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异补骨脂素对H2O2诱导氧化损伤的人晶状体上皮细胞NF-κB表达的影响
目的:探讨具有雌激素活性的中药单体异补骨脂素(ISR)对过氧化氢(H2O2)诱导氧化损伤的人晶状体上皮细胞(HLEC)NF-κB表达的影响.方法:实验分正常组、H2O2组、雌二醇(E2)组、异补骨脂素(ISR)组、核因子-κB(NF-κB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)组,流式细胞术(FCM)测定上述5组标本中HLEC的NF-κB的表达率.结果:以上各组,NF-κB的平均荧光表达率分别为:9.53%、39.87%、25.18%、23.23%、5.90%;正常HLEC能表达一定的NF-κB,H2O2组NF-κB的表达率明显增高,NF-κB抑制剂PDTC组的NF-κB的表达率明显降低,ISR组和E2组的NF-κB的表达率则介于以上两组之间.结论:H2O2可以诱导人晶状体上皮细胞NF-κB的活化表达,具有雌激素活性的中药单体ISR可以有效抑制NF-κB的活化表达,其抗HLEC氧化损伤作用可能是通过下调NF-κB表达实现的.
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白内障手术摘出前囊下晶状体上皮细胞中β1整联蛋白、Fas蛋白的表达
目的 了解糖尿病性白内障及并发性(高度近视)白内障晶状体上皮细胞(LECs)中β1整联蛋白与Fas蛋白的表达情况,以探讨其与LEcs凋亡的关系.方法 应用免疫组化、流式细胞仪和共聚焦显微镜对52例白内障手术患者术中取出的前囊下LECs分别定性、定量及定位检测β1整联蛋白和Fas蛋白的表达.结果 糖尿病性及并发性(高度近视)白内障患者免疫组化结果 表明在其LECs中均有β1整联蛋白、Fas蛋白表达;流式细胞定量检测其LECs中β1整联蛋白的表达量分别为68.41±16.98%、39.22±21.18%,Fas蛋白的表达量分别为63.46±13.30%、31.46±17.25%.LECs中β1整联蛋白、Fas蛋白的表达在两种白内障间存在统计学差异(P＜0.05).β1整联蛋白与Fas蛋白在IJECs中的表达具有正相关性.共聚焦显微镜观察发现β1整联蛋白与Fas蛋白大部分共同定位于LECs的细胞膜上.结论 Fas蛋白介导的LECs的凋亡在糖尿病性白内障的形成中起重要的作用,而在并发性(高度近视)白内障LECs凋亡中可能存在其他通路.β1整联蛋白的作用很可能是一种促进LECs凋亡的蛋白,它与Fas蛋白一起促进LECs凋亡.
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蜕皮甾酮对氧化损伤的HLEC线粒体超微结构的影响
目的 探讨植物雌激素蜕皮甾酮(ecdysterone,ECR)保护氧化损伤的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)亚细胞水平的形态结构的变化.方法 实验分4组:正常对照组、过氧化氢(hy-drogen peroxide,H2O2)组、雌二醇(β-Estradiol,E2)和ECR组.密度梯度离心法分离出HLEC线粒体,透射电镜观察HLEC线粒体超微结构.结果 正常对照组线粒体双层膜结构完整,嵴结构完整,线粒体几乎未受损伤;H2O2组线粒体双层膜结构不完整,嵴结构断裂消失,线粒体受损伤;ECR组和E2组线粒体双层膜结构稍完整,嵴结构断裂,线粒体受损伤,但较H2O2组情况好.结论 植物雌激素ECR对H2O2诱导氧化损伤的HLEC线粒体超微结构有保护作用.
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Krüppel样因子6对于TGF-β1诱导的晶状体上皮细胞纤维化的调控作用研究
目的 探讨Krüppel样因子6(KLF6)高表达对于转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人晶状体上皮细胞(HLECs)纤维化的促进作用.方法 利用脂质体转染的方法将已成功构建的真核表达质粒pEGFP-C2-KLF6及pSilencer-KLF6转染到HLECs中,经实时定量PCR反应(q-PCR)与反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞中KLF6蛋白的表达水平,以及上皮钙黏素(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达水平.经Transwell细胞迁移实验观察细胞迁移情况.结果 pEGFP-C2-KLF6转染72 h后可有效上调HLECs中KLF6的表达水平,pSilencer-KLF6转染72 h后可有效下调HLECs中KLF6的表达水平(P<0.05),从而为后续实验奠定基础;与对照组相比较,KLF6高表达组细胞中E-cadherin表达水平显著下降,Vimentin表达水平显著增高,细胞迁移能力升高(P<0.05);在0.5 ng/ml TGF-β1刺激72 h后,随KLF6表达量的增加,E-cadherin表达水平进一步降低,而Vimentin表达水平进一步增高,细胞迁移能力进一步升高(P<0.05).结论 高表达的KLF6通过调控E-cadherin和Vimentin的表达水平,促进了TGF-β1所诱导的人晶状体上皮细胞纤维化过程,KLF6基因表达与体外基础条件下的上皮-间充质转化(EMT)相关.通过生物学手段特异性下调KLF6的表达可在一定程度上发挥对晶状体上皮细胞的保护作用.
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人晶状体上皮细胞在不同材料人工晶状体表面黏附特性的比较研究
晶状体后囊膜混浊(posterior capsular opacification, PCO)是白内障摘除术后影响患者远期视力的常见并发症.
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异补骨脂素对氧化损伤的人晶状体上皮细胞的防护作用及其机制
白内障是世界范围内主要的致盲性眼病.晶状体氧化损伤导致白内障,晶状体可依靠一系列抗氧化系统保护其免受氧化损伤.抗氧化系统中,有酶性抗氧化物和非酶性抗氧化物.
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人PAX6基因shRNA慢病毒载体的构建及鉴定
目的 体外构建人PAX6 基因的shRNA慢病毒载体并鉴定.方法 实验研究.设计PAX6基因特异性siRNA靶点,构建PAX6 shRNA重组质粒,构建表达FLAG tag、PAX6以及红色荧光蛋白报告基因的融合蛋白表达质粒,经Western Blot加以验证,使用293T细胞进行有效靶点的外源筛选.构建慢病毒pGCL-GFP载体,在293T细胞中包装病毒,将shRNA重组病毒感染人晶状体上皮细胞系(HLE-B3),检测B3细胞PAX6蛋白表达情况,从而筛选有效靶点.根据PAX6基因的4个候选RNAi靶序列,构建shRNA重组质粒,并构建FLAG tag、PAX6、红色荧光蛋白融合蛋白的表达系统.结果 经验证外源PAX6基因,发现3个候选靶点是有效的RNAi靶点,能使PAX6蛋白表达水平显著降低.在此基础上构建的PAX6 shRNA重组慢病毒载体,显著抑制了HLE-B3细胞PAX6蛋白的内源性表达.结论 成功构建了人PAX6基因的shRNA慢病毒表达载体,在分子水平能够有效沉默靶基因,为后续探讨PAX6对晶状体上皮细胞的生物学作用奠定了基础.
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复方水蛭滴眼液防护人晶状体上皮细胞紫外线损伤的蛋白质组学研究
目的:探讨复方水蛭滴眼液(SZ)防护人晶状体上皮细胞紫外线(UV)损伤的蛋白质组学机制,为将SZ作为防治白内障的有效药物提供实验依据.方法:采用SZ与人晶状体上皮细胞系HLE-B3细胞(HLEC)共同孵育,以吡喏克辛滴眼液(PS)作为阳性对照,经UV照射HLEC后,采用双向凝胶电泳(2-DE)和质谱(MS)技术,寻找HLEC有效的功能蛋白及SZ作用靶点.结果:①UV组与正常组比较:发现13个差异点.其中表达上调的差异点有5个,经质谱鉴定为:T复合蛋白1β亚基、核内不均一核糖核蛋白、磷酸甘油酸变位酶1、阻抑素(pro-hibitin)4种蛋白质;表达下调的差异点有8个,经质谱鉴定为:波形蛋白、半胱氨酰tRNA合成酶、锰超氧化物歧化酶3种蛋白质.②SZ组与UV组比较:发现12个差异蛋白点.其中表达上调的差异点8个,经质谱鉴定为:波形蛋白、半胱氨酰tRNA合成酶、锰超氧化物歧化酶3种蛋白质;表达下调的差异点4个,经质谱鉴定为:核内不均一核糖核蛋白、磷酸甘油酸变位酶1、角蛋白8Ⅱ和阻抑素4种蛋白质.结论:SZ可使UV照射引起HLEC下调的3种蛋白质(波形蛋白、半胱氨酰tRNA合成酶、锰超氧化物歧化酶)上调,又可使UV照射引起上调的4种蛋白质中的3种蛋白质下调(核内不均一核糖核蛋白、磷酸甘油酸变位酶1、阻抑素).说明在SZ防护UV损伤中,以上6种蛋白质可能起重要作用.
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复方SZ滴眼液和阿魏酸钠对紫外线损伤的人晶状体上皮细胞抗氧化酶及其基因表达的影响
目的:研究复方SZ滴眼液(Compound shui zhi eye drop,SZ)和阿魏酸钠(Sodium ferulate,SF)对紫外线(Uhravlolet,uv)损伤的人晶状体上皮细胞抗氧化酶及其基因表达的影响.方法:采用UV照射体外培养的人晶状体上皮细胞(Human lens epithelial cell,HLEC),同时用SZ、SF和吡喏克辛钠滴眼液(Pirenoxlne sodium,ps)与HLEC共同孵育,并检测HLEC中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-px)和过氧化氢酶(Catalase,CAT)的活性和SODmRNA、GSH-pmRNA和CATmRNA的基因表达.结果:UV组的HLEC抗氧化酶活性和基因表达均比对照组显著降低(P<0.01).SZ、SF和PS组的SOD、GSH-px和CAT的活性显著高于UV组(P<0.01,P<0.05);SODmRNA、GSH-pxmRNA争CATmRNA的表达也显著高于UV组(P<0.01).结论:SZ、SF和PS均能防护UV照射引起的HLEC氧化损伤,SZ和SF的作用优于PS.
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人晶状体上皮细胞内热休克蛋白mRNA的表达
背景:晶状体独特的解剖的位置使其长期暴露于一种应激的环境中.所以,晶状体需要持续的保护作用来抵抗微环境诱导的应激,而热休克蛋白则在机体处于应激情况下发挥着自身防御作用.目的:观察外源性应激条件下晶状体中热休克蛋白mRNA表达的变化.设计:重复测量,对比观察性实验.单位:佳木斯大学附属第一医院眼科.材料:人晶状体上皮细胞系LEC-B3细胞系由中国医科大学附属第一医院的眼科学系提供.RT-PCR试剂盒购于日本宝生物有限公司.方法:实验于2003-09/2004-09在中国医科大学卫生部小儿先天畸形实验室完成.取指数生长的晶状体上皮细胞用于实验,细胞分别在高温(45 ℃)和氧化(50 mmol/L H2O2)条件下培养30 min后将细胞于37 ℃普通培养介质中使其复原,分别暴露0,2,4,6,16和24 h.采用反转录聚合酶链反应检测人晶状体上皮细胞热休克蛋白27、热休克蛋白70的表达.主要观察指标:人晶状体上皮细胞热休克蛋白27、热休克蛋白70的表达.结果:生理状态下和应激状态下人晶状体上皮细胞均有热休克蛋白的表达.热应激和氧化应激后2 h热休克蛋白mRNA的水平增加.但是每种状态下热休克蛋白27和热休克蛋白70的表达到达峰值的时间间隔为2～6 h,以后逐渐降低,但是它们全部在16 h仍维持较高水平.结论:应激环境诱导人晶状体上皮细胞中热休克蛋白27 mRNA和热休克蛋白70 mRNA的过度表达,这可能对晶状体起着重要保护作用.
关键词： 应激 热休克蛋白(HSP) 人晶状体上皮细胞 -
PDGF-α受体沉默对人晶状体上皮细胞增殖及凋亡的影响
目的 研究血小板源性生长因子-α受体沉默对人晶状体上皮细胞增殖及凋亡的影响,为治疗后发性白内障提供实验依据.方法 体外培养人晶状体上皮细胞SRA01/04,用脂质体将合成的血小板源性生长因子-α受体反义寡核苷酸(PDGFR-αASODN)处理SRA01/04,MTT法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡;Hoechst33258荧光染料染色法分析细胞凋亡;RT-PCR检测PDGF-α受体的表达.结果 PDGFR-αASODN作用于SRA01/04细胞24 h～72 h,SRA01/04细胞增殖受抑制,且72 h时对细胞的抑制作用明显,与低浓度药物组比较,高浓度药物组对细胞的抑制作用增强(P＜0.05);实验组细胞凋亡率分别为(3.22±0.25)％、(5.29±0.27)％,与对照组(0.75±0.67)％和错义寡核苷酸组(1.46±0.60)％比较,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组G1期细胞分布率分别为(53.31±1.30)％、(59.98±0.95)％,与对照组(47.73±1.18)％和错义寡核苷酸组(49.48±1.09)％比较,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组PDGF-α受体在SRA01/04中表达下调.结论 PDGF-α受体沉默能抑制人晶状体上皮细胞的增殖,诱导其凋亡.
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体外培养HLEC在软性IOL表面生长状况的研究
目的 分析比较体外培养的人晶状体上皮细胞(HLEC)在三种软性材料人工晶状体(IOL)表面的粘附和生长状况.方法 取体外培养的幼儿继一代晶状体上皮细胞接种于水凝胶(HEMA)、硅凝胶(SI)和丙烯酸酯(Acrylic)三种软性材料的人工晶状体光学部表面,分别于接种后的1、3及10天计数单位面积人工晶状体表面的人晶状体上皮细胞数并观察细胞形态特征.结果 体外培养的人晶状体上皮细胞在三种软性材料人工晶状体表面的粘附和生长状况存在显著差异丙烯酸酯材料表面粘附生长的人晶状体上皮细胞多,硅凝胶材料次之,水凝胶为少.结论 不同人工晶状体材料表面对体外培养的人晶状体上皮细胞粘附和生长作用具有较大的差异,可能是影响后囊膜混浊的重要因素.
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微波辐射后晶状体上皮细胞与未辐射晶状体上皮细胞蛋白质组双向电泳图谱比较
[目的]比较正常晶状体上皮细胞与微波辐射后晶状体上皮细胞蛋白质组双向电泳图谱差异,从蛋白质组水平初步探索微波辐射对人眼晶状体的损伤.[方法]体外培养人晶状体上皮细胞株,随机分为实验组和对照组,实验组用SAR值为4.0 W/kg的1800 MHz制式微波辐照2 h,对照组同一辐射箱培养但不辐射.辐照后立即提取总蛋白质,固相pH梯度(IPG)等电聚焦双向凝胶电泳进行蛋白质分离,银染显色的凝胶通过GS-800扫描仪获取图像,使用PDQuest专业图像分析软件分析电泳图像.[结果]正常晶状体上皮细胞与微波辐射后晶状体上皮细胞分别检出897个和981个蛋白质斑点.对2张电泳图进行匹配后,发现有4个蛋白质点在辐射后细胞蛋白质组图谱中上调表达,3个蛋白质点下调表达.[结论]初步建立了人晶状体上皮细胞比较蛋白质组学的实验方法;差异蛋白质的发现为深入理解辐射性白内障发病机制提供了有益的线索.
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PP242对人晶状体上皮细胞增殖的抑制作用及GRIM-19表达的影响
目的 观察PP242对体外培养的人晶状体上皮细胞(HLEC)增殖和GRIM-19表达的影响.方法 对永生系人晶状体上皮细胞SRA01/04进行培养及传代,Cell Counting Kit-8比色法检测PP242(100,250,500,750,1 000 nmol/L)处理细胞株SRA01/04后12,24,48 h细胞生长情况；应用免疫印迹法及实时定量RT-PCR检测使用PP242(100,250,500 nmol/L)培养细胞48 h后GRIM-19及其mRNA的表达情况.结果 100,250,500,750,1 000 nmol/L PP242对人晶状体上皮细胞系SRA01/04作用12,24,48 h后,其抑制率12 h组分别为8.59％,14.53％,19.62％,23.01％,28.80％;24 h组分别为10.22％,19.67％,34.92％,42.90％,46.86％;48 h组分别为24.19％,48.13％,54.54％,61.36％,65.34％,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)；100,250,500 nmol/L PP242处理人晶状体上皮细胞48 h后,免疫印迹法检测结果显示GRIM-19蛋白的表达水平逐渐增强；实时定量RT-PCR检测结果显示,GRIM-19 mRNA表达增强,绝对定量mRNA结果分别为0.700±0.112,0.994±0.128,1.584±0.173,与正常对照组(0.456±0.177)比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PP242对体外培养的人晶状体上皮细胞的增殖存在抑制作用,其作用强度呈浓度和时间依赖性；人晶状体上皮细胞中存在GRIM-19的表达；PP242在抑制人晶状体上皮细胞的增殖过程中可上调GRIM-19的表达.
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PP242对人晶状体上皮细胞凋亡的诱导及凋亡相关蛋白Bax表达的影响
目的 研究PP242对人晶状体上皮细胞(HLECs)凋亡的诱导及凋亡蛋白Bax表达的影响.方法 用不同浓度PP242处理人晶状体上皮细胞系SRA01/04,分别用浓度为0、250、500、750、1 000 nmol/L的PP242处理HLECs 48 h后,Annexin V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用实时定量PCR及Western blotting方法检测Bax的mRNA及蛋白的表达.结果 250、500、750和1 000 nmol/L PP242对人晶状体上皮细胞系SRA01/04作用48 h后,早期凋亡率分别为7.20％±0.36％、13.77％±0.21％、16.31％±0.20％和18.67％±0.49％,与对照组(0 nmol/L)差异有统计学意义(P＜0.05).Western blotting结果显示,随着PP242浓度的增加,Bax蛋白表达量增加,与对照组(0 nmol/L)比较差异有统计学意义(P＜0.05);实时定量PCR结果显示,Bax mRNA表达量随PP242药物浓度的增加而增加,相对定量mRNA结果分别为2.157±0.125、3.733±0.302、5.596±0.261和7.436±0.167,与对照组(0 nmol/L)比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PP242可以诱导HLECs的凋亡,增加其凋亡蛋白Bax的表达.
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PP242对人晶状体上皮细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达的影响
目的：探讨PP242对人晶状体上皮细胞凋亡相关蛋白Bcl?2表达的影响。方法采用不同浓度PP242处理培养传代的永生系人晶状体上皮细胞系SRA01/04。采用MTT法检测处理24、48 h后的细胞生长抑制率，采用实时定量RT?PCR和免疫印迹法检测不同浓度PP242处理48 h后Bcl?2 mRNA和蛋白表达水平的变化情况。结果100、250、500、750、1000、1500 nmol/L PP242对人晶状体上皮细胞SRA01/04作用24、48 h后，细胞生长抑制率24 h组分别为7.55%、9.43%、16.98%、22.64%、26.42%、30.19%，48 h组分别为11.11%、23.81%、36.51%、42.86%、49.21%、63.49%，与对照组（0 nmol/L）比较，差异均有统计学意义（P均<0.05）。免疫印迹法检测结果显示：在相同作用时间内，随着PP242药物浓度的增加，Bcl?2蛋白的表达水平逐步下降，与对照组（0 nmol/L）比较，差异有统计学意义（P<0.05）。实时定量RT?PCR检测结果显示：在相同作用时间内，随着PP242药物浓度的增加，Bcl?2 mRNA表达水平亦逐步下降；mRNA相对表达量分别为0.723±0.039，0.517±0.028，0.353±0.052，0.167±0.046，与对照组（0 nmol/L）比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 PP242能够抑制体外培养的人晶状体上皮细胞的生长，呈浓度和时间依赖性。人晶状体上皮细胞中存在Bcl?2的表达，PP242可下调其表达。
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GRIM-19在H2O2诱导的晶状体上皮细胞氧化应激中的表达
目的 观察干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因19(GRIM-19)在不同浓度H2O2诱导的人晶状体上皮细胞(HLEC)氧化应激中的表达变化.方法 免疫荧光法检测GRIM-19在正常HLEC中的表达及定位;建立HLEC氧化损伤模型:分别用浓度为0、20、100、300、500和800μmol/L的H2O2处理HLEC 1 h后换液,继续孵育6、24 h;MTT法检测各浓度H2O2对HLEC的生长抑制作用;Western blot法检测6h组HLEC中GRIM-19表达的变化.结果 免疫荧光结果示:GRIM-19主要表达于HLEC细胞质中;MTT结果示:100～800μmol/L H2O2对HLEC有增殖抑制作用,且呈剂量依赖关系,与对照组相比差异有统计学意义(P均＜0.01),20 μmol/L组与空白对照组未见明显差异(P＞0.05);Western blot结果显示:GRIM-19在各浓度组中相对表达量分别为1.466±0.018,1.509±0.038,1.599±0.014,1.709±0.058,1.813±0.010,1.583±0.021,实验组均显著高于空白对照组(P＜0.05),正常对照组与空白对照组未见明显差异.结论 正常HLEC中存在GRIM-19表达.在一定浓度H2O2诱导的氧化应激中,GRIM-19的表达显著增加.
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SUMO蛋白在体外培养的人晶状体上皮细胞内的表达及对氧化应激的调控作用
目的：观察小泛素相关修饰物（SUMO）在体外正常培养的人晶状体上皮细胞系（SRA01/04）内的表达以及由高糖诱导的氧化应激条件下SUMO的变化，探讨其对氧化应激的调控作用。方法通过免疫细胞化学染色法，检测SUMO1，2/3，4蛋白在正常培养的SRA01/04内的表达及分布；通过RT?PCR法，观察不同浓度和时间高糖处理时SUMO 1~4 mRNA的表达变化。按浓度实验分组：葡萄糖浓度分别为5.5、12.5、25、50 mmol/L作用24 h。按时间实验分组：葡萄糖浓度50 mmol/L作用0、6、12、24 h。将GFP?SUMO2质粒转入细胞后通过CCK8检测法和AV/PI双染流式细胞仪检测高糖（50 mmol/L）处理后，转染与非转染组的细胞存活率和细胞凋亡率。结果免疫细胞化学染色结果，SUMO 1~4蛋白在SRA01/04细胞内主要分布于细胞核，SUMO 2/3同时少量分布于胞质；RT?PCR结果可见，与低糖组比较，高糖组随着糖浓度增加SUMO1~SUMO4 mRNA表达增加（P<0.05）；与50 mmol/L高糖处理0 h比较，随着处理时间增加SUMO1~SUMO4 mRNA表达增加（P<0.05）。与非转染组比较，转染GFP?SUMO2的SRA01/04经高糖处理后存活率增加，凋亡率降低（P<0.05）。结论 SUMO蛋白在SRA01/04内阳性表达，一定程度高糖诱导的氧化应激影响SUMO mRNA表达。
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白内障患者晶状体特异性表达基因LEP503的检测及分析
晶状体上皮细胞表达很多基因,但绝大多数基因不会限制在晶状体中.近年来研究表明,晶状体上皮细胞特异性基因表达可能在其生长、分化、细胞损伤修复这些特殊过程起了关键的作用.Wen等[1-3]从大鼠的晶状体上皮细胞中克隆出一种新的基因,将其命名为LEP503.LEP503在正常人晶状体上皮细胞中特异性表达,并通过实验分析LEP503基因可能与分化有关.为进一步研究LEP503在白内障患者中是否表达,是否有规律性及是否与增殖有关,对不同年龄的白内障患者的晶状体前囊膜LEP503基因表达情况进行了分析.
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miR-126对人晶状体上皮细胞凋亡的影响
目的 探讨miR-126表达水平对人晶状体上皮细胞系HLEB3凋亡的影响及作用机制.方法 使用H2O2构建HLEB3体外凋亡模型,qRT-PCR检测miR-126水平变化;使用脂质体2000分别将miR-126模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)以及二者相应的阴性对照转染到HLEB3中,分别上调、下调细胞中miR-126表达,转染48 h后qRT-PCR验证转染效率,流式细胞仪检测各组HLEB3凋亡水平;通过靶基因预测软件预测miR-126可能靶向调控KLF6基因的表达,检测各组HLEB3中KLF6 mRNA和蛋白表达水平.结果 HLEB3凋亡模型中 miR-126相对表达量明显高于正常 HLEB3,差异有统计学意义(P<0.01).模拟物组HLEB3凋亡率明显低于模拟物阴性对照组;抑制物组HLEB3凋亡率明显高于抑制物阴性对照组;差异均有统计学意义(均P<0.05).模拟物组HLEB3中KLF6 mRNA相对表达量明显低于模拟物阴性对照组,抑制物组KLF6 mRNA相对表达量明显高于抑制物阴性对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05);模拟物组HLEB3中KLF6蛋白相对表达量明显低于模拟物阴性对照组,抑制物组KLF6蛋白相对表达量明显高于抑制物阴性对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 miR-126在HLEB3凋亡模型中表达上调,miR-126可通过调控KLF6基因表达来影响HLEB3凋亡,在白内障发病机制中发挥作用.
关键词： miR-126 锌指蛋白Kruppel样因子6 人晶状体上皮细胞 凋亡 白内障
