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中国羊种布鲁氏菌omp2基因PstⅠ酶切多态性特征分析
目的 拟发现中国羊种布鲁氏菌omp2基因PstⅠ酶切多态性特征.方法 用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)对羊种标准菌株、疫苗株M5、国内分离的羊种布鲁氏菌野毒株及非典型株共46株进行分析.结果 omp2基因扩增产物经PatⅠ酶切后呈现两种酶切图谱,43/46有238 bp和44 bp 2个条带;仅羊1型标准株16M和两株青海非典型羊种1型菌有282 bp、238 bp和44 bp 3个条带.结论 omp2基因PstⅠ酶切可为区分部分野生动物中的羊种菌和家畜羊种菌,为揭示布鲁氏菌的遗传衍化关系提供线索.
关键词： 羊种布鲁氏菌 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性 多态性 -
一起羊种布鲁氏菌病暴发的流行病学和分子特征研究
目的 调查研究一起羊养殖场中发生的人畜共患羊种布鲁氏菌病(布病)暴发疫情的流行病学和分子特征.方法 血清学实验采用试管凝集试验检测布病抗体,采用纸片法检测菌株的药物敏感性,采用多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)和多位点序列分析(MLST)分析菌株的分子特征.结果 工作人员布鲁氏菌抗体阳性率为7/18,饲养羊的阳性率为5/8.2名工作人员血液分离培养出羊种布鲁氏菌(菌株编号:CQ-18和CQ-11),3只羊的血液分离培养出羊种布鲁氏菌(菌株编号:CQ-154、CQ-159和CQ-237).药敏实验结果:5株菌对环丙沙星、左氧氟沙星、强力霉素、头孢曲松、诺氟沙星、米诺霉素、莫西沙星、氧氟沙星、利福平和链霉素敏感,CQ-154和CQ-237菌株对复方新诺明敏感,CQ-159、CQ-18和CQ-11菌株对复方新诺明耐药,5株菌均对阿奇霉素和克拉霉素耐药.MLVA分析发现,CQ-154菌株在BRU16位点少了一个串联重复序列,菌株CQ-18在BRU04位点增加了一个串联重复序列,MLST分析5株菌株ST型为8型.结论 布鲁氏菌长期在动物体内存在,是人畜感染布病无法根治的一个关键问题.在我国首次发现对复方新诺明耐药的羊种布鲁氏菌菌株.
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2006-2016年四川省布鲁氏菌病流行特征分析
目的 掌握四川省人间布鲁氏菌病(布病)的发病现况、流行特征和感染情况,为制定防治对策提供科学依据.方法 对2006-2016年布病报卡确诊病例进行流行病学分析,对职业人群进行血清学监测,收集分析动物间资料.结果 四川省累计报告确诊病例207例,发病率呈上升趋势(x2=303.21,P＜0.001),除攀枝花市外各市(州)均有病例报告.2014-2016年病例数占累计报告数的86.96％(180/207),该时期发病率年平均增长率为148.73％;采集人血清15 011份,阳性率为1.55％.羊感染率呈升高趋势(x2=21.18,P＜0.001).结论 四川省布病防控形势严峻,疫情范围广泛,呈散发性.优势菌株为羊种布鲁氏菌.人间和动物间防控部门应密切配合,加强动物间监测净化,做好人间监测.
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我国羊种布鲁氏菌rpoB基因遗传多态性分析
目的 调查中国羊种布鲁氏菌rpoB基因的多态性.方法 利用AMOS-PCR对分离菌株进行种型鉴定;根据布鲁氏菌rpoB基因的4个多态性位点设计特异性引物,对299株羊种布鲁氏菌流行株(羊1型菌38株、羊2型菌19株、羊3型菌242株)的rpoB基因的4个多态性位点进行扩增,并将PCR产物测序结果与羊种布鲁氏菌标准菌株的扩增结果进行比对.结果 羊种布鲁氏菌的rpoB基因检测发现,有169株为rpoB-2变异型、103株为rpoB-2型、24株为新的rpoB基因型(rpoB-4型)及3株为rpoB-1型.结论 我国羊种布鲁氏菌rpoB基因具有较高的多态性,可作为羊种布鲁氏菌的分子流行病学调查靶基因,我国羊种菌rpoB基因型和生物型无相关性.
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2005-2016年全国布鲁氏菌病监测数据分析
我国从1980年开始开展布鲁氏菌病(布病)主动监测,2005年将布病纳入全国重点传染病监测工作,在全国19个省(自治区、直辖市)设定21个固定监测点开始人间布病监测.本文就中国疾病预防控制中心2005-2016年“年度布鲁氏菌病监测报告”进行汇总分析.2014年全国布病疫情报数为告历史多,人间新发布病57 222例,发病率为4.22/10万;布病疫情由2005年18个省份报告布病病例,至2013年增加到31个省份.布病病例职业分布涉及到所有分类.12年来21个监测点开展职业人群调查573 032人,血清学检查196 636人,检出阳性39 190例,平均阳性率为18.11％.监测点检菌164株,结合部分送检菌株,在全部276株菌中,羊种布鲁氏菌占74％,还有16％菌株待鉴定,说明引起我国布病疫情的优势菌株是羊种布鲁氏菌.
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内蒙古自治区乌兰察布市羊种布鲁氏菌HOOF基因分型特征
目的 调查2012-2015年内蒙古自治区乌兰察布市83株布鲁氏菌HOOF分型特征.方法 对临床分离的83株布鲁氏菌采用常规方法和AMOS-PCR进行鉴定;利用8个数目可变串联重复序列位点的HOOF分型方法对菌株进行基因分型,并用Hunter-Gaston分辨指数评估各VNTR位点的多态性和对菌株的综合辨别能力,采用BioNumerics 5.0软件聚类分析和构建聚类图.结果 83株试验菌全部为羊种布鲁氏菌,全部8个分型位点具有极高的多态性,多态性指数为0.998;其中6个位点(1、2、4～7)的多态性指数≥0.678,其分辨力主要来自多态性指数较高的位点.83株羊种布鲁氏菌聚为8大类76个基因型.6个共享基因型包括13株布鲁氏菌,提示感染患者具有流行病学相关性;另70株菌呈现独特的基因型,提示病原分离自无流行病学相关的散发患者.结论 乌兰察布市人布鲁氏菌病流行以散发和局部暴发共存,且散发为主,而交叉感染患者与传染源转移有关.
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南京市羊种布鲁氏菌分离鉴定及rpob基因分析
目的:分离鉴定及分子快速诊断方法确诊布鲁氏菌病,并对2011-2016年间南京地区分离到的布鲁氏菌rpob基因进行特征分析.方法:对疑似布鲁氏菌病患者全血进行分离培养,并通过生化鉴定、Real-time PCR对分离到的布鲁氏菌进行bcsp31基因特异性分析及IS-711插入序列分型.利用PCR方法对rpob基因进行扩增,产物测序并分析.结果:2011-2016年共收集到7株布鲁氏菌,经Real-time PCR方法检测,全部为羊种布鲁氏菌.通过测序分析发现7株羊种布鲁氏菌bpob基因仅出现1个碱基差异.结论:南京地区发现的布鲁氏菌病患者全部为羊种布鲁氏菌感染,羊种布鲁氏菌bpob基因高度同源,在种间水平上显示出良好的多态性.城市地区布鲁氏菌病的传播途径及危险因素更为复杂.
关键词： 羊种布鲁氏菌 分子检测 Real-time PCR rPOB基因 -
随州市羊种3型布鲁氏菌首发病例的病原学检测
目的 分离和鉴定布鲁氏菌,为病例的诊断、治疗及疫情的控制提供科学依据.方法 虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测病人血清中特异性抗体,用血清凝集试验、噬菌体试验、PCR试验法对菌株进行分型鉴定.结果 虎红平板凝集试验出现絮状抗原抗体结合物100％凝集为阳性；试管凝集试验结果为阳性1∶200(+++)；发病期血清IgM抗体阳性、IgG阴性；M5布鲁氏菌疫苗株和病人菌株提取的基因组进行扩增和电泳,均在223和731bp附近出现阳性条带,而711、976和285 bp处无条带,说明该病人分离出的菌株为布鲁氏菌属羊种布鲁氏菌；经CO2、硫化氢、染料抑菌、菌株表面抗原凝集、噬菌体裂解试验,鉴定该菌株为羊种3型.结论 随州市布病首发病例病原体为羊种3型布鲁氏菌,应加强布病监测,采用RBPT、SAT、ELISA、PCR等方法可快速检测病原体,为临床诊断、疫情控制提供依据.
