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中药甘黄注射液在异种排斥反应中作用初探
目的:研究中药甘黄注射液在异种排斥反应中的作用.方法:通过RT-PCR技术检测甘黄注射液对猪血管内皮细胞(porcine endothelial cells, PECs)激活相关基因表达的影响及采用51Cr释放法检测其对NK细胞杀伤与粘附作用的影响.结果:未灭活人血清及人NK-92细胞可以上调猪血管内皮细胞E-selectin和IL-1α基因的mRNA表达,具有激活PECs作用;甘黄注射液可抑制人血清处理和NK细胞处理的PECs激活相关基因的表达.细胞毒实验结果认为,该中药也可以抑制NK细胞对PECs细胞毒作用,而且具有剂量依赖关系,这与该药抑制NK细胞对PECs的粘附作用是一致的.结论:甘黄注射液不仅可抑制超急性排斥反应中血清对内皮细胞激活作用,而且可抑制延迟性排斥反应中NK细胞的作用.
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Ad5F11p-GFP对CIK和NK-92细胞的转染效率及生物学特性的影响
目的:研究Ad5F11p载体对CIK和NK-92细胞的转染效率及生物学特性的影响,预测Ad5F11p载体在免疫治疗中的应用.方法:用Ad5F11 p-GFP以不同的MOI(转染复数)转染原代免疫细胞CIK和免疫细胞系NK-92,并以未转染病毒的两种免疫细胞作为阴性对照;用流式细胞术检测荧光阳性细胞比例,用显微镜观察形态学变化,用台盼蓝染色计数分析细胞的增殖,并用LDH法检测NK-92对白血病细胞系K562和HL-60的杀伤作用.结果:25MOI的Ad5F11 p-GFP对NK-92的转染效率可以达到大约90％,200 MOI的Ad5 F11 p-GFP对CIK转染效率不到40％,同一MOI在48 h和96 h时转染效率基本不变;转染Ad5 F11 p-GFP的免疫细胞容易聚团,增殖减慢,IFN-γ的释放增加并且对肿瘤的杀伤活性增强.结论:Ad5F11p载体修饰的NK-92在过继性免疫治疗中有较好的应用前景.
关键词： Ad5F11p-GFP CIK细胞 NK-92细胞 过继性免疫治疗 转染效率 -
杨梅苷对NK-92细胞活性调节作用
目的:研究杨梅苷对NK-92细胞活性的调节作用.方法:除对照组外,5、10、20 μM杨梅苷分别培养NK-92细胞,采用MTT法检测杨梅苷对NK-92细胞增殖活性的影响;以人慢性髓原白血病细胞(K-562)为靶细胞,观察杨梅苷对NK-92细胞杀伤活性的影响.采用流式细胞仪检测NK-92细胞表型CD56、CD16、CD25、CD69的表达,NK-92细胞表面活化受体NCR1、NCR2、NCR3的表达.结果:杨梅苷(5、10、20μM)培养36、48 h后,NK-92细胞的增殖活性与对照组相比明显增高;杨梅苷(10、20 μM)培养48 h后,NK-92细胞的杀伤活性也明显比对照组高.杨梅苷(10、20 μM)刺激后,NK-92细胞表面CD16、CD69表达无明显变化,CD56的表达强度有明显增加,CD25的阳性率和表达强度都有明显增高.同时,杨梅苷给药组中NCR2的表达强度明显高于对照组.结论:杨梅苷对NK-92细胞有增殖作用,可明显增强NK-92细胞对K-562细胞的体外杀伤活性,同时杨梅苷能明显增强CD56、CD25、NCR2的表达.
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NK-92细胞的研究和应用进展
恶性肿瘤是危害人类生命与健康的较为严重的常见病、多发病.针对肿瘤的治疗方法有多种,其中,肿瘤生物治疗中较成熟的是免疫细胞治疗,尤以树突状细胞(DC细胞)和过继性细胞(CIK细胞、LAK细胞、ANK细胞)治疗效果为好[1].
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HLA-G在卵巢癌组织中的表达及对NK细胞杀伤活性的影响
通过免疫组织化学法(IHC)检测卵巢癌组织中HLA-G的表达;克隆编码全长HLA-G1 cDNA,将该基因通过真核表达载体pVITRO2-mcs转染至HLA-G阴性的HO-8910、OVCAR-3细胞株,采用RT-PCR、流式细胞术(FACS)及Westernblot鉴定、分析转染细胞中HLA-G的mRNA及蛋白质表达;LDH释放法检测卵巢癌细胞表达HLA-G后对NK细胞杀伤功能的影响.结果显示,66.7％ (22/33)卵巢癌组织表达HLA-G分子,而正常组织未见其表达;基因转染后,HLA-G在HO-8910及OVCAR-3细胞表面获得稳定表达.细胞毒实验结果显示,HLA-G能显著抑制NK-92对卵巢癌细胞的杀伤活性(P＜0.01);HLA-G特异性抗体87G阻断后,能明显恢复NK-92细胞对HO-8910-G、OVCAR-3-G的杀伤功能.本研究结果提示,卵巢癌细胞通过表达HLA-G分子抑制NK细胞的杀伤活性,在卵巢癌细胞逃避宿主的免疫监视中起重要作用.
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肿瘤细胞表面NK细胞配体的表达及其对NK-92细胞的敏感性
目的 分析肿瘤细胞表面N K细胞配体的表达及其对N K-92细胞的敏感性,以期获得对不同肿瘤的佳治疗效果.方法 采用半定量RT-PCR方法,测定8种肿瘤细胞(K562、Raji、U937、Molt-4、Jurkat、HepG2、Hela、PC3)的9种NK配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、CD58、Nectin-2、CD155、LLT-1、HLA-E).通过羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)和碘化丙啶(PI)双标记测定NK-92细胞对这些肿瘤细胞的杀伤活性.结果 根据肿瘤细胞对NK-92的敏感性将肿瘤细胞分为两组(敏感组和中度敏感组),K562、Raji、U937、Molt-4对NK-92细胞敏感性高,Jurkat、HepG2、Hela、PC3对NK-92细胞中度敏感.CD58和HLA-E的转录水平在两组之间的差异具有统计学意义(P值分别为0.002和0.006),CD58的表达在敏感组高于中度敏感组,而H L A-E的表达在敏感组低于中度敏感组.结论 CD58hi或H L A-Elow的肿瘤细胞对NK-92的杀伤作用更敏感,因此,肿瘤细胞CD58和HLA-E的表达测定可以作为临床NK细胞治疗的肿瘤检测标志.
