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灯盏细辛药效物质基础3,5-二咖啡酰奎宁酸对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的保护作用
目的 研究3,5-二咖啡酰奎宁酸对大鼠实验性局灶性脑缺血-再灌注损伤模型的保护作用.方法 采用线栓法阻塞大鼠脑中动脉( MCAO)制备局灶性脑缺血-再灌注损伤模型,观察3,5-二咖啡酰奎宁酸对模型大鼠状态、神经行为学的影响,以及对脑梗死比率及血清中丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOs)的影响.结果 3,5-二咖啡酰奎宁酸剂9.13、18.25 mg/kg时均能明显降低模型大鼠脑梗死的比率(P＜0.05),降低血清中MDA水平(P＜0.01),增强T-SOD、CAT、GSH-Px的活性(P＜0.05).结论 3,5-二咖啡酰奎宁酸对脑缺血-再灌注损伤有较好的保护作用,其作用机制可能与抗自由基生成有关.
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HPLC-DAD法测定不同产地欧亚旋覆花中7种活性成分
目的：建立HPLC-DAD法同时测定欧亚旋覆花中绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸、芦丁、菠叶素、槲皮素、木犀草素、6-甲氧基木犀草素。方法 Diamonsil C18色谱柱（200 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为乙腈–0.4%枸橼酸水溶液，梯度洗脱；体积流量1 mL/min；柱温30℃；检测波长360 nm；进样量：10μL。结果绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸、芦丁、菠叶素、槲皮素、木犀草素、6-甲氧基木犀草素分别在0.118～2.360、0.261～5.220、0.030～0.600、0.052～0.140、0.081～0.162、0.041～0.820、0.030～0.600μg与峰面积呈良好的线性关系。平均回收率分别为97.22%、97.43%、97.52%、99.48%、98.87%、98.76%、98.39%，RSD 值分别为0.92%、1.16%、1.50%、1.56%、0.79%、0.76%、1.62%（n＝6）。结论该方法准确、简便、重复性好，可用于欧亚旋覆花药材中成分的质量控制。
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HPLC法同时测定绵茵陈中绿原酸等4种有效成分的含量
目的 建立RP-HPLC法同时测定绵茵陈中绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸和金丝桃苷共4种有效成分的含量.方法 采用RP-HPLC法.色谱柱为Phenomenex Luna C18柱(250 mm ×4.6 mm,5rn),以乙腈-体积分数0.05％磷酸水为流动相,梯度洗脱,检测波长为345 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃.结果 绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸和金丝桃苷质量浓度分别在2.609～83.50 mg·L-1(r=0.999 9)、1.853～ 59.31 mg·L-1(r=0.999 6)、0.948 0 ～30.34mg·L-1(r=0.999 8)和0.450 6～14.42mg·L-1 (r=0.999 9)内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率(n=9)分别为96.3％、101.2％、101.4％和96.5％.结论 该方法准确可靠,可用于绵茵陈的质量控制.
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HPLC法同时测定绵茵陈中绿原酸等4种有效成分的含量
目的 建立RP-HPLC法同时测定绵茵陈中绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸和金丝桃苷共4种有效成分的含量.方法 采用RP-HPLC法.色谱柱为Phenomenex Luna C18柱(250 mm ×4.6 mm,5rn),以乙腈-体积分数0.05％磷酸水为流动相,梯度洗脱,检测波长为345 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃.结果 绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸和金丝桃苷质量浓度分别在2.609～83.50 mg·L-1(r=0.999 9)、1.853～ 59.31 mg·L-1(r=0.999 6)、0.948 0 ～30.34mg·L-1(r=0.999 8)和0.450 6～14.42mg·L-1 (r=0.999 9)内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率(n=9)分别为96.3％、101.2％、101.4％和96.5％.结论 该方法准确可靠,可用于绵茵陈的质量控制.
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云南栽培灯盏花指纹图谱建立及4个成分测定
目的 采用HPLC法建立云南(大理、红河、曲靖)栽培灯盏花Erigeron breviscapus(Vant.)Hand-Mazz.的指纹图谱,并测定绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、飞蓬酯乙、灯盏乙素的含有量.方法 分析采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为0.3％磷酸(A)-甲醇(B),梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长335 nm;柱温20℃.结果 HPLC指纹图谱中有17个共有峰,相似度大于0.971.红河栽培灯盏花中灯盏乙素和4个成分的总含有量明显高于大理,但3,5-二咖啡酰奎宁酸显著低于大理,两地绿原酸和飞蓬酯乙相近.结论 红河栽培灯盏花质量更稳定,更有利于质量控制.
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二咖啡酰奎宁酸与人血浆阿司匹林酯酶的分子对接
目的 考察二咖啡酰奎宁酸类化合物对人血浆阿司匹林酯酶活性的影响.方法 HPLC法测定华法林与人源白蛋白的复合物(PDBID:1H9Z)表征的阿司匹林酯酶活性.在药物设计平台Maestro(version 8.5)上选用虚拟筛选模块Glide比较二咖啡酰奎宁酸与靶点蛋白活性的差异.运用同源建模和分子对接技术探究药物相互作用模式.结果 实验组与对照组酶活性间没有统计学差异.分子对接结果显示1,3-二咖啡酰奎宁酸与阿司匹林酯酶间存在较好的结合抑制效应.结论 1,3-二咖啡酰奎宁酸对阿司匹林酯酶有微弱的抑制作用,3,4-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸对阿司匹林酯酶影响不明显.
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波长切换HPLC同时测定鼻通丸中的氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素、噻嗪双酮苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸
目的 建立波长切换高效液相色谱(HPLC)同时测定鼻通丸中的氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素、噻嗪双酮苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸的方法.方法 采用Agilent TC-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),以甲醇-0.1 %磷酸溶液为流动相,进行梯度洗脱,流速0.9 mL/min,柱温30 ℃,进样量为10 μL.结果 氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素、噻嗪双酮苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸6个成分质量浓度分别在 2.850~57.00 μg/mL(r=0.9991),2.480~49.60 μg/mL(r=0.9995),2.120~42.40 μg/mL(r=0.9999),2.740~54.80 μg/mL(r=0.9998),2.380~47.60 μg/mL(r=0.9996),3.060~61.20 μg/mL (r=0.9999)范围内与峰面积呈良好线性关系;6个组分的回收率分别为98.77 %,97.53 %,96.98 %, 99.29 %,98.85 %,100.03 %,相应RSD分别为1.12 %,1.33 %,0.80 %,1.19 %,1.40 %,0.95 %.供试品溶液在室温条件下 12 h 内稳定,RSD≤1.33 %.结论所建立的波长切换HPLC同时测定鼻通丸中氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素、噻嗪双酮苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸的方法,可为鼻通丸的质量控制提供依据.
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波长切换HPLC同时测定鼻通丸中的氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素、噻嗪双酮苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸
目的 建立波长切换高效液相色谱(HPLC)同时测定鼻通丸中的氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素、噻嗪双酮苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸的方法.方法 采用Agilent TC-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),以甲醇-0.1 %磷酸溶液为流动相,进行梯度洗脱,流速0.9 mL/min,柱温30 ℃,进样量为10 μL.结果 氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素、噻嗪双酮苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸6个成分质量浓度分别在 2.850~57.00 μg/mL(r=0.9991),2.480~49.60 μg/mL(r=0.9995),2.120~42.40 μg/mL(r=0.9999),2.740~54.80 μg/mL(r=0.9998),2.380~47.60 μg/mL(r=0.9996),3.060~61.20 μg/mL (r=0.9999)范围内与峰面积呈良好线性关系;6个组分的回收率分别为98.77 %,97.53 %,96.98 %, 99.29 %,98.85 %,100.03 %,相应RSD分别为1.12 %,1.33 %,0.80 %,1.19 %,1.40 %,0.95 %.供试品溶液在室温条件下 12 h 内稳定,RSD≤1.33 %.结论所建立的波长切换HPLC同时测定鼻通丸中氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素、噻嗪双酮苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸的方法,可为鼻通丸的质量控制提供依据.
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HPLC法测定贡菊中1,5-二咖啡酰奎宁酸含量
目的:建立贡菊中1,5-二咖啡酰奎宁酸(IBE-5)的HPLC测定方法.方法:采用高效液相色谱法,色谱条件为Scienhome C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-乙腈-5%醋酸(5∶ 20∶ 75),流速1.0 mL/min,柱温25℃,检测波长327 nm.结果:IBE-5在6.25～200 μg/mL之间浓度与峰面积呈现良好的线性关系,回归方程为Y=3 784.5X-35.21,r=0.9996,平均加样回收率为103.71%,RSD为2.13%(n＝5),测定结果贡菊中IBE-5的平均含量为0.54%.结论:该测定方法简便、准确、可靠,可用于测定贡菊中IBE-5的含量.
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苍耳子炒制前后水煎液中酚酸性成分含量比较
目的：：考察苍耳子炒制前后水煎液中新绿原酸、绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸及总酚酸的含量变化。方法：采用清炒法对3个不同产地苍耳子饮片进行炮制,对苍耳子(生品、炒品)进行水煎煮提取。采用HPLC法测定水煎液中新绿原酸、绿原酸和1,5-二咖啡酰奎宁酸的含量；采用分光度法测定水煎液中总酚酸的含量。结果：苍耳子炒制后水煎液中新绿原酸、绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸及总酚酸含量均有所提高。结论：苍耳子炒制后可增加有效成分的煎出,从而增强疗效。
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HPLC法同时测定神农茶颗粒中的夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去氧地胆草内酯和4,5-二咖啡酰奎宁酸
目的：：建立同时测定神农茶颗粒中夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去氧地胆草内酯、4,5-二咖啡酰奎宁酸4个成分的高效液相色谱测定方法。方法：采用Hypersil C18色谱柱(200 mm ×4.6 mm,5μm)；以乙腈-0.025 mol·L-1磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量：1.3 ml·min-1,检测波长：270 nm(夏佛塔苷和异夏佛塔苷)、208 nm(去氧地胆草内酯)、327 nm(4,5-二咖啡酰奎宁酸),柱温为室温。结果：夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去氧地胆草内酯和4,5-二咖啡酰奎宁酸分别在5.850~117.000,4.650~93.000,4.160~83.200,5.470~109.400μg · ml-1范围内线性良好, r 值均大于0.999,平均加样回收率分别为97.70%、96.87%、97.53%、99.29%,RSD分别为1.40%、1.13%、1.69%、1.01%(n=6)。结论：该方法简便,结果准确,可用于神农茶颗粒的含量测定。
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苍耳子不同部位中绿原酸和1,5-二咖啡酰奎宁酸的含量测定
目的:通过对不同批号苍耳子刺、去刺苍耳子、苍耳子中主要有效成分绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸含量进行测定,对苍耳子去刺是否会对药效产生影响进行探究.方法:采用HPLC法,色谱柱:Kromasil-C18(250 mm×4.6mm,5μm);检测波长:328nm;流速:1.0 ml·min-1;柱温:25℃;进样量:10μl;流动相:A相:乙腈,B相:0.16％磷酸溶液,梯度洗脱对苍耳子不同部位的主要有效成分绿原酸1,5-二咖啡酰奎宁酸含量进行测定.结果:绿原酸和1,5-二咖啡酰奎宁酸在苍耳去刺果实中含量高,而刺中含量低,苍耳子去刺具有一定的合理性.结论:该方法科学先进,稳定可行,实验结果可靠,为苍耳子须去刺工艺的合理性提供了一定依据.
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HPLC法测定地胆草中4,5-二咖啡酰奎宁酸的含量
目的：：建立高效液相色谱法测定地胆草中4,5-二咖啡酰奎宁酸含量的方法。方法：色谱柱为Agilent SB C18柱(250 mm ×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(17∶83)；流速为1.0 ml·min-1；检测波长为327 nm；柱温为30℃,进样量10μl。结果：4,5-二咖啡酰奎宁酸在0.0235~2.3520μg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为98.75%, RSD为1.24%(n=6)。结论：所用方法简便、快速、准确,可作为测定地胆草中4,5-二咖啡酰奎宁酸含量的方法。
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苍耳子炮制前后绿原酸和1,5-二咖啡酰奎宁酸的含量比较
目的:考察苍耳子炮制前后绿原酸和1,5-二咖啡酰奎宁酸的含量变化.方法:采用清炒法对3个不同来源的苍耳子药材进行炮制,通过HPLC法测定苍耳子炮制前后绿原酸和1,5-二咖啡酰奎宁酸的含量.结果:3批苍耳子炮制后绿原酸和1,5-二咖啡酰奎宁酸的含量均降低.结论:该方法简便、快速准确.研究结果为生、炒苍耳子饮片的质量标准制定提供了科学依据.
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高效液相色谱法同时测定楤木不同部位4种成分的含量
目的:建立HPLC同时测定楤木不同部位绿原酸、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸及4,5-二咖啡酰奎宁酸含量的方法.方法:色谱柱:Dikma Kromasil C18柱(250mm×4.6mm,5μm)；流动相；乙腈-0.1％磷酸水溶液,梯度洗脱；测定波长:325 nm.结果:绿原酸、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸及4,5-二咖啡酰奎宁酸的线性范围分别为0.101～5.040 μg(r=0.999 8),0.003～0.128 μg(r=0.999 6),0.078～3.900(r=0.999 8),0.014～0.715(r=0.999 7).平均回收率分别为99.10％(RSD为0.96％),98.26％(RSD为1.38％),99.25％ (RSD为0.83％),98.53％(RSD为1.22％).结论:该方法简便快速、具有良好的重复性和回收率,可作为楤木中这4种成分的定量分析方法.
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高效液相色谱法同时测定楤木不同部位4种成分的含量
目的:建立HPLC同时测定楤木不同部位绿原酸、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸及4,5-二咖啡酰奎宁酸含量的方法.方法:色谱柱:Dikma Kromasil C18柱(250mm×4.6mm,5μm)；流动相；乙腈-0.1％磷酸水溶液,梯度洗脱；测定波长:325 nm.结果:绿原酸、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸及4,5-二咖啡酰奎宁酸的线性范围分别为0.101～5.040 μg(r=0.999 8),0.003～0.128 μg(r=0.999 6),0.078～3.900(r=0.999 8),0.014～0.715(r=0.999 7).平均回收率分别为99.10％(RSD为0.96％),98.26％(RSD为1.38％),99.25％ (RSD为0.83％),98.53％(RSD为1.22％).结论:该方法简便快速、具有良好的重复性和回收率,可作为楤木中这4种成分的定量分析方法.
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1,5-二咖啡酰奎宁酸减轻MPP+所致PC12细胞损伤的机制研究
目的 探讨1,5-二咖啡酰奎宁酸(1,5-diCQA)是否通过激活Nrf2而减轻1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)所致的PC12细胞损伤,并对可能的信号通路进行研究.方法 采用MPP+处理具有多巴胺(DA)能神经元特性的PC12细胞作为帕金森病(PD)的体外模型.实验分为正常对照组、MPP+处理组、1,5-diCQA预处理+MPP+处理组,为了观察1,5-diCQA预处理的浓度-效应关系,将1,5-diCQA的浓度设为10、20、50、100 μmol/L.用CCK8法测定各组细胞存活率,酶标仪检测细胞谷胱甘肽(GSH)水平和活性氧族(ROS)水平,Western blot 检测各组细胞的Nrf2蛋白水平.进一步采用siRNA转染沉默Nrf2,加入MAPK家族一系列激酶抑制剂后再检测上述相关指标.结果 MPP+ (250 mmol/L)处理PC12细胞24 h后,与正常对照组相比,细胞存活率下降,GSH耗竭,ROS生成增多,说明PD细胞模型建立成功.不同浓度的1,5-diCQA预处理可以减轻MPP+导致的细胞损伤,且在一定范围内具有量效关系;不同浓度的1,5-diCQA预处理可以明显上调Nrf2蛋白的水平.沉默Nrf2后,1,5-diCQA预处理对MPP+诱导损伤的PC12细胞的保护作用消失,细胞存活率未能回升[MPP+组vs.MPP++1,5-diCQA组:(19.47 ± 1.65)% vs.(21.13 ± 2.85)%,P=0.352 6],GSH水平在Nrf2敲除的PC12细胞中明显下降[NT siRNA组vs.Nrf2 siRNA组:(15.05 ± 1.71)nmol/mg protein vs.(4.31 ± 0.83) nmol/mg protein,P＜0.001],且1,5-diCQA预处理对GSH耗竭的逆转效应也消失.对MAPK激酶家族的一系列激酶进行信号通路筛选发现,Erk激酶参与了1,5-diCQA通过激活Nrf2而减轻MPP+诱导的PC12细胞损伤这一过程.结论 1,5-diCQA可浓度依赖性地减轻MPP+诱导的PC12氧化应激损伤.这种保护作用是通过激活Erk激酶,进而激活Nrf2,然后上调细胞内源性抗氧化系统来实现的.
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HPLC-DAD法同时测定小儿清解颗粒中9种成分的含量
目的 建立HPLC-DAD法同时测定小儿清解颗粒中9种成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、獐芽菜苷、断氧化马钱素、连翘酯苷A、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸)的含量.方法 采用Agilent Zorbax SB C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、连翘酯苷A、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸的检测波长为325 nm,獐芽菜苷、断氧化马钱素为240 nm,柱温30℃.结果 68 min分析时间内9个成分分离度良好,在各自的检测范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系,r均＞ 0.9995,加样回收率为95.7％～100.6％,RSD均≤2.1％.应用所建立的方法同时测定了2个厂家生产的小儿清解颗粒中各成分的含量,其结果有一定差异.结论 该法简便可行,结果可靠,可为本制剂多指标成分的质量控制提供参考方法.
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HPLC-DAD法同时测定小儿清解颗粒中9种成分的含量
目的 建立HPLC-DAD法同时测定小儿清解颗粒中9种成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、獐芽菜苷、断氧化马钱素、连翘酯苷A、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸)的含量.方法 采用Agilent Zorbax SB C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、连翘酯苷A、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸的检测波长为325 nm,獐芽菜苷、断氧化马钱素为240 nm,柱温30℃.结果 68 min分析时间内9个成分分离度良好,在各自的检测范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系,r均＞ 0.9995,加样回收率为95.7％～100.6％,RSD均≤2.1％.应用所建立的方法同时测定了2个厂家生产的小儿清解颗粒中各成分的含量,其结果有一定差异.结论 该法简便可行,结果可靠,可为本制剂多指标成分的质量控制提供参考方法.
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1,5-二咖啡酰奎宁酸在肾上腺嗜铬细胞瘤细胞缺血再灌注损伤中的作用
目的 研究1,5-二咖啡酰奎宁酸(1,5-diCQA)对缺血再灌注诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)损伤是否有保护作用.方法 用缺糖缺氧4 h/复氧24 h处理PC12细胞作为PC12细胞缺血再灌注的体外模型,实验分为4组:空白对照组、1,5-diCQA (50 μmol/L) 对照组、缺血再灌注组、1,5-diCQA(50 μmol/L)+缺血再灌注组.应用酶标仪测定各组细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放量,荧光显微镜观察并测定细胞内活性氧簇(ROS)含量、线粒体膜电位水平.结果 PC12细胞经缺血再灌注损伤后,与空白对照组比较,细胞LDH释放量及ROS含量显著增加(P<0.05),线粒体膜电位显著下降(P<0.05);1,5-diCQA+缺血再灌注组与缺血再灌注组比较,细胞LDH释放量及ROS含量明显降低(P<0.05),线粒体膜电位显著升高(P<0.05);1,5-diCQA对照组与空白对照组比较,以上3项指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 1,5-diCQA通过减轻氧化应激、保护线粒体功能,减轻缺血再灌注诱导的PC12细胞损伤.
