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基因沉默技术研究丹参酮Ⅱ A抗雌激素受体阴性乳腺癌细胞增殖的GPER途径
目的:利用经典核雌激素受体(ER)阴性、膜G蛋白偶联雌激素受体(GPER)阳性乳腺癌SKBR3细胞探索丹参酮Ⅱ A(Tanshinone Ⅱ A)对肿瘤细胞增殖活性的影响及其GPER介导功能.方法:应用GPER SiRNA转染构建GPER基因沉默的SKBR3细胞,并用Western Blot方法检测基因沉默效果;利用MTT细胞增殖速率、PI细胞周期测定方法观察丹参酮Ⅱ A对SKBR3细胞增殖速率、细胞增殖指数的影响及GPER的介导作用.利用Western Blot方法检测丹参酮Ⅱ A对SKBR3细胞周期蛋白Cyclin D表达的影响及GPER的介导功能.结果:(1×10-5～1×10-8)mol/L丹参酮Ⅱ A能够显著降低SKBR3细胞增殖速率,(1×10-5～1×10-6)mol/L丹参酮Ⅱ A能够显著下调细胞增殖指数,且上述抑制作用可因GPER基因沉默而明显减弱.Western Blot测定结果表明, (1×10-5～1×10-6) mol/L丹参酮Ⅱ A可使SKBR3细胞Cyclin D蛋白表达显著降低,且该效应可被GPER基因沉默所拮抗.结论:丹参酮Ⅱ A具有抑制乳腺癌SKBR3细胞增殖的作用,该抑制作用是经GPER途径介导的.
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塞来昔布对高表达Her-2/neu的人乳腺癌SKBr3细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对人乳腺癌细胞SKBr3的抑制增殖及诱导凋亡作用.方法 4种不同浓度的塞来昔布处理乳腺癌细胞系SKBr3细胞24、48 h,MTT法测定24、48 h后SKBr3细胞的增殖活性,流式细胞仪(FCM)检测48 h后各浓度塞来昔布诱导细胞凋亡情况及对细胞周期的影响.结果 与对照组相比,塞来昔布以时间、剂量依赖性方式抑制SKBr3细胞增殖(P<0.05).作用48 h后,塞来昔布诱导SKBr3细胞凋亡并阻断了细胞周期进展,凋亡率随塞来昔布浓度的增加而增加(P<0.05),且随着药物浓度的增加,G0/G1期细胞比例逐渐增加、S期及G2/M期细胞比例逐渐下降(P﹤0.05).结论 塞来昔布抑制高表达Her-2/neu的SKBr3细胞的增殖,诱导其凋亡.
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Heregulin通过Her2激活SKBR3细胞内IKK／NF－κB信号通路
目的：初探Her2激动剂Heregulin（HRG）对人乳腺癌SKBR3细胞内IKK／NF－κB信号通路的激活机制。方法：Western blotting法检测 HRG对 SKBR3细胞中 PI3K／Akt／IKK信号通路的影响。以 TNF －α／RIP1／IKK这条经典信号通路为对照，引入各通路中关键蛋白（PI3K、RIP1及IKK）的抑制剂，对比各抑制剂对两条通路的影响。实时无标记细胞分析技术监测HRG对SKBR3细胞增殖的促进作用及IKK抑制剂TPCA1对HRG的拮抗作用。结果：HRG与TNF－α均能激活IKK引起 NF－κB入核，RIP1的抑制剂Necrostatin－1能阻断由TNF－α引起的IKK活化，但不能阻断由HRG引起的IKK活化，表明HRG并非通过传统的途径激活IKK。PI3K抑制剂LY294002能阻断由HRG引起的IKK激活，PI3K是Her2信号通路的关键蛋白之一，因此推测HRG是经由PI3K／Akt信号通路，完成对IKK／NF－κB通路的激活。细胞生长曲线反映，HRG能促进SKBR3细胞的增殖，TPCA1对HRG具有拮抗作用，对数期细胞经100nmol／L的TPCA1处理后，细胞增殖受到抑制，数量迅速下降。结论：HRG可以通过Her2／PI3K／Akt途径激活SKBR3细胞内IKK／NF－κB信号通路。
