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生化汤治疗宫缩乏力性产后出血的临床疗效及对RhoA、ROCK蛋白的影响
目的:探讨生化汤治疗宫缩乏力性产后出血(PHH)的临床疗效及对患者应激指标及RhoA蛋白、Rho激酶Ⅰ(ROCKⅠ)和Rho激酶Ⅱ(ROCKⅡ)蛋白水平的影响.方法:选取2015年1月至2016年5月我院收治的PHH患者100例,随机分为实验组和对照组,各50例.对照组在胎儿娩出后注射卡贝缩宫素,实验组在对照组的基础上服用生化汤,观察比较2组止血时间、产后出血量,产后血红蛋白(Hb)水平、血压及应激指标变化、RhoA蛋白、ROCKⅠ和ROCKⅡ蛋白水平及不良反应情况.结果:治疗后实验组止血时间、产时、产后2 h、产后24 h出血量、Hb下降值、E、NE、R、AngⅡ水平均低于对照组(P<0.01);2组间及治疗前后SBP、DBP比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后2组RhoA、ROCKⅠ和ROCKⅡ蛋白水平均显著高于治疗前(P<0.05或P<0.01),但2组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论:生化汤联合卡贝缩宫素治疗PHH无明显不良反应且疗效显著,能缩短患者的止血时间,减少出血量,降低机体应激反应,增强患者子宫平滑肌的收缩作用.
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睾丸癌组织中RhoA和血管内皮生长因子受体3的表达及临床意义
目的 寻找与睾丸癌分期和预后相关的分子标志物,以更好地制定临床治疗方案.方法 收集1999年1月至2008年5月在中山大学肿瘤防治中心接受睾丸癌根治术治疗的精原细胞瘤(34例)和非精原细胞瘤(66例)石蜡标本,其中临床Ⅰ期64例、Ⅱ期22例、Ⅲ期14例.使用免疫组化方法检测肿瘤组织以及20例同期手术正常睾丸组织中RhoA和血管内皮生长因子受体3(vascular endothelial growth factor receptor-3,VEGFR3)的表达情况.统计学分析睾丸癌组织中RhoA及VEGFR3的表达与睾丸癌分期、病理和预后的关系. 结果 患者随访26 ～ 278个月,中位随访时间56个月.RhoA在睾丸癌组织中的高表达率为57％(57/100),高于正常组织的25％(5/20),RhoA表达与睾丸癌临床分期相关(P=0.010).VEGFR3在睾丸癌中的高表达率为51％(51/100),VEGFR3高表达与睾丸癌患者肿瘤复发相关(P=0.021).在Ⅰ期非精原细胞瘤中,RhoA高表达与肿瘤复发相关(P=0.035).在Ⅱ/Ⅲ期非精原细胞瘤中,VEGFR3高表达与肿瘤复发相关(P=0.022). 结论 睾丸癌组织中RhoA的表达水平与临床分期呈正相关,RhoA高表达的Ⅰ期非精原细胞瘤容易复发,VEGFR3高表达的Ⅱ/Ⅲ期非精原细胞瘤预后欠佳,需要采用更积极的治疗方案.
关键词： 睾丸肿瘤 肿瘤复发 局部 RhoA蛋白 血管内皮生长因子受体3 -
RhoA在胃癌细胞中的表达及其作用
目的探讨RhoA在胃癌细胞系中的表达及其作用.方法Western blot方法检测RhoA在多株人消化道肿瘤细胞系中的表达;构建RhoA反义核酸真核表达载体,脂质体法转染至高表达RhoA的人胃癌细胞系AGS,MTT比色法观察细胞生长,流式细胞仪检测细胞周期分布.结果10株肿瘤细胞系中RhoA蛋白表达均显著高于永生化正常人肠黏膜细胞系HIEC.转染RhoA反义核酸真核载体后,AGS细胞中RhoA蛋白表达降低,细胞生长受到抑制,细胞周期分析显示聚集在S期的细胞明显增多.结论RhoA蛋白在消化道肿瘤细胞系中表达明显增高,降低RhoA表达能部分逆转胃癌细胞的恶性表型.
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RhoA蛋白参与调节白介素8诱导的血管内皮细胞迁移
目的 研究RhoA蛋白在内皮细胞迁移过程中的作用.方法 采用脂质体包绕法将RhoA野生型(RhoAwt)、稳定表达持续活化型(RhoA63L)、主导抑制型(RhoA188A)突变质粒转染进入血管内皮细胞,获得稳定表达的EA.hy926-RhoAwt、EA.hy926-RhoA63L和EA.hy926-RhoA188A细胞.然后,利用Western blot检测细胞中活性RhoA蛋白含量.后,利用化学趋化因子IL-8(100 ng/ml)分别刺激这3组细胞和对照组细胞,观察细胞迁移情况,并分析细胞迁移与活性RhoA之间的关系.结果 1)各组细胞活性RhoA含量较对照组均有变化, EA.hy926-RhoAwt组稍稍升高,EA.hy926-RhoA63L组明显升高,而EA.hy926-RhoA188A组明显降低;2)在IL-8刺激下,EA.hy926-RhoAwt组细胞迁移能力稍高于对照组,EA.hy926-RhoA63L组细胞迁移能力远高于对照组,而EA.hy926-RhoA188A组细胞迁移能力则被明显抑制.因此,在IL-8刺激下,各组细胞迁移能力与细胞活性RhoA蛋白含量正相关.结论 RhoA蛋白是IL-8诱导内皮细胞迁移过程中的关键分子,这有助于我们进一步探讨IL-8诱导内皮细胞迁移的理论机制和临床应用.
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K-ras基因突变通过调节E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体形成和RhoA蛋白活性对结肠癌细胞株Caco-2转移的影响
目的 观察K-ras基因突变通过调节E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体形成和RhoA蛋白活性对结肠癌细胞株Caco-2转移的影响,探讨其促进结肠癌转移的相关机制.方法将培养的结肠癌细胞株Caco-2分别给予空白质粒phr-GFP转染(对照组)、K-ras基因突变型质粒phr-K-ras(Vail2)转染(转染组)、phr-K-ras(Val12)质粒转染+丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径特异性抑制剂PD98059处理(MAPK抑制组)和phr-K-ras(Val12)质粒转染+磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)途径特异性抑制剂LY294002处理(PI-3K抑制组),Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移率,细胞免疫荧光检测E-cadherin、β-catenin蛋白表达及其在细胞内定位,Western blot检测细胞内p120蛋白的表达,免疫沉淀检测与E-cadherin结合的β-catenin蛋白水平,Pull-down实验检测RhoA蛋白活性.结果 转染组Caco-2细胞的迁移率为(19.8±5.6)%,明显高于对照组的(14.0±4.2)%(P=0.001)和MAPK抑制组的(15.8±1.2)%(P=0.044),但与PI-3K抑制组的(17.5±2.8)%差异无统计学意义(P=0.095).细胞免疫荧光检测结果显示,转染组细胞膜上的E-cadherin和β-catenin蛋白表达减少.Western blot检测结果显示,转染组和PI-3K抑制组细胞内p120总蛋白表达减少.免疫沉淀检测结果显示,转染组和PI-3K抑制组细胞内与E-eadherin结合的β-catenin蛋白水平下降.Pull-down实验检测结果显示,转染组细胞内的RhoA蛋白活性增加.结论 K-ras基因突变可以促进结肠癌细胞株Caco-2的转移,其可能是通过MAPK途径减少E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体形成,增强RhoA蛋白活性来实现的.
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肝细胞癌RhoA SLP-2蛋白的表达及其临床意义
原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤,严重危害人类健康.虽然目前有多种治疗方法,但疗效十分有限.因此,探讨肝癌的发病机制、合理评估预后显得尤为重要.原发性肝癌中肝细胞性肝癌(HCC)占90%以上,近来有研究推测SLP-2蛋白参与了Rho信号转导通路促进肿瘤的侵袭和转移.本研究通过检测HCC中Ras同源物A(RhoA),SLP-2蛋白的表达及其与临床病理特征的关系,探讨其在HCC的发生发展和侵袭转移中的作用.
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RhoA蛋白在外阴鳞癌组织中的表达及临床意义
目的 检测RhoA蛋白在外阴鳞癌(VSCC)组织中的表达情况,探讨其与VSCC临床病理因素关系,以期为VSCC的早期诊断、临床治疗及判断预后提供理论依据.方法 选取有完整临床资料及随访资料的40例VSCC病例石蜡包埋组织标本作为实验组,外阴鳞状上皮内肿瘤2级(VINⅡ)10例、正常外阴皮肤10例石蜡包埋组织作为对照组.应用免疫组化S-P法分别检测VSCC和对照组组织中RhoA蛋白的表达水平.统计方法分析RhoA与VSCC临床病理因素的相关性.结果 RhoA在正常外阴皮肤组织中未见表达,在VINⅡ阳性率为10％.RhoA在VSCC组织中的阳性表达显著高于对照组(P＜ 0.01).RhoA蛋白在VSCC组织中的表达与组织学分级无统计学意义(P＞0.05).RhoA蛋白在VSCC组织中表达与临床分期和有无淋巴结转移有相关性(P＜0.01).结论 RhoA蛋白参与VSCC发生、发展过程,在VSCC的浸润、转移临床过程中起一定作用.
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RhoA蛋白在人非小细胞肺癌中的表达及临床意义
目的 检测人非小细胞肺癌组织及其对应的癌旁肺组织中RhoA蛋白的表达,研究RhoA蛋白与非小细胞肺癌的相关性.方法 采用免疫组化方法检测RhoA蛋白在36例肺鳞癌、42例肺腺癌和30例癌旁肺组织中的表达水平,比较其阳性率.分析RhoA蛋白的表达与不同病理分型、性别、年龄、分化、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期的关系.判定RhoA蛋白的表达与患者预后的关系.结果 RhoA蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达水平明显高于癌旁肺组织(P＜0.05),RhoA蛋白的表达与非小细胞肺癌TNM分期以及是否伴有淋巴结转移相关(P＜0.05),与年龄、性别、分化、肿瘤大小无关(P＞0.05).RhoA蛋白高表达组患者的无病生存期和总生存期均显著短于RhoA蛋白低表达组(P＜0.05).结论 RhoA蛋白对预测非小细胞肺癌进程及患者预后有重要意义.
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茶多酚对人结肠癌细胞株 Caco-2凋亡及RhoA 蛋白活性的影响
目的：探讨茶多酚对人结肠癌细胞株 Caco-2凋亡及 RhoA 蛋白活性的影响。方法将传代后的人结肠癌细胞株Caco-2细胞分为实验组和对照组，实验组加入不同浓度的茶多酚（25、50、100和200μmol /L），对照组加入等量 RPMI-1640培养液，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定茶多酚对 Caco-2增殖抑制的影响，流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡指数，Pull-down法检测人结肠癌细胞株 Caco-2细胞内的 RhoA 蛋白活性。结果不同浓度的茶多酚对人结肠癌细胞株 Caco-2有明显的抑制作用，且呈剂量及时间依赖性；Pull-down 法检测结果显示，茶多酚可以降低人结肠癌细胞株 Caco-2细胞内的 RhoA 蛋白活性，且随浓度增加其蛋白活性降低。结论茶多酚可促进人结肠癌细胞株 Caco-2的凋亡，其可能通过降低 RhoA 蛋白活性来实现。
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RhoA蛋白在人胃癌细胞株SGC-7901核内的分布
目的:研究RhoA蛋白在人胃癌细胞株SGC-7901细胞核内的分布.方法:采用免疫荧光,免疫组化以及Western Blotting检测不同方法提取的蛋白样品,观察RhoA蛋白在人胃癌细胞株SGC-7901核内的分布情况.结果:以上方法的结果均显示RhoA蛋白在SGC-7901的细胞核内有分布.结论:在人胃癌细胞株SGC-7901中,RhoA蛋白不仅分布在细胞质和细胞膜,在细胞核内也有分布.
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RhoA蛋白在凝血酶诱导的胎鼠大脑皮层神经元损伤中的作用
目的 探讨凝血酶诱导的胎鼠大脑皮层神经元损伤与RhoA蛋白活化表达的关系.方法 体外培养胎鼠大脑皮层神经元8d后,采用Western blot技术检测不同浓度凝血酶(0、1、10、30和100 U/ml)组作用3h后及30 U/ml凝血酶作用不同时间(0、0.5、1、3和6 h)组胎鼠大脑皮层神经元RhoA蛋白表达.结果 凝血酶30 U/ml组神经元细胞膜RhoA蛋白表达高于0 U/ml组(P＜0.05);5个凝血酶浓度组RhoA总蛋白表达量无统计学差异.凝血酶30 U/ml作用3h组细胞膜RhoA蛋白表达高于0h组(P＜0.05);5个时间组RhoA总蛋白表达量无统计学差异.结论 凝血酶诱导的胎鼠大脑皮层神经元损伤与一定浓度凝血酶和一定作用时间后RhoA蛋白的激活有关.
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辛伐他汀对转β分泌酶HEK293细胞RhoA/ROCK途径及Aβ42生成的影响
目的 观察辛伐他汀(Sim)通过RhoA/ROCK途径对转β分泌酶(BACE1)-HEK293细胞分泌β-淀粉样蛋白(Aβ)的影响.方法 体外培养BACE1-HEK293细胞,在保证培养环境胆固醇充足的条件下分为对照组、1 μmol/L Sim组、1μmol/L Sim+ 250 μmol/L甲羟戊酸(Mev)组、5μmol/L Sim组、5μmol/L Sim+250 μmol/L Mev组对细胞进行处理.MTT检测细胞存活率;ELISA检测Aβ42分泌量;Western blotting检测细胞膜RhoA及细胞浆磷酸化肌球蛋白磷酸酶肌球蛋白结合亚基(p-MYPT1)表达量.结果 MTT显示各组细胞存活率无差异(P＞ 0.05);1μmol/L Sim组和5μmol/L Sim组细胞分泌Aβ42较对照组减少(P＜0.05);两组细胞膜上RhoA及细胞浆p-MYPT1含量较对照组显著降低(P＜0.01),分别加入250 μmol/L Mev后能对抗Sim的作用(P＜0.01).结论 Sim可以通过降低胆固醇以外的途径减少RhoA蛋白的细胞膜定位和下游激酶ROCK的活化,抑制细胞Aβ42的分泌.
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RhoA蛋白参与凝血酶对胎鼠大脑皮层神经元的损伤
目的 探讨凝血酶诱导的胎鼠大脑皮层神经元损伤与RhoA蛋白活化表达的关系.方法 体外培养胎鼠大脑皮层神经元8d后,采用Western blotting检测不同浓度凝血酶(0、1、10、30和100 U/mL)作用3h后及30 U/mL凝血酶作用不同时间(0、0.5、1、3和6h)对皮层神经元RhoA蛋白活化表达的影响；RhoA蛋白活化抑制剂Exoenzyme C3预处理0.5 h及30 U/mL凝血酶作用皮层神经元3h后,行Western blotting检测RhoA蛋白活化表达的情况,并采用Hoechst33258核染色及CCK-8法观察Exoenzyme C3预处理和未处理时凝血酶对皮层神经元的损伤情况. 结果 在浓度实验中,30 U/mL凝血酶作用皮层神经元3h后能明显增加RhoA膜蛋白表达,与0U/mL组相比差异有统计学意义(P＜0.05)；而各浓度凝血酶对RhoA总蛋白表达无明显影响.在时程实验中,与其他时间点相比,30 U/mL凝血酶在3h时能明显增加RhoA膜蛋白表达,差异有统计学意义(P＜0.05),但对RhoA总蛋白表达也无明显影响.在Exoenzyme C3干预实验中,Exoenzyme C3预处理组与凝血酶组相比,RhoA膜蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05)；Hoechst3258核染色显示,与凝血酶组相比,Exoenzyme C3预处理组中核浓染细胞数量明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05)；CCK-8法检测细胞活性显示,凝血酶组细胞存活率明显低于Exoenzyme C3预处理组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 凝血酶诱导的胎鼠大脑皮层神经元损伤与RhoA膜蛋白的高表达即RhoA蛋白活化表达有关.
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MiR-133通过RHOA蛋白调节乳腺癌细胞系MCF-7的侵袭转移
目的:探讨miR-133通过调节RHOA蛋白的表达对乳腺癌低转移细胞系MCF-7侵袭转移能力的影响.方法:(1)将has-miR-133a inhibitor经脂质体包裹转入MCF-7细胞,以Negative control作为阴性对照,未做任何处理的细胞作为空白对照.(2)通过qRT-PCR检测转染has-miR-133a inhibitor后细胞中miR-133的表达情况.(3)Transwell试验检测miR-133对于细胞迁移能力的影响.(4)细胞免疫荧光观察miR-133对于细胞骨架形态的影响.(5)Western blot检测miR-133对于RHOA蛋白表达的影响.结果:(1)转染has-miR-133a inhibitor后细胞中miR-133的表达较对照组明显减低.(2)Transwell试验结果表明抑制miR-133后可以增加细胞的迁移能力.(3)细胞免疫荧光结果提示抑制miR-133后细胞骨架形态发生明显改变,细胞具有较强的侵袭转移特性.(4)Western blot结果提示抑制miR-133后RHOA的表达较两个对照组明显上调.结论:miR-133可以通过调控RHOA蛋白的表达来抑制乳腺癌细胞系MCF-7的侵袭转移.
