的:检测骨髓基质细胞抗原2 (bone marrow stromal antigen-2,BST-2)在原发性舍格伦综合征(primary Sj(o)gren's syndrome,pSS)患者唇腺及外周血淋巴细胞中的表达,探讨BST-2对淋巴细胞增殖的作用,以期为原发性舍格伦综合征的发病机制研究及药物治疗靶点的开发提供理论基础.方法:应用实时定量PCR技术检测30例pSS患者及30例对照患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)和唇腺组织中BST-2的表达水平,并与临床指标进行相关性分析.采用免疫组织化学对唇腺组织中的BST-2进行定位及半定量分析.通过分选外周血中的淋巴细胞,实时定量PCR明确BST-2异常表达的淋巴细胞亚群,唇腺免疫组织化学连续切片染色验证.慢病毒转染人B淋巴细胞系以过表达BST-2,CCK8检测BST-2对细胞增殖活性的影响,流式细胞术分析其对细胞凋亡的影响.采用SPSS 16.0软件包对数据进行统计学分析.结果:与对照患者相比,pSS患者唇腺组织中BST-2表达升高,阳性细胞主要是浸润腺体的B淋巴细胞.同时,pSS患者外周血CD19+B细胞BST-2与对照组相比表达升高.过表达B细胞中的BST-2可以促进细胞增殖,抑制细胞凋亡.结论:BST-2在pSS患者外周血及唇腺组织中表达升高,BST-2主要定位于B淋巴细胞.推测BST-2通过促进B细胞在腺体中的增殖和浸润,从而参与pSS的发生与发展.
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骨髓基质细胞抗原2抑制乙肝病毒复制与释放
目的 研究骨髓基质细胞抗原2 (bone marrow stromal antigen 2,BST-2)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制与释放的影响.方法 以不同浓度干扰素处理人肝癌细胞株HepG2.2.15,Western blot和荧光定量PCR检测BST-2蛋白水平和RNA水平;分别用构建的BST-2真核表达质粒pCDNA3.1-BST2-FLAG和BST-2拮抗蛋白HIV Vpu真核表达质粒,转染HepG2.2.15细胞,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养液乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和乙肝病毒e抗原(HBeAg),荧光定量PCR检测HBV mRNA,Southern blot检测HBV DNA.结果 转染pCDNA3.1-BST2-FLAG后,HBVmRNA降低26％,细胞内HBV DNA降低31％,细胞培养液中HBV DNA降低33％ (P ＜0.05),细胞培养液中HBsAg下降至82％,HBeAg下降至77％ (P ＜0.05);加入Vpu蛋白后,BST-2的抑制作用受到对抗,HBV mRNA恢复至92％,细胞内HBV DNA恢复至93％,细胞培养液中HBV DNA升至98％,细胞培养液中HBsAg恢复至102％,HBeAg恢复至99％,HBV复制与释放明显增强.结论 BST-2对HBV复制与释放具有抑制作用,该抑制作用可被HIV Vpu蛋白拮抗.
