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AP-1在腋臭患者发病过程中的作用
目的:腋臭是美容整形外科的常见病,目前发病机制尚不明确,已证实人体大汗腺中的载脂蛋白D(ApoD)在腋臭患者大汗腺中高表达,并且与腋臭的发生密切相关.探明ApoD在大汗腺细胞中的信号转导通路,可以进一步明确其在腋臭发病过程中的作用机制.JNK信号转导通路与多种疾病的发生有关.课题组前期已经做了JNK1对ApoD调控作用的相关研究,证明了在腋臭发病过程中JNK1是通过调控ApoD的转录来上调ApoD的表达.本实验在课题组前期研究基础上,探讨JNK1下游转录因子AP-1是否在JNK1上调ApoD通路中发挥作用.方法:取腋臭志愿者腋区皮肤组织,进行汗腺细胞培养.把汗腺细胞分为5-二氢睾酮处理组、5-二氢睾酮联合姜黄素处理组和空白对照3个组,用姜黄素抑制AP-1的活性,通过Real-time PCR实验方法检测ApoD在姜黄素抑制下的表达变化.结果:在姜黄素的抑制下,ApoD表达明显降低.在体外培养汗腺细胞加入5-二氢睾酮联合姜黄素处理后,ApoD的表达量在mRNA水平低于单独的5-二氢睾酮处理组和正常对照组(P＜0.05).结论:姜黄素抑制了AP-1的活化导致ApoD的表达降低.在腋臭的发病过程中,JNK1的下游转录因子AP-1对ApoD有明显的上调作用.AP-1可能在JNK1上调ApoD这条通路中扮演了很重要的角色,它可能是JNK1和ApoD的中间转录因子.
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脑微血管内皮细胞条件培养液对MIP-1β诱导大鼠小胶质细胞迁移影响的机制
目的:研究经通络方药作用后的脑微血管内皮细胞条件培养液对MIP-1β诱导的大鼠小胶质细胞迁移的影响,以及由MIP-1β在小胶质细胞上的受体-CCR5介导细胞信号转导通路的调控作用.方法:将通络方药作用后的大鼠脑微血管内皮细胞条件培养液加入到由5nM MIP-1β刺激6h后的原代大鼠小胶质细胞中,利用Transwell细胞迁移系统来观察小胶质细胞迁移,用Western blot法检测小胶质细胞CCR5,p-p38,P-JNK表达情况.结果:脑微血管内皮细胞条件培养液能够显著减少小胶质细胞迁移到Transwell下层的细胞数量(P<0.01),降低小胶质细胞上MIP-1β的受体CCR5表达,同时抑制了其下游信号蛋白p38和JNK的磷酸化.结论:通络方药作用后的脑微血管内皮细胞务件培养液可抑制由MIP-1β诱导的大鼠小胶质细胞迁移,其作用发挥可能是通过抑制MIP-1β的受体CCR5表达,降低了其下游通路上p38和JNK蛋白磷酸化程度实现.
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JNK和MMP-2、TIMP-2在大鼠肝脏纤维化模型中的表达及中药肝复康对其的影响
目的:研究JNK和MMP-2、TIMP-2在肝脏纤维化大鼠模型中的表达以及中药复方制剂肝复康对肝脏纤维化的治疗作用及其机制.方法:大鼠肝脏纤维化模型采用CCl4作用12周(0.5 mg/kg,2次/周);治疗组大鼠在CCl4作用同时从第9周开始,给予肝复康(31.25,312.5 and 3125 mg/kg/d,po);设立正常对照组;所有大鼠于20周末处死;HE染色光镜观察肾脏病理改变,并进行组织学评分;RT-PCR检测肝组织JNK和MMP-2、TIMP-2 mRNA水平.对三者的mRNA水平进行相关性分析.结果:HE染色观察到显著肝脏纤维化改变,肝脏纤维化模型复制成功;模型组JNK和MMP-2、TIMP-2基因表达较正常对照组明显增加(P＜0.01);三者的mRNA水平在各组间均呈显著正相关;GFK中剂量治疗组二者表达显著降低.结论:GFK可以通过抑制JNK和MMP-2、TIMP-2的mRNA表达,发挥抗纤维化的作用.
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乌司他丁对大鼠脑缺血再灌注损伤后的保护作用及其机制研究
目的:探究乌司他丁在脑缺血再灌注损伤中的脑保护作用机制.方法:原代分离培养雄性SD大鼠脑皮质细胞,部分细胞经siRNA沉默HSP70基因.细胞先以无糖培养基在低氧条件下培养,12h后复糖复氧模拟体外缺血再灌注损伤,并实施乌司他丁预处理干预,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,western-blotting检测Bcl-2,Bax,HSP70,JNK和p-JNK蛋白的表达.结果:与对照组比较,模型组脑组织细胞凋亡率明显增多(P＜0.05)、Bcl-2和Bax的表达量均有上调,Bcl-2/Bax的比值显著降低(P＜0.01)、HSP70的表达无显著变化;与模型组比较,乌司他丁处理组脑组织细胞凋亡率明显降低(P＜0.05)、Bax的表达量显著下调(P＜0.05),Bcl-2/Bax的比值显著上调(P＜0.05),HSP70的表达显著上调(P＜0.05),JNK的表达无显著变化、p-JNK则显著下调(P＜0.05).HSP70沉默后乌司他丁的脑保护作用消失,对以上蛋白的表达无显著影响.结论:乌司他丁可能是通过上调HSP70表达进而抑制JNK信号转导通路对缺血再灌注引起的脑损伤起保护作用.
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脑缺血Akt和MAPK磷酸酶负性调节c-Jun N端激酶信号通路
目的:探讨脑缺血再灌后Akt和MAPK磷酸酶与JNK活性下调的关系.方法:采用成年清洁级雄性SD大鼠,建立四动脉阻断前脑缺血再灌注模型.缺血10min后再灌注不同时间(15min,1h,4h,24h).侧脑室分别给予PDK抑制剂LY294002(LY)和MAPK磷酸酶抑制剂放线菌酮(CHO).免疫印迹观察p-Akt和p-JNK蛋白水平变化.结果:脑缺血再灌注4h,JNK的活性能被Akt抑制剂LY294002增强,表明激活的Akt能够下调JNK信号通路.而MAPK磷酸酶抑制荆放线菌酮能上调缺血后JNK活性,提示MAPK磷酸酶通过去磷酸化参与了JNK的活性抑制.结论:前脑缺血再灌后,激活Akt和MAPK磷酸酶参与了JNK信号通路负性调节,是抑制JNK诱导缺血后中枢神经损伤的重要机制.
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全反式维甲酸对MAPK信号传导通路的影响
目的 研究全反式维甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)对人胃腺癌细胞株(SGC-7901)丝裂原激活的蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase,MAPK)信号转导通路的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测ATRA对SGC-7901细胞增殖的抑制作用;Western blot方法检测不同浓度AT-RA处理后的SGC-7901细胞ERK1/2、P38、JNK及其磷酸化蛋白的表达情况.结果 10-9mol/L-10-5mol/L的ATRA作用SGC-7901细胞48 h,能显著抑制细胞增殖,其抑制率分别为(10.2±0.5)%、(15.3±0.5)%、(17.0±0.7)%、(28.4±1.0)%和(36.9±0.7)%;Western blot检测显示ATRA对细胞中ERK1/2、P38、JNK及P-JNK蛋白的表达没有明显影响,但P-ERK1/2蛋白显著减少,P-P38蛋白明显增加.结论 ATRA抑制SGC-7901细胞增殖可能与其调节ERK1/2 MAPK和P38 MAPK途径有关.
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C-jun氨基末端激酶与缺血性脑损伤
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路之一c-Jun氨基末端激酶(c-Jun amino-terminal kinase,JNK)是广泛存在神经细胞中的一条信号转导途径,由一组级联活化的丝/苏氨酸蛋白激酶组成,对于细胞凋亡有重要调控作用.文章对JNK在脑缺血性损伤中的激活作用作简要介绍.
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失重下骨碎补总黄酮经JNK通路促成骨细胞增殖研究
目的 观察失重下骨碎补总黄酮对成骨细胞增殖的作用及JNK通路变化,确定骨碎补总黄酮促成骨细胞增殖的机制.方法 提取大鼠成骨细胞,体外培养,建立失重模型,加高、中、低骨碎补血清培养液,观察细胞形态学变化,MTT检测增殖情况,PNPP测定ALP活性,PCR测定JNK通路.结果 与空白对照组和小剂量组相比,中、大剂量组细胞增殖能力及ALP活性值均明显升高,且具有统计学意义(P＜0.05),与阳性对照组接近.JNK通路表达明显降低.结论 骨碎补可促进模拟失重状态下成骨细胞的增殖,其作用机制可能是通过抑制JNK通路实现.
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麦门冬汤对哮喘模型大鼠ERK1/2、JNK和p38 MAPK蛋白表达的影响
目的 观察麦门冬汤对哮喘模型大鼠肺组织中ERK1/2、JNK和p38 MAPK蛋白表达的影响,为临床应用提供实验依据.方法 采用卵蛋白(OVA)致敏方法复制哮喘大鼠模型,再灌胃给予不同浓度的麦门冬汤水煎液.ELISA法和免疫组化法检测肺组织中ERK1/2、JNK和p38 MAPK蛋白表达的变化.结果 与正常组相比较,模型组大鼠肺组织中ERK1/2、JNK和p38 MAPK蛋白表达明显增加,与模型组相比较,麦门冬汤可明显抑制ERK1/2、JNK和p38 MAPK蛋白表达.结论 麦门冬汤可能通过抑制ERK1/2、JNK和p38 MAPK蛋白表达,调控炎性细胞因子水平,从而对哮喘起到防治作用.
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JNK通路参与17羟岩大戟内酯B诱导的U251细胞凋亡
目的：探讨c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路在17羟岩大戟内酯B（HJB）诱导人脑胶质瘤细胞U251细胞凋亡中的作用及机制。方法体外培养U251细胞24 h，分为5组，分别用MTT法检测细胞活性、流式细胞仪检测细胞凋亡率、分光光度法检测Caspase-3和Caspase-9的相对活性、Western Blot法检测JNK和p-JNK的蛋白表达。结果与空白对照组相比，单独应用HJB可使U251细胞活性减弱，早期凋亡率明显升高，Caspase-3及Caspase-9的相对活性升高（ P＜0．05）；与单独应用HJB组相比，应用HJB和SP600125可使U251细胞活性升高，细胞早期凋亡率明显下降，Caspase-3及Caspase-9的相对活性下降（ P＜0．05）。 Western Blot结果显示HJB可使p-JNK蛋白表达明显增强，经SP600125预处理后，p-JNK蛋白表达明显减弱（P＜0．05）；JNK蛋白表达没有变化（P＞0．05）。结论 HJB可抑制U251细胞增殖和诱导细胞凋亡；JNK信号途径活化介导了HJB诱导的凋亡；JNK途径的活化导致了下游caspase途径的活化。
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JNK通路参与Aβ1-40诱导的海马神经干细胞凋亡过程
目的:探讨在Aβ1-40诱导的海马神经干细胞凋亡过程中JNK通路的作用.方法:应用Western blot技术检测Aβ1-40(5μM)慢性孵育12h、24h和48h对海马神经干细胞JNK磷酸化水平的影响;在Aβ1-40(5μM)孵育前30min加入JNK阻断剂SP600125(10μM)共同孵育12h、24h和48h,应用Hoehest33342染色和MTT法检测SP600125与Aβ1-40联合作用后对神经干细胞凋亡的影响.结果:在不同时间点,JNK磷酸化水平均增加,24h表达显著(P<0.01);给予SP600125后可使Aβ1-40诱导的神经干细胞死亡明显减轻.结论:Aβ1-40激活JNK通路后促进了海马神经干细胞凋亡.
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ERK和JNK在胃癌中的表达
目的:研究人胃癌组织及癌旁正常黏膜组织中ERK蛋白和JNK蛋白的表达情况及两者与胃癌临床病理特征的关系.方法:采用免疫组化方法,检测60例人胃癌组织及癌旁正常组织中ERK和JNK的表达程度.结果:(1)胃癌中ERK表达阳性率为63.3％ (38/60)明显高于癌旁正常组织16.7％(10/60) (P＜0.05),其表达水平与癌组织浸润程度、淋巴结转移及TNM分期有关(P＜0.05),与癌肿的分化程度无关(P＞0.05).(2)胃癌中JNK的表达阳性率75.0％(45/60)明显高于正常胃黏膜组织21.7％(13/60),JNK的表达水平与癌组织的分化程度、浸润程度、淋巴结转移及TNM分期有关(P＜0.05).结论:ERK和JNK蛋白在胃癌的发生、发展进程中起作用,对研究胃癌与ERK和JNK转导途径、胃癌的诊断及治疗有重要的参考价值.
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复元胶囊对骨关节炎软骨细胞凋亡中JNK/Bax信号通路的影响
目的 探讨复元胶囊对实验性骨关节炎软骨细胞凋亡影响的作用机制.方法 体外培养人软骨肉瘤细胞(SW1353),给予白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)刺激,复元胶囊含药血清和c-Jun氨基末端激酶(c-JunN-terminal kinase,JNK)的特异抑制剂SP600125干预,随机分为正常组、模型组、抑制剂组、复元胶囊组、复元胶囊+抑制剂组,流式细胞仪分别检测细胞周期百分率和细胞凋亡率,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞信号因子磷酸化c-Jun氨基末端活化蛋白激酶(p-JNK)和Bax的蛋白表达.结果 IL-1β诱导SW1353后,模型组G1期的百分比增加,S期及G2期的百分比减少,细胞凋亡率显著增高(P＜0.01);抑制剂组、复元胶囊组和复元胶囊+抑制剂组G1期的百分比减少,S期及G2期的百分比增加,细胞凋亡率显著降低,p-JNK和Bax表达明显减少(P＜0.05或P＜0.01),其中以复元胶囊+抑制剂组的各项指标变化显著(与模型组比较,P＜0.01).结论 复元胶囊可抑制骨关节炎软骨细胞中p-JNK及下游信号因子Bax的活化和表达,抑制细胞凋亡并促进增殖,可用于防治骨关节炎.
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常氧和低氧条件下介导神经干细胞增殖的信号通路分析
目的:观察常氧和低氧环境下大鼠大脑皮层神经干细胞(NSCs)体外增殖情况,并比较PI3K/Akt、JNK和Notch 3条信号通路在不同氧环境下NSCs增殖时所发挥作用的异同.方法:在常氧和4％O2浓度下悬浮培养新生SD大鼠大脑皮层NSCs,在培养细胞24、36和48 h时使用图像分析软件测量NSCs增殖后所形成的神经球直径.结果:在培养细胞24、36和48 h后,在不同时间段低氧组神经球直径都大于常氧对照组；在常氧浓度环境下分别使用0.5％ DMSO和10 μmol/LLY294002(PI3K/Akt抑制剂)、SP600125(JNK抑制剂)和DAPT (Notch抑制剂)培养细胞,在培养细胞36 h和48 h时,3个抑制剂组神经球直径都小于常氧DMSO对照组.在低氧浓度环境下培养细胞36 h和48 h时,LY294002和SP600125 组神经球直径与低氧DMSO组相比均无差异,而DAPT组神经球直径明显小于低氧DMSO对照组.结论:PI3K/Akt、JNK和Notch 3条信号通路均介导了常氧浓度环境下NSCs增殖,但低氧浓度环境诱导的NSCs增殖主要由Notch信号通路介导.
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姜黄素对大鼠胸主动脉瘤JNK信号通路的影响
目的:探讨姜黄素对大鼠胸主动脉瘤形成过程中JNK信号的影响.方法:成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、动脉瘤组和姜黄素治疗组.采用氯化钙(CaCl2)诱导法制备胸主动脉瘤模型,术后4周取材.H-E染色及地衣红染色观察胸主动脉组织学改变；免疫组织化学检测动脉瘤壁p-JNK和p-c-Jun的表达.结果:姜黄素可明显抑制胸主动脉的扩张.与对照组比较,动脉瘤组p-JNK和p-c-Jun表达水平明显升高,而姜黄素能有效抑制动脉瘤中JNK和c-Jun的磷酸化.结论:姜黄素抑制胸主动脉瘤的发展有可能与其抑制JNK信号相关.
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MAPK信号通路在诱导Th1/Th2分化中的作用
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是介导细胞外刺激到细胞内反应的重要信号转号系统,在诱导Th1/Th2分化中起重要作用,其中JNK1能够抑制初始CD4+T细胞向Th2分化,JNK2诱导其向Th1分化并能促进相应细胞因子的分泌;p38既能诱导Th1分化,也能促进Th2分化;ERK1/2则能诱导CD4+T细胞向Th2分化.
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MAPK信号通路在诱导Th1/Th2分化中的作用
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是介导细胞外刺激到细胞内反应的重要信号转号系统,在诱导Th1/Th2分化中起重要作用,其中JNK1能够抑制初始CD4+T细胞向Th2分化,JNK2诱导其向Th1分化并能促进相应细胞因子的分泌;p38既能诱导Th1分化,也能促进Th2分化;ERK1/2则能诱导CD4+T细胞向Th2分化.
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抑制JNK活性对HepG2细胞胰岛素信号通路的影响
目的 研究并探讨JNK活性对胰岛素信号传递的影响.方法 用不同种类的JNK抑制剂处理人肝癌细胞株(HepG2)细胞12 h,随后加入10 nmol/L胰岛素孵育5 min以激活细胞胰岛素信号通路,收集细胞蛋白样品用Western印迹方法检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)及胰岛素信号通路分子蛋白表达情况.结果 JNK抑制剂(JNKi-Ⅷ)可有效抑制HepG2细胞中JNK的活性,并且JNKi-Ⅷ可浓度依赖性地抑制胰岛素信号传递.与JNK-Ⅷ类似,其他JNK抑制剂(JNKi-Ⅴ、JNKi-Ⅲ和SP600125)均可抑制HepG2细胞中的胰岛素信号通路.结论 在肝实质细胞HepG2中,抑制JNK活性可阻断胰岛素信号通路.
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同型半胱氨酸激活JNK信号通路诱导血管平滑肌细胞氧化应激的损伤研究
目的 观察同型半胱氨酸(Hcy)在A10血管平滑肌细胞株(vascular smooth muscle cells,VSMC)上对氧化应激的影响及其可能的分子机制.方法 在体外培养的A10细胞上,用3个不同浓度(5、30和100μmol/L)的Hcy孵育细胞共48 h,随后破裂细胞,一方面使用试剂盒检测细胞裂解液中的活性氧(ROS)水平、H2 O2含量、总抗氧化能力(T-AOC),以评价其氧化应激情况.另一方面,用免疫印迹法检测磷酸化应激活化蛋白激酶(JNK)及总JNK的表达量.结果 Hcy可诱导ROS、H2O2的含量升高,而导致T-AOC的水平下降.而且,Hcy增加了磷酸化JNK的蛋白表达量(P<0.05).结论 Hcy在VSMC上通过激活JNK信号通路诱导氧化应激.
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JNK与Akt通路在夏枯草抑制人淋巴瘤细胞生长中的作用
目的 研究夏枯草对淋巴瘤细胞(Raji细胞)生长的影响及可能的机制.方法 参考临床常用剂量,采用50g/L夏枯草(夏枯草组)、50 g/L夏枯草+20 μmol/L JNK特异抑制剂SP600125(SP600125组)、50 g/L夏枯草+1 μmol/L Akt特异抑制剂Wortmannin(Wortmannin组)处理Raji细胞,以同体积生理盐水作为对照组,应用MTT法检测各组的细胞增殖率.蛋白免疫印迹法检测各组的JNK和Akt磷酸化水平.结果 夏枯草组细胞增殖率低于对照组(P<0.05),SP600125组细胞增殖率比夏枯草组增高(P<0.05),Wortmannin组细胞增殖率比夏枯草组降低(P<0.05);JNK磷酸化水平在夏枯草组中明显升高(P<0.05),SP600125可以抑制其磷酸化(P<0.05),Wortmannin不能抑制其磷酸化(P>0.05);Akt磷酸化水平在夏枯草组中降低(P<0.05),SP60015及Wortmannin均可抑制其磷酸化(P<0.05).结论 夏枯草可以明显抑制Raji细胞的生长,这种抑制作用可能是通过激活JNK信号转导通路,抑制Akt通路激活实现的.
