首页 > 文献资料
-
缺氧后处理对糖尿病性心肌细胞缺氧复氧时保护作用削弱的机制:与DJ-1表达的关系
目的 评价缺氧后处理对糖尿病性心肌细胞缺氧复氧时保护作用削弱的机制及其与D J-1表达的关系.方法 正常培养的H9c2细胞,采用随机数字表法分为6组(n=36):对照组(C组)、缺氧复氧组(H/R组)、缺氧后处理组(HPO组)、质粒转染DJ-1基因组(D组)、质粒转染DJ-1基因+缺氧复氧组(DH组)和质粒转染DJ-1基因+缺氧复氧+缺氧后处理组(DHH组).采用缺氧4h复氧2h的方法制备心肌细胞缺氧复氧损伤模型.C组、H/R组和HPO组采用高糖(30 mmol/L)培养基培养H9c2细胞48 h,H/R组和HPO组制备模型,HPO组复氧前行3个循环的复氧5 min,缺氧5min处理.D组、DH组和DHH组H9c2细胞质粒转染DJ-1基因(pEX-2-EGFP-DJ-1),随后处理对应以上3组.于复氧2h时,采用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,ELISA法检测上清液LDH水平,电镜下观察自噬小体,Western blot法检测细胞DJ-1、p62表达及LC3Ⅱ/Ⅰ比值.结果 与C组比较,H/R组和HPO组细胞存活率、DJ-1表达水平降低,LDH活性升高(P＜0.01);H/R组与HPO组比较上述指标差异无统计意义(P＞0.05).与D组比较,DH组细胞存活率降低,LDH活性升高(P＜0.01);与DH组比较,DHH组细胞存活率、自噬小体数量、LC3Ⅱ/Ⅰ比值升高,LDH活性和p62表达水平降低(P＜0.01);H/R组与DH组比较上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 缺氧后处理对糖尿病性心肌细胞缺氧复氧时保护作用削弱的机制与高糖抑制D J-1表达,降低自噬有关.
-
缺血预处理-后处理对大鼠肠缺血再灌注损伤的影响
目的 评价缺血预处理.后处理对大鼠肠缺血再灌注损伤的影响.方法 清洁级成年雄性SD大鼠40只.体重225～275 g,随机分为5组(n=8):假手术组(S组)仅分离肠系膜上动脉(SMA),不夹闭;肠缺血再灌注组(IIR组)采用夹闭SMA 60 min,再灌注60 min的方法制备肠缺血再灌注损伤模型;缺血预处理组(IPr组)夹闭SMA 10 min,再灌注10 min,余同IIR组;缺血后处理组(IPo 组)夹闭SMA 60 min后,再灌注30 s,缺血30 s,反复3次,再灌注60 min;缺血预处理.后处理组(IPr-IPo组)先行缺血预处理,再行缺血后处理,操作过程同IPr组和IPo组.于再灌注60 min时各组取肠粘膜组织,观察肠粘膜形态并行Chiu评分,检测丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)及髓过氧化物酶(MPO)活性,同时采集动脉血样检测血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素6(IL-6)浓度.结果 与S组比较,其余各组Chiu评分、MDA含量、MPO活性、血浆TNF-α与IL-6浓度升高,SOD活性降低(P<0.05).与IIR组比较,IPr组、IPo组及IPr-IPo组Chiu评分、MDA含量、MPO活性、血浆TNF-α和IL-6浓度降低.SOD活性升高(P<0.01).与IPr组和IPo组比较,IPr-IPo组Chiu评分和MDA含量降低,SOD活性升高(P<0.05).IPr组与IPo组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 缺血预处理-后处理可减轻大鼠肠缺血再灌注损伤,较单独应用时效果好.
-
七氟醚后处理对失血性休克复苏大鼠脑组织需肌醇酶1信号通路的影响
目的 评价七氟醚后处理对失血性休克复苏大鼠脑组织需肌醇酶1(IRE1)信号通路的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠60只,体重300～ 350 g,采用随机数字表法分为5组(n=12):假手术组(Sham组)、失血性休克复苏组(HSR组)、1.2％七氟醚后处理组(SP1组)、2.4％七氟醚后处理组(SP2组)和3.6％七氟醚后处理组(SP3组).采用经右颈总动脉放血30 min(放血量为总血量的40％),1h后经左颈静脉30 min内回输全部自体血的方法制备失血性休克复苏模型.于血液回输即刻,S1组、S2组和S3组分别吸入1.2％、2.4％、3.6％七氟醚30 min.Sham组和HSR组吸入氧气30 min.于放血前(T0)、放血结束即刻(T1)、放血结束30 min(T2)、血液回输前(T3)、血液回输结束即刻(T4)记录MAP,并在T0、T1、T3、T4时采集动脉血标本,行血气分析.于血液回输结束后72 h时行Morris水迷宫实验,随后断头取脑组织,采用免疫组化法检测大鼠海马CA1区caspase-3表达水平;采用Western blot法检测海马组织IRE1及X盒结合蛋白1(XBP1)的表达水平.结果 与Sham组比较,HSR组T1～3时MAP降低,pH值和BE降低,乳酸浓度升高,逃避潜伏期延长,穿越原平台次数减少,海马CA1区caspase-3和海马IRE1和XBP1表达上调(P＜0.05);与HSR组比较,SP2组和SP3组逃避潜伏期缩短,穿越原平台次数增加,海马CA1区caspase-3和海马IRE1和XBP1表达下调(P＜0.05),SP1组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 七氟醚后处理减轻失血性休克复苏大鼠脑损伤的机制可能与激活IRE1信号通路有关.
-
依托咪酯后处理对大鼠缺氧缺糖-复糖复氧皮质神经元线粒体通透性转换孔的影响:与Robo受体的关系
目的 评价依托咪酯后处理对大鼠缺氧缺糖-复糖复氧皮质神经元线粒体通透性转换孔(mPTP)的影响及其与Robo受体的关系.方法 出生24 h内的SD大鼠,体外培养其皮质神经元并接种于6孔板(2 ml/孔),采用随机数字表法分为4组(n=24):对照组(C组)、缺氧缺糖-复糖复氧组(OGD/R组)、依托咪酯后处理组(E组)和依托咪酯后处理+Robo受体阻断剂组(ER组).采用缺氧缺糖90 min,复氧复糖24 h的方法制备神经元缺氧缺糖-复糖复氧损伤模型.E组和ER组复氧复糖即刻于培养基中加入依托咪酯,终浓度6 μmol/L;ER组缺氧缺糖前6h时于培养基中加入Robo阻断剂RoboN,终浓度为1μg/ml.采用Hoechst/PI双染色法测定神经元凋亡情况,采用MTT法测定神经元存活情况,采用比色法测定LDH漏出情况;提取线粒体,测定线粒体通透性转换孔(mPTP)开放程度.结果 与C组比较,OGD/R组、E组和ER组神经元凋亡率、LDH漏出率和mPTP开放程度升高,神经元存活率降低(P＜0.05);与OGD/R组比较,E组神经元凋亡率、LDH漏出率和mPTP开放程度降低,神经元存活率升高,ER组神经元凋亡率和LDH漏出率降低,神经元存活率升高(P＜0.05);与E组比较,ER组神经元凋亡率、LDH漏出率和mPTP开放程度升高,神经元存活率降低(P＜0.05).结论 依托咪酯后处理通过激活Robo受体,抑制mPTP的开放,减轻大鼠皮质神经元缺氧缺糖-复糖复氧损伤.
-
吗啡后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及PI3K/Akt信号通路在其中的作用
目的 评价吗啡后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及磷脂酰肌醇-3激酶,蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路在其中的作用.方法 清洁级雄性SD大鼠70只,体重280～330 g,年龄16～17周.随机分为5组(n=14):假手术组(S组)、缺血冉灌注组(IR组)、吗啡后处理组(M组)、渥曼青霉素+吗啡后处理组(w+M组)和渥曼青霉素组(W组).采用结扎左冠状动脉前降支45 min、再灌注120 min的方法 制备心肌缺血再灌注模型.S组仅穿线,不结扎;M组于再灌注前3 min和再灌注后2 min时经左颈内静脉注射吗啡1.25 mg/kg;W+M组于结扎左冠状动脉前降支前20 min时经左颈内静脉注射PI3K特异性阻断剂渥曼青霉素15μg/kg,并行吗啡后处理;W组于结扎左冠状动脉前降支前20 min时经左颈内静脉注射渥曼青霉素15 μg/kg.于左冠状动脉前降支阻断前即刻、阻断20 min和再灌注120 min(T1-3)时记录心率(HR)、平均动脉压(MAP)和心率.收缩压乘积(RPP);于再灌注120 min时各组随机取9只大鼠,计算心肌缺血和梗塞范围;其余5只大鼠采用Western blot法测定心肌组织总Akt和磷酸化Akt的表达水平.结果 五组HR、MAP、RPP、心肌缺血范围和总Akt表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);与T1时比较,IR组、M组、S+M组和W组再灌注时MAP和RPP均降低(P<0.05);与S组比较,IR组和M组磷酸化Akt表达上调(P<0.05),W+M组和W组差异无统计学意义(P>0.05);与IR组比较,M组心肌梗塞范围缩小,心肌组织磷酸化Akt表达上调(P<0.01),W+M组和w组心肌梗塞范围差异无统计学意义(P>0.05).结论 吗啡后处理可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,可能与进一步激活PI3K/Akt信号通路有关.
关键词： 吗啡 心肌再灌注损伤 1-磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 缺血后处理 -
p38MAPK信号转导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用
目的 评价p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 健康新生SD大鼠,日龄1～3 d,处死后取心室肌组织,培养心肌细胞,随机分为7组:对照组(C组)于CO2培养箱中持续培养3 h;缺氧复氧组(AR组)细胞缺氧2 h,复氧1 h;七氟烷后处理组(SP组)细胞缺氧2 h,复氧开始即刻更换为3%七氟烷饱和的DMEM培养液,孵育20 min,再更换为无血清DMEM培养液,继续复氧40 min;七氟烷后处理+SB203580组(SP+SB组)于七氟烷后处理同时加入SB203580(p38MAPK特异性抑制剂)至5 μmol/L,孵育20 min;七氟烷后处理+二甲亚砜组(SP+DMSO组)于七氟烷后处理同时加入0.1%DMSO,孵育20 min;SB203580组(SB组)于复氧开始时加入SB203580至5 μmol/L,孵育20 min;二甲亚砜组(DMSO组)于复氧开始即刻加入0.1%DMSO,孵育20 min.各组细胞分别接种于24孔培养板(1 ml/孔)、35 mm培养皿(5 mlnd/皿)和50 ml培养瓶(8 ml/瓶)中,每组12孔、6皿和6瓶.于复氧结束后,采用比色法测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性;采用台盼蓝排斥实验测定细胞存活率;采用流式细胞仪测定细胞凋亡率;采用Western blot法测定磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)表达水平.结果 与C组比较,其余各组LDH活性升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,AR组、SP组、SP+SB组、SP+DMSO组和DMSO组p-p38MAPK表达上调(P<0.05);与AR组比较,SP组、SP+SB组和SP+DMSO组LDH活性降低,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,p-p38MAPK表达上调(P<0.05);与SP组比较,SP+SB组、SB组和DMSO组LDH活性升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,p-p38MAPK表达下调(P<0.05).结论 七氟烷后处理可通过激活p38MAPK信号转导通路减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 麻醉药 吸入 缺血后处理 心肌再灌注损伤 -
羟考酮后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响
目的 评价羟考酮后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 清洁级健康成年雄性SD大鼠40只,体重200～ 300 g,采用随机数字表法分为4组(n=10):假手术组(S组)、心肌缺血再灌注组(Ⅰ组)、羟考酮后处理组(O组)和PKC选择性抑制剂白屈菜红碱组(CH组).采用结扎冠状动脉前降支30 min、开放120 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.S组只穿线,不结扎左冠状动脉前降支;CH组于结扎前经颈静脉缓慢注射白屈菜红碱5 mg/kg,给予后立即结扎;O组与CH组于再灌注前2 min经颈静脉缓慢注射羟考酮0.5 mg/kg.于再灌注120 min时颈动脉采集血样,测定血清cTnI和CK-MB的水平.快速处死大鼠后取心脏,采用TTC染色法确定心肌梗死体积.结果 与S组比较,Ⅰ组、O组和CH组血清cTnI和CK-MB水平升高,心肌梗死体积增大(P＜0.05);与I组比较,O组和CH组血清cTnI和CK-MB水平降低,心肌梗死体积减小(P＜0.05);与O组比较,CH组血清cTnI和CK-MB水平升高,心肌梗死体积增大(P＜0.05).结论 羟考酮后处理可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制部分与激活心肌细胞PKC信号通路有关.
-
ERK1∕2信号通路和STAT3信号通路在大鼠二氮嗪后处理心肌保护作用中的关系
目的：评价细胞外信号调节激酶1∕2（ ERK1∕2）信号通路和信号传导与转录激活因子3（ STAT3）信号通路在大鼠二氮嗪后处理心肌保护作用中的关系。方法健康成年雄性SD大鼠60只，体重240～260 g，3月龄，采用随机数字表法，将其分为5组（ n＝12）：假手术组（ SH组）、缺血再灌注组（ I∕R组）、二氮嗪后处理组（ D组）、ERK1∕2抑制剂U0126组（ U组）和STAT3抑制剂Stattic组（ St组）。采用阻断冠状动脉前降支30 min，再灌注120 min的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型。 I∕R组和D组分别于再灌注即刻经股静脉注射0．4％二甲基亚砜1 ml和二氮嗪7 mg∕kg（溶于1 ml 0．4％二甲基亚砜）， U组和St组于再灌注前10 min时经股静脉分别注射U0126100μg∕kg和Stattic 500μg∕kg，余处理同D组。于再灌注120 min时处死大鼠，取左心室心肌组织，测定心肌梗死体积和心肌细胞凋亡指数，采用RT?PCR法检测心肌组织ERK1 mRNA、ERK2 mRNA和STAT3 mRNA的表达水平，采用Western blot法检测心肌组织磷酸化ERK1∕2（ p?ERK1∕2）和磷酸化STAT3（ p?STAT3）的表达水平。结果与S组比较，I∕R组心肌梗死体积和细胞凋亡指数升高，心肌组织ERK1 mRNA、ERK2 mRNA、STAT3 mRNA和p?ERK1∕2、p?STAT3的表达下调（P＜0．05）。与I∕R组比较，D组心肌梗死体积和细胞凋亡指数降低，心肌组织ERK1 mRNA、ERK2 mRNA、STAT3 mRNA和p?ERK1∕2、p?STAT3的表达上调（ P＜0．05）。与D组比较，U组和S组心肌梗死体积和细胞凋亡指数升高，U组心肌组织ERK1 mRNA、ERK2 mRNA、STAT3 mRNA和p?ERK1∕2、p?STAT3的表达下调，S组STAT3 mRNA和p?STAT3的表达下调（P＜0．05），ERK1 mRNA、ERK2 mRNA和p?ERK1∕2的表达差异无统计学意义（P＞0．05）。结论在二氮嗪后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用机制中，STAT3信号通路处于ERK1∕2信号通路的下游。
-
肢体缺血后处理联合亚低温对猪心肺复苏后脑损伤的影响
目的 评价肢体缺血后处理联合亚低温对猪心肺复苏后脑损伤的影响.方法 健康雄性成年白猪18头,体重35～ 40 kg.采用电刺激法诱发室颤10 min,心肺复苏5 min,制备心肺复苏猪脑损伤模型.采用随机数字表法分为3组(n=6):心脏停博复苏组(CA-CPR组)、肢体缺血后处理组(LIPC组)和肢体缺血后处理联合亚低温组(LIPC+TH组).LIPC组在心肺复苏开始时进行肢体缺血后处理;LIPC+TH组同样地实施肢体缺血后处理,同时在复苏成功后,利用降温毯将体温降到32～34℃,维持至复苏后4h,后以1℃/h复温4h.于复苏后24、48和72 h(T1-3)时行神经功能缺损评分(NDS)和神经功能预警评分(NAS),同时经耳缘静脉采集血样,应用ELISA法检测血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)和S100B蛋白浓度.结果 与CA-CPR组比较,LIPC组和LIPC+TH组T1-3时NDS降低,NAS升高,T2,3时血清NSE和S100B蛋白浓度降低(P＜0.05);与LIPC组比较,LIPC+TH组T1-3时NDS降低,NAS升高,T3时血清NSE和S100B蛋白浓度降低(P＜0.05).结论 肢体缺血后处理联合亚低温减轻猪心肺复苏后脑损伤的效果优于单独使用.
-
不同剂量纳洛酮后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响
目的 探讨不同剂量纳洛酮后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响.方法 成年sD大鼠88只,体重270～330 g,随机分为4组(n=22):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(IR组)和不同剂量纳洛酮后处理组(N_(1,2)组).除S组外,其它3组均采用阻断右侧大脑中动脉90 min、再灌注24 h的方法制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型.N_(1,2)组于再灌注即刻分别腹腔注射纳洛酮1、10 mg/kg,S组和m组给予等容量生理盐水.分别于再灌注2、24 h时测定大鼠神经功能障碍评分(NDS);再灌注24 h时测定脑梗死面积和脑组织微管相关蛋白2(MAP2)的表达水平和脑组织血浆容量、徽血管直径和长度.结果 与S组相比,IR组、N_(1,2)组NDS评分均升高,脑梗死面积增大,脑组织MAP2表达水平下调,缺血侧脑组织血浆容量降低,微血管直径和长度减小(P<0.05);与IR组相比,N_2组NDS评分降低,脑梗死面积减小,脑组织MAP2表达水平上调,缺血侧脑组织血浆容量升高,微血管直径和长度增大(P<0.05),N_1组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与N_1组相比,N_2组NDS评分降低,脑梗死面积减小,脑组织MAP2表达水平上调,缺血侧脑组织血浆容量升高,微血管直径和长度增大(P<0.05).结论 纳洛酮后处理可减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤,且呈剂量依赖性.
-
七氟醚后处理对失血性休克复苏大鼠脑组织活化转录因子6表达的影响
目的 评价七氟醚后处理对失血性休克复苏大鼠脑组织活化转录因子6(ATF6)表达的影响.方法 清洁级健康成年雄性SD大鼠36只,体重300～ 350 g,采用随机数字表法分为3组(n=12):假手术组(S组)、失血性休克复苏组(HSR组)和七氟醚后处理组(SP组).采用经右侧颈总动脉放血30 min,放血量为总血容量40％,1h后经左侧颈静脉30 min内回输全部自体血的方法制备大鼠失血性休克复苏模型,SP组在血液回输即刻吸入2.4％七氟醚30 min.于放血前(T0)、放血结束即刻(T1)、放血结束后30 min(T2)、血液回输前(T3)和血液回输结束即刻(T4)记录MAP,并分别 在T0、T1、T3、T4时采集动脉血样行血气分析.于血液回输结束后72 h各组随机取6只大鼠,利用Y迷宫测定认知功能,随后断头处死大鼠取全脑,石蜡包埋切片,采用免疫组织化学法检测海马CA1区caspase-12的表达;各组余下6只大鼠处死取海马,采用Western blot法检测ATF6及caspase-12的蛋白表达水平.结果 与S组比较,HSR组和SP组T1～3时MAP降低,T1.3时pH值和BE降低,血乳酸升高,HSR组累计训练次数增加,记忆保持率下降,海马CA1区caspase-12表达上调,海马组织ATF6和caspase-12表达上调(P＜0.05);与HSR组比较,SP组累计训练次数减少,记忆保持率升高,海马CA1区caspase-12表达下调,海马组织ATF6和caspase-12表达下调(P＜0.05).结论 七氟醚后处理减轻失血性休克复苏大鼠脑损伤的机制与其下调脑组织ATF6表达有关.
-
瑞芬太尼后处理对糖尿病性心肌细胞保护作用削弱的机制:与组蛋白去乙酰化酶3表达的关系
目的 评价组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)与瑞芬太尼后处理对糖尿病性心肌细胞保护作用削弱机制的关系.方法 H9c2细胞在10％胎牛血清DMEM/F12培养基中培养、传代,接种于6孔板(2 ml/孔),接种密度105个/ml,接种12 h后细胞贴壁,换正常糖(5.5 mmol/L)或高糖(25mmol/L) DMEM培养基培养48 h.采用随机数字表法分为6组(n=18):对照组(CON组)、缺氧复氧组(H/R组)、瑞芬太尼后处理组(RPC组)、高糖组(HG组)、高糖+缺氧复氧组(HG-H/R组)和高糖+瑞芬太尼后处理组(HG-RPC组).H/R组、RPC组、HG-H/R组和HG-RPC组弃去培养液,加入Ty-rode液,将培养板置于95％N2-5％CO2培养罐中孵育5h,H/R组和HG-H/R组更换为含10％胎牛血清的相应糖DMEM培养基孵育1h,RPC组和HG-RPC组更换为含终浓度为1μmol/L瑞芬太尼的DMEM培养基孵育1h.于复氧1h时,采用CCK-8法检测细胞活力,AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测细胞HDAC3和caspase-3表达水平.结果 与CON组比较,H/R组细胞活力降低,细胞凋亡率增加,caspase-3与HDAC3表达上调(P＜0.05);与H/R组比较,RPC组细胞活力升高,细胞凋亡率下降,caspase-3和HDAC3表达下调(P＜0.05);与HG组比较,HG-H/R组细胞活力降低,细胞凋亡率升高,caspase-3和HDAC3表达上调(P＜0.05);与HG-H/R组比较,HG-RPC组细胞活力、细胞凋亡率、caspase-3与HDAC3表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 瑞芬太尼后处理对糖尿病性心肌细胞保护作用削弱的机制与高糖上调HDAC3表达有关.
-
迷走神经电刺激后处理联合肢体远隔缺血后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响
目的 评价迷走神经电刺激后处理联合肢体远隔缺血后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠100只,8周龄,体重250～350 g,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=20):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、迷走神经电刺激后处理组(POES组)、肢体远隔缺血后处理组(Rp组)、迷走神经电刺激后处理联合肢体远隔缺血后处理组(POES-RP组).I/R组、POES组、RP组和POES-RP组采用结扎冠状动脉左前降支30 min和再灌注120 min的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型.POES组和POES-RP组于心肌缺血15 min时对右侧迷走神经干实施电刺激30min,电刺激参数:波宽2ms,频率1O Hz,电流强度随HR进行调整,以保持HR较刺激前降低10％.RP组和POES-RP组于心肌缺血20 min时采用止血带结扎双后肢10 min后恢复血流灌注.各组随机取10只大鼠,于再灌注120 min时采集颈动脉血样,采用ELISA法检测血清cTnI、CK-MB、TNF-α、高迁移率组蛋白1( HMGB1)、细胞间粘附分子1(ICAM-1)、IL-1、IL-6和IL-10的浓度；颈动脉采血后,采用伊文氏蓝和TTC双重染色法测定心肌梗死体积.再灌注120 min时,各组随机处死10只大鼠,取缺血区和非缺血区心肌组织,采用ELISA法检测TNF-α、HMGB-1、ICAM-1、IL-1、IL-6和IL-10的含量.结果 与S组比较,I/R组心肌梗死体积、血清cTnI、CK-MB、TNF-α、HMGB1、ICAM-1、IL-1和IL-6的浓度升高,缺血区和非缺血区心肌组织TNF-α、HMGB1、ICAM-1、IL-1、IL-6和IL-10的含量升高(P＜0.05).与I/R组比较,POES组、RP组POES-RP组心肌梗死体积、血清cTnI、CK-MB、TNF-α、HMGB1、ICAM-1、IL-1和IL-6的浓度降低,缺血区和非缺血区心肌组织TNF-α、HMGB1、ICAM-1、IL-1和IL-6的含量降低,POES组和POES-RP组缺血区和非缺血区心肌组织IL-10含量升高(P＜0.05).与POES组比较,POES-RP组心肌梗死体积、血清cTnI、CK-MB、TNF-α和ICAM-1的浓度、缺血区心肌组织ICAM-1和IL-1含量降低,非缺血区心肌组织IL-10含量升高(P＜0.05).与RP组比较,POES-RP组心肌梗死体积、血清cTnI、CK-MB、TNF-α、HMGB1、ICAM-1、IL-1和IL-6的浓度、缺血区心肌组织TNF-α、ICAM-1、IL-1和IL-6的含量降低,IL-10含量升高,非缺血区心肌组织HMGB1、ICAM-1、IL-1和IL-6的含量降低,IL-10含量升高(P＜0.05).结论 迷走神经电刺激后处理联合肢体远隔缺血后处理可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,且联合应用的效果强于单独应用,其机制可能与抑制局部和全身炎性反应有关.
-
线粒体融合蛋白-2表达与糖尿病因素影响大鼠七氟醚后处理心肌保护作用的关系
目的 评价线粒体融合蛋白-2(Mfn-2)表达与糖尿病因素影响大鼠七氟醚后处理心肌保护作用的关系.方法 健康雄性SD大鼠,体重210～260 g,腹腔注射链脲佐菌素60 mg/kg制备糖尿病模型.取糖尿病模型制备成功的大鼠36只,采用随机数字表法分为3组(n-12):假手术组(DMS组)、心肌缺血再灌注组(DMIR组)和七氟醚后处理组(DMSP组).另取正常SD大鼠36只,采用随机数字表法分为3组(n=12):假手术组(NS组)、缺血再灌注组(NIR组)和七氟醚后处理组(NSP组).采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型;NSP组和DMSP组于再灌注前1 min时吸人七氟醚行后处理,呼气末浓度2.5％,持续5 min.再灌注120 min时处死大鼠,取心肌组织,测定心肌梗死体积、细胞凋亡指数和Mfn-2表达,光镜下观察病理学结果,电镜下观察心肌细胞线粒体超微结构.结果 与NS组比较,NIR组和NSP组心肌梗死体积增大,细胞凋亡指数升高,心肌组织Mfn-2表达下调(P＜0.05);与NIR组比较,NSP组心肌梗死体积减小,细胞凋亡指数降低,心肌组织Mfn-2表达上调,DMIR组心肌梗死体积增大,细胞凋亡指数升高,心肌组织Mfn-2表达下调(P＜0.05);与DMS组比较,DMIR组和DMSP组心肌梗死体积增大,细胞凋亡指数升高,心肌组织Mfn-2表达下调(P＜0.05);与DMIR组比较,DMSP组心肌梗死体积、细胞凋亡指数和心肌组织Mfn-2表达差异无统计学意义(P＞0.05);与NSP组比较,DMSP组心肌梗死体积增大,细胞凋亡指数升高,心肌组织Mfn-2表达下调(P＜0.05).NSP组病理学损伤较NIR组减轻.DMSP组病理学损伤较DMIR组未见减轻.结论 糖尿病因素取消大鼠七氟醚后处理心肌保护作用的机制可能与抑制Mfn-2表达上调有关.
-
缺血后处理对大鼠肝缺血再灌注时肝细胞线粒体膜通透性转换和膜电位的影响
目的 评价缺血后处理对大鼠肝缺血再灌注时肝细胞线粒体膜通透性转换和膜电位(△Ψm)的影响.方法 成年健康雄性SD大鼠40只,体重220～260 g,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=8):假手术组(S组)、苍术苷+假手术组(A+S组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血后处理组(IPO组)和苍术苷+缺血后处理组(A+IPO组).采用阻断肝中叶和左叶60 min,恢复血流灌注6 h的方法 建立大鼠肝缺血再灌注模型.S组和A+S组仅游离肝门,不阻断血管;A+S组关腹前静脉注射苍术苷5 mg/kg;IR组制备肝缺血再灌注模型;IPO组于再灌注前行缺血后处理,再灌注1 min,缺血1 min,反复3次;A+IPO组于再灌注前静脉注射苍术苷5 mg/kg.于缺血前即刻和再灌注6 h时,采集左颈静脉血样,测定血清ALT和AST的活性.再灌注6 h时处死大鼠,取肝左叶组织,观察超微结构和细胞凋亡情况,计算凋亡指数,测定细胞色素c(Cyt c)的表达水平、△Ψm和线粒体通透性转换孔(MPTP)活性.结果 与S组比较,A+S组时血清ALT和AST的活性、凋亡指数、Cyt c表达、△Ψm和MPTP活性差异无统计学意义(P＞0.05),IR组、IPO组和A+IPO组再灌注6 h时血清ALT和AST的活性、凋亡指数升高,Cyt c表达上调,△Ψm降低,MPTP活性升高(P＜0.05);与IR组比较,IPO组血清ALT和AST的活性、凋亡指数降低,Cyt c表达下调,△Ψm升高,MPTP活性降低(P＜0.05),肝组织病理学损伤减轻,A+IPO组各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与IPO组比较,A+IPO组血清ALT和AST的活性、凋亡指数升高,Cyt c表达上调,△Ψm降低,MPTP活性升高(P＜0.05),肝组织病理学损伤加重.结论 缺血后处理可抑制肝细胞线粒体膜通透性转换,减少线粒体△Ψm的耗散,从而减轻大鼠肝缺血再灌注损伤.
-
右美托咪定后处理对内毒素致大鼠急性肺损伤的影响
目的 探讨右美托咪定后处理对内毒素(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)的影响.方法 雄性SD大鼠50只,体重200～250 g,7～8周龄,采用随机数字表法,将其分为5组(n=10):对照组(C组)、LPS组和不同剂量右美托咪定后处理组(LD组、MD组和HD组).LPS组、LD组、MD组和HD组尾静脉注射LPS 8 mg/kg制备大鼠ALI模型.注射LPS1h时,LD组、MD组和HD组分别腹腔注射右美托咪定5、10和15 μg/kg,C组和LPS组腹腔注射等容量生理盐水.给予右美托咪定后6h时,左心取血后处死大鼠,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),用ELISA法测定血浆和BALF中TNF-α和IL-6的浓度;取肺组织,测定湿重/干重(W/D)比值,光镜下行肺组织病理学损伤评分,用RT-PCR法测定Toll样受体4(TLR4) mRNA表达.结果 与C组比较,LPS组、LD组、MD组及HD组肺组织W/D比值、病理学损伤评分、血浆和BALF中TNF-α和IL-6的浓度升高,肺组织TLR4 mRNA表达上调(P＜0.05).与LPS组和LD组比较,MD组和HD组肺组织W/D比值、病理学损伤评分、血浆和BALF中TNF-α和IL-6的浓度降低,肺组织TLR4 mRNA表达下调(P＜0.05).LPS组与LD组组间、MD组与HD组组间上述指标比较差异无统计学意义(P＜0.05).结论 右美托咪定后处理可减轻LPS致大鼠ALI,其机制可能与抑制TLR4 mRNA表达上调,从而减轻炎性反应有关.
-
异氟醚后处理对大鼠缺氧缺糖-复氧复糖皮质神经元促凋亡蛋白表达的影响
目的 评价异氟醚后处理对大鼠缺氧缺糖-复氧复糖皮质神经元促凋亡蛋白表达的影响.方法 体外培养出生24 h内的SD大鼠原代皮质神经元,以1×106个/ml的密度接种于6孔板(2ml/孔)培养皿,采用随机数字表法分为3组(n=12):对照组(C组)神经元正常培养;缺氧缺糖-复氧复糖组(OGD/R组)神经元缺氧缺糖30 min后复糖复氧;异氟醚后处理组(Ⅰ组)神经元缺氧缺糖30 min后复糖复氧即刻向培养皿中通入2％异氟醚,培养1h.于培养24h时收集神经元,采用Hoechst/PI双染色法测定神经元凋亡率;采用免疫印迹法测定cmpme-3蛋白的表达;采用PCR法测定Bid、B im和Puma的mRNA表达;采用Westem blot法测定Bid 、Bim和Puma的蛋白表达.结果 与S组比较,OGD/R组神经元凋亡率升高,caspase-3蛋白、Bid、Bim和Puma的mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05);与OGD/R组比较,Ⅰ组神经元凋亡率下降,caspase-3蛋白、Bid、Bim和Puma的mRNA和蛋白表达下调(P＜0.05).结论 异氟醚后处理通过下调促凋亡蛋白表达,抑制大鼠缺氧缺糖-复氧复糖皮质神经元凋亡.
-
PI3K/Akt和JAK/STAT信号转导通路在三种后处理减轻大鼠缺血再灌注损伤中的作用
目的 探讨磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)和Janus蛋白酪氨酸激酶(JAK)/信号转导与转录激活因子(STAT)信号转导通路在迷走神经电刺激后处理、肢体远隔缺血后处理以及迷走神经电刺激后处理联合肢体远隔缺血后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 雄性SD大鼠20只,8周龄,体重290 ～ 320 g,采用随机数字表法,将其分为4组(n=5):缺血再灌注组(1/R组)、迷走神经电刺激后处理组(EVSP组)、肢体远隔缺血后处理组(RLIP组)、迷走神经电刺激后处理联合肢体远隔缺血后处理组(EVSP-RLIP组).采用结扎冠状动脉左前降支30 min再灌注60 min的方法制备心肌缺血再灌注模型.EVSP组和EVSP-RLIP组在心肌缺血15 min时对右侧迷走神经干实施电刺激30 min,参数设置:波宽1 ms,频率10 Hz、刺激电流随大鼠HR进行调整,以保持HR较刺激前降低10％.RLIP组和EVSP-RLIP组在心肌缺血20 min时采用止血带结扎双后肢10 min后恢复血流灌注行肢体远隔缺血后处理.缺血再灌注期间记录血流动力学指标.再灌注60 min时采集颈静脉血样,采用酶联免疫吸附法检测血清肌钙蛋白I(cTnI)和MB型肌酸激酶同工酶(CK-MB)的浓度；处死动物,取缺血区和非缺血区心肌组织,采用Western blot法检测磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白的水平；采用RQ-PCR法检测Akt和STAT3 mRNA的表达水平.结果 与IR组比较,POES组、LRIP组和POES-LRIP组缺血再灌注期间HR降低,血清cTnI和CK-MB浓度降低,缺血区和非缺血区心肌p-Akt和p-STAT3蛋白表达上调,EVSP-LRIP组缺血区和非缺血区心肌Akt和STAT3的mRNA表达上调(P＜0.05).与EVSP组和LRIP组比较,EV SP-LRIP组血清CK-MB浓度降低,缺血区和非缺血区心肌p-Akt、p-STAT3蛋白表达及Akt和STAT3的mRNA表达上调(P＜0.05).结论 PI3K/Akt和JAK/STAT信号转导通路激活后介导了迷走神经电刺激后处理、肢体远隔缺血后处理和两者联合应用时减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用.
-
乳化异氟醚后处理对大鼠心肌缺血再灌注时Nrf2-ARE信号通路的影响：离体实验
目的：评价乳化异氟醚后处理对大鼠缺血再灌注时核转录因子 NF?E2相关因子2（ Nrf2）?抗氧化反应元件（ ARE）信号通路的影响。方法健康雄性SD大鼠，体重250～300 g，4～5月龄，采用Langendorff灌注装置建立大鼠离体心脏灌注模型。取模型制备成功的心脏32个，采用随机数字表法分为4组（ n＝8）：对照组（ C组）、缺血再灌注组（ I∕R组）、乳化异氟醚后处理组（ EIP组）和脂肪乳组（ F组）。平衡灌注20 min后，C组继续灌注100 min；I∕R组32℃下缺血40 min，恢复灌注60 min；EIP组32℃下缺血40 min，于再灌注前即刻灌注含乳化异氟醚1．68 mmol∕L的K?H液2 min，继续灌注37℃含氧的K?H液58 min；F组32℃下缺血40 min，于再灌注前即刻灌注含脂肪乳712 mg∕L 的K?H液2 min，继续灌注37℃含氧K?H液58 min。分别于平衡灌注末及再灌注末记录HR、左室发展压（LVDP）、左室舒张末压（LVEDP）和左心室压力大上升速度（＋dp∕dtmax）。于再灌注末，取左心室心肌组织，观察心肌细胞超微结构，分别采用RT?PCR法和Western blot法检测心肌组织Nrf2、血红素加氧酶?l （HO?1）、醌氧化还原酶1（NQO1）、超氧化物歧化酶1（SOD1）及其mRNA的表达水平。结果与C组比较，再灌注末I∕R组和F组HR、＋dp∕dtmax和LVDP 降低，LVEDP 升高，EIP组LVDP降低，LVEDP升高（ P＜0．05），HR和＋dp∕dtmax差异无统计学意义（ P＞0．05）， I∕R组、EIP组和F组心肌组织Nrf2、HO?1、NQO1和SOD1及其mRNA的表达下调（ P＜0．05）；与I∕R组比较，EIP组和F组再灌注末HR、＋dp∕dtmax和LVDP 升高，LVEDP 降低，EIP 组心肌组织Nrf2、HO?1、NQO1和SOD1及其mRNA的表达上调， F组心肌组织Nrf2、HO?1、NQO1和SOD1的mRNA表达上调，Nrf2和HO?1的表达上调（ P＜0．05），NQO1和SOD1的表达差异无统计学意义（ P＞0．05）；与EIP组比较，F组再灌注末HR、＋dp∕dtmax和LVDP降低，LVEDP升高，心肌组织Nrf2、HO?1、NQO1和SOD1及其mRNA的表达下调（ P＜0．05）。结论乳化异氟醚后处理可能通过激活Nrf2?ARE信号通路，减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤。
-
异丙酚后处理联合缺血后处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响
目的 探讨异丙酚后处理联合缺血后处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响.方法 健康雄性sD大鼠30只,体重200～250 g,随机分为5组(n=6),假手术组(Ⅰ组)仅开腹;缺血再灌注组(11组)肝脏缺血1 h再灌注4 h;缺血后处理组(Ⅲ组)肝脏缺血1 h后,再灌注10 8,缺血10 8,重复6次进行缺血后处理;异丙酚后处理组(Ⅳ组)肝脏缺血1 h后经尾静脉注射异丙酚10 mg/kg,随后静脉输注异丙酚40 mg·kg~(-1)·h~(-1) h;异丙酚后处理+缺血后处理组(V组)肝脏缺血1 h后进行异丙酚后处理及缺血后处理.于再灌注4 h时测定血清ALT活性、肝组织MDA含量、SOD活性、Bcl-2及Bax的蛋白表达水平,电镜下观察肝细胞超微结构.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组～Ⅴ组血清ALT活性及肝组织MDA含量升高,肝组织Bcl-2蛋白表达上调,Ⅲ组-Ⅴ组肝组织SOD活性升高,Ⅱ组、Ⅲ组及Ⅴ组肝组织Bax蛋白表达上调(P<0.05或0.01);与Ⅱ组比较,Ⅲ组-Ⅴ组血清ALT活性及肝组织MDA含量降低,肝组织SOD活性升高,Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调(P<0.05或0.01);与Ⅲ组比较,Ⅳ组血清ALT活性及肝组织MDA含量降低(P<0.05或0.01).Ⅲ组-Ⅴ组肝组织病理学损伤较Ⅱ组明显减轻.结论 异丙酚后处理联合缺血后处理可减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤,与异丙酚后处理单独应用时效果相同,其机制可能与抑制肝组织脂质过氧化反应及细胞凋亡有关.
