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大豆素与葛根素抑制LPS诱导RAW264.7细胞NO产生的活性比较
目的：比较分析大豆素与葛根素体外抗氧化及抑制NO、NOS活性机制。方法：用1滋g·mL-1 LPS诱导体外培养的RAW264.7细胞，制备呼吸爆发、自由基反应模型。采用MTT法检测大豆素及葛根素的细胞毒性；采用DCFH-DA探针及激光共聚焦显微镜观察被试药的抗氧化能力；采用Griess法检测细胞培养体系中NO水平；采用化学比色法测定细胞内T-NOS含量。结果：大豆素与葛根素均能显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞NO释放及T-NOS表达。结论：大豆素与葛根素的抗氧自由基活性接近，有望作为葛根素的替代品使用。
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麻黄-甘草药对对脂多糖诱导的RAW264.7细胞的体外抗炎作用分析
目的:观察麻黄-甘草药对对小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞的增殖以及对脂多糖(LPS)刺激条件下对细胞分泌一氧化氮(N0),肿瘤坏死因子(TNF)-α和经典活化(Mt)/替代活化(M2)炎症表型转化的影响.方法:利用噻唑蓝(MTT)比色法考察不同剂量的药对对RAW264.7细胞增殖的影响;药对干预脂多糖(LPS,1 mg·L-1)建立的细胞炎症模型,格里斯试剂法(Griess)法检测NO释放量,酶联免疫吸附法(ELISA)法检测上清中TNF-α的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测药对对LPS刺激条件下RAW264.7细胞M1型巨噬细胞常见标志物一氧化氮合酶(iNOS),白细胞介素-6(IL-6),IL-1β及M2型巨噬细胞常见标志物IL-10,精氨酸酶1(ARG1)及甘露糖受体1(MRC1)基因的表达.结果:麻黄-甘草药对的剂量在100 mg·L-1及以下时对RAW264.7细胞增殖没有影响;与LPS组比较,剂量在25～100 mg·L-1的药对可以显著降低NO的含量(P＜0.05,P＜0.01),10 ～100 mg·L-1剂量下对TNF-α表达的抑制显著(P ＜0.05,P＜0.01);50 mg·L-1的药对还可以显著降低M1型巨噬细胞标志基因iNOS,IL-6及IL-1β的表达(P ＜0.05,P＜0.01),而对M2型巨噬细胞标志基因IL-10,ARG1,MRC1没有影响.结论:麻黄-甘草药对能够抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症,其机制可能与抑制巨噬细胞向M1型方向的偏移,减少NO及TNF-α等炎症因子的分泌相关.
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消疹止痒喷剂治疗EGFRI相关性皮疹的细胞学机制研究
目的:探究消疹止痒喷剂对皮肤角质细胞增殖分化及巨噬细胞浸润的影响及其作用机制.方法:MTT法观察不同浓度消疹止痒喷剂对皮肤角质细胞HaCaT生长能力的影响;划痕实验(Wound healing)及Transwell实验考查消疹止痒喷剂对HaCaT及巨噬细胞RAW264.7运动能力的影响,采用western blotting实验考察消疹止痒喷剂对HaCaT细胞的PI3K、AKT、tPA、CD147及RAW264.7细胞中基质金属蛋白酶MMP-2(Matrix metalloproteinases-2,MMP-2)、MMP-9蛋白表达的影响,采用RT-PCR考察消疹止痒喷剂对RAW264.7细胞的MMP-2、MMP-9 mRNA水平的影响.结果:消疹止痒喷剂可以剂量依赖性地促进HaCaT细胞的增殖,抑制其分化;Wound healing实验和Transwell小室迁移实验中,随着消疹止瘁喷剂浓度提高,HaCaT及巨噬细胞RAW264.7迁移数目呈递减趋势;随着消疹止瘁喷剂浓度的提高,HaCaT及巨噬细胞RAW264.7侵袭能力呈递减趋势;消疹止瘁喷剂可以剂量依赖性抑制HaCaT细胞PI3K和AKT增殖蛋白表达,同时降低分化蛋白tPA和CD147的表达;此外消疹止痒喷剂可以显著抑制RAW264.7 MMP2和MMP9的mRNA和蛋白水平表达.结论:消疹止痒喷剂促进皮肤角质细胞增殖并抑制巨噬细胞浸润是其治疗EGFRI相关性皮疹的重要机制之一.
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桂皮醛通过下调mPGES-1和COX-2抑制IL-1β诱导的RAW264.7细胞PGE2分泌
目的:在明确桂皮醛通过下调COX-2抑制PGE2生成的基础上,进一步探讨其抑制PGE2生成的机制.方法:采用IL-1β刺激的方法,构建炎症模型,并用ELISA法检测PGE2的分泌量,用Real-time PCR法检测mPGES-1和COX-2 mRNA的表达,用Western blotting法检测mPGES-1蛋白,以观测桂皮醛对上述指标的影响.结果:桂皮醛能显著抑制PCE2的分泌,同时,也能显著下调mPCES-1和COX-2 mRNA的表达,及mPGES-1蛋白的表达.结论:桂皮醛对RAW264.7细胞PGE2生成的影响,除通过对COX-2的抑制作用外,也要归因于其对mPGES-1的抑制作用.
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柚皮苷对破骨细胞分化的影响
目的:探讨骨碎补单体成分柚皮苷对小鼠单核细胞RAW264.7诱导分化为破骨细胞的影响.方法:通过100μg·L-1核因子κB受体活化因子配基(RANKL)诱导RAW264.7细胞株分化为成熟破骨细胞,经TRAP特异性染色和骨吸收陷窝对破骨细胞进行鉴定.采用MTT法筛选抑制破骨细胞强的浓度.在诱导过程中,采用筛选后含柚皮苷的培养基,诱导5d后,通过TRAP阳性细胞计数和骨吸收面积分析来观察柚皮苷对破骨细胞的形成和骨吸收功能情况;流式细胞术检测柚皮苷对破骨细胞增殖的影响,RT-PCR检测柚皮苷对破骨细胞分化过程中核因子κB受体活化因子(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、活化T细胞核因子1(NFATc1)与C-fos mRNA表达的影响.结果:采用100 μg· L-1的RANKL可成功诱导成熟的、有功能的破骨细胞.柚皮苷可以抑制破骨细胞的分化和骨吸收功能;抑制破骨细胞的增殖活性;柚皮苷可明显下调破骨细胞分化过程中的RANK,TRAP,MMP-9,NFATc1 mRNA的表达,上调C-fos mRNA表达.结论:柚皮苷可抑制破骨细胞分化、增殖和骨吸收功能,其机制可能是通过抑制破骨细胞分化过程中特异性基因表达实现的.
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参莲提取物对PM2.5染毒RAW264.7细胞损伤的保护作用
观察中药参莲(SL)提取物对PM2.5染毒RAW264.7细胞损伤的保护作用.建立PM2.5染毒致RAW264.7细胞损伤模型.以细胞生长、细胞损伤标记物、氧化应激相关因子及炎性细胞因子为观察指标,评价SL提取物对PM2.5染毒RAW264.7细胞损伤的保护作用.结果表明,PM2.550 mg·L-1作用4,24 h时可致细胞颗粒沉积,抑制细胞生长,可显著增加细胞上清中LDH,NO释放量及细胞内活性氧(ROS)水平.在SL提取物50,25,10 mg·L-1干预作用下,RAW264.7细胞颗粒沉积减轻,细胞上清中LDH,NO,IL-1β,MCP-1释放量显著下降,SOD活性显著有所增加.表明SL提取物对PM2.5染毒RAW264.7细胞损伤有明显保护作用,其作用可能与对细胞的直接保护作用、减少氧化应激及炎症损伤有关.
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RAW264.7细胞中姜黄素抗动脉粥样硬化作用机制的蛋白质组学研究
目的:应用凝胶内差异显示电泳技术和质谱技术研究姜黄素抗动脉粥样硬化的作用机制.方法:RAW264.7细胞和经过25 μmol.L-1姜黄素处理的RAW264.7细胞蛋白质经荧光染料Cy3,Cy5标记,与等量Cy2标记的内标混合后在同一胶中进行电泳分离,经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱.经DeCyder6.5软件进行差异蛋白质组分析,并对差异蛋白质进行质谱鉴定.结果:ATP合成酶,MHC class Ⅱ,肌球蛋白轻链,细胞色素b5表达量增加,而磷酸二酯酶4D,eIF-3,Hnrpf蛋白,波形蛋白,核仁磷蛋白1,Ran结合蛋白1表达量降低.结论:姜黄素抗动脉粥样硬化作用的机制十分复杂,是其增强细胞抗炎、抗氧化能力以及抑制胆固醇转运,降低细胞内胆固醇积累等因素共同作用的结果.另外,姜黄素可能通过调节细胞的分化及凋亡起到抗肿瘤的作用.
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基于网络药理学分析丹参山楂组分配伍抗动脉粥样硬化的作用机制研究
该文基于网络药理学预测及体外细胞验证的方法,对丹参山楂有效组分配伍(SC121)抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制进行了探讨.根据SC121所含成分的结构类型及药效活性报道,选取丹酚酸B、丹参酮ⅡA、丹参素、表儿茶素及原花青素B2作为SC121的主要活性成分,用于网络药理学分析.运用TCMSP数据库,筛选上述5个主要成分作用于心血管疾病的网络靶点;结合KEGG和Uniprot数据库,进行信号通路和生物途径分析,预测其作用机制.在网络药理学预测的基础上,建立体外细胞模型,观察SC121对ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和巨噬细胞RAW264.7损伤及泡沫化的保护作用.网络分析结果显示,SC121可通过作用同一靶点或不同靶点发挥抗AS作用,其作用机制与调节PPAR,renin-angiotensin system等多通路,参与炎症反应、内皮细胞保护及脂质生物合成和代谢等多生物途径有关.细胞实验结果表明,SC121可减轻ox-LDL对HUVEC和RAW264.7的损伤程度,降低RAW264.7细胞内活性氧水平,减少泡沫细胞面积,并呈一定的量效关系.即在体外细胞模型上,5C121可抑制内皮细胞损伤、抗氧化等,验证了网络药理学的预测结果,综合阐释了5C121抗AS的作用机制.
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Wnt/β-catenin信号途径抑制Raw264.7分化
目的 了解Wnt/β-catenin信号途径对小鼠单核/巨噬细胞Raw264.7的分化调控.方法 将细胞分为4组:阴性对照组(即空Raw264.7组)、实验对照组(即感染Ad-GFP组)、阳性对照组(即50 ng/mL RANKL诱导组)和实验组(即感染Ad-β-catenin组).分别给予上述4组处理因素后常规细胞培养3、6和9d提取细胞总RNA,荧光定量real-time (RT-PCR)检测核因子受体(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、组织蛋白酶K(Cathepsin K)及金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA的表达,再于同样处理因素培养6d通过酒石酸抗酸性磷酸酶(TRAP)染色观察Raw264.7的分化情况;Western blot检测TRAP、Cathepsin K蛋白的表达.结果 RT-PCR检测Ad-β-catenin组能下调RANK、TRAP、Cathepsin K和MMP-9 mRNA的表达;TRAP染色显示50 ng/mL RANKL诱导组能成功诱导Raw264.7成多核细胞,空白组和Ad-GFP组有个别多核细胞,Ad-β-catenin组为单核细胞;Western blot检测显示Ad-β-catenin组TRAP、Cathepsin K蛋白表达降低(P＜0.05).结论 Wnt/β-catenin信号途径能抑制RAW264.7分化成熟为破骨细胞.
关键词： Wnt/β-catenin RAW264.7 RANKL TRAP -
小鼠单核巨噬细胞Ufm1基因shRNA慢病毒载体构建及鉴定
目的 构建小鼠Ufm1基因RNA干扰慢病毒载体,并实现该基因在小鼠单核巨噬细胞系(RAW264.7)中的稳定表达抑制.方法 根据小鼠Ufm1基因设计两条RNA干扰序列,合成靶序列双链DNA,与pFU-GW-RNAi载体连接,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.pFU-GW-RNAi载体、pHelper 1.0载体及pHelper 2.0载体共转染293T细胞包装产生慢病毒颗粒,并测定其滴度,随后感染RAW264.7细胞,建立稳定转染细胞株.将RAW264.7细胞分为空白组、阴性对照组及RNA干扰慢病毒感染组,用Real-time PCR检测Ufm1基因mRNA的表达量.结果 PCR扩增检测阳性菌落和测序证实,shRNA片段完全正确插入慢病毒载体pFU-GW-RNAi中.在荧光显微镜下观察可见,293T细胞呈绿色荧光,并测得病毒滴度为9×105 TU/μl.重组慢病毒感染RAW264.7后,用Real-time PCR检测到Ufm1基因mRNA的表达受到抑制.结论 成功构建了小鼠RNA干扰慢病毒载体,并能够在RAW264.7细胞中有效沉默靶基因.
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不同浓度超顺磁性氧化铁纳米粒子对小鼠RAW264.7巨噬细胞的影响
目的 评价不同浓度超顺磁性氧化铁纳米粒子(superparamagnetic iron oxides,SPIO)对小鼠RAW264.7巨噬细胞的细胞活性及吞噬功能的影响.方法 常规方法培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,应用不同浓度SPIO(0 μg/ml、14μg/ml、28μg/ml、56μg/ml、84μg/ml、140μg/ml、280μg/ml、560μg/ml、840μg/ml)标记小鼠RAW264.7巨噬细胞,采用普鲁士蓝染色检测细胞标记率,台盼蓝染色检测细胞活性,四唑盐(MTT)比色实验检测细胞增殖能力,中性红吞噬实验检测细胞吞噬功能.结果 SPIO含铁浓度84 μg/ml标记24小时,细胞标记率可以达到100%;以后随SPIO浓度的增加,细胞内吞噬的铁颗粒增加,当SPIO含铁浓度为280 μg/ml时,细胞内吞噬铁颗粒达到饱和;当SPIO含铁浓度大于280 μg/ml时,细胞活性下降,吞噬能力降低;当SPIO含铁浓度大于140 μg/ml时,细胞增殖能力下降.结论 SPIO含铁浓度为(84～140)μg/ml标记24h,细胞的标记率为100%并且不影响细胞活性、细胞增殖能力及吞噬能力.
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铁超载对小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响
目的 探讨铁超载对小鼠单核细胞RAW264.7向成熟破骨细胞分化的影响.方法 实验分为正常对照组、低铁对照组、高铁干预组3组,用含有核因子KB受体活化因子配体(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的培养基诱导RAW264.7向破骨细胞分化,在此过程中加人去铁胺(DFO)和不同浓度的拘橼酸铁铵(FAC).对培养第4天和第7天的细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,对TRAP阳性细胞进行计数,用酶联免疫吸附法(ELISA )检测培养基中TRAP-5b的含量.结果 (1)高铁干预组的TRAP阳性细胞数高于正常对照组和低铁对照组(P<0.05),具有时间和浓度依赖性;(2)高铁干预组的TRAP-5b的含量高于正常对照组(P<0.05),具有浓度依赖性.结论 铁超载能促进RAW264.7向破骨细胞分化.
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JAK2/STAT3信号通路对RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响
目的 探讨JAK2/SATA3信号通路对核因子kB受体活化因子配体(Receptor activator of NF-κB Ligand,RANKL)诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化过程的影响.方法 用ATP竞争性JAK2激酶抑制剂AG490与RANKL同时处理RAW264.7细胞,倒置显微镜观察细胞形态的变化,抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant Acid Phosphatase,TRAP)染色法观察TRAP阳性破骨细胞形态并计数,采用反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测不同诱导条件下RAW264.7中破骨细胞标志分子TRAP、RANK(Receptor activator of NF-κB)、巨噬细胞标志分子CD11b和Emr1及转录因子活化T细胞核因子(Nuclear Factor of Activated T cells c1,NFATc1)的mRNA表达情况,细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit,CCK8)法检测AG490对RAW264.7细胞增殖的影响,同时应用Western blot法检测STAT3磷酸化情况.结果 ATP竞争性JAK2激酶抑制剂AG490可显著抑制RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞的分化,其作用机制主要是通过下调Ser727-STAT3磷酸化水平抑制RANKL诱导的RAW264.7细胞增殖、进而导致NFATc1转录因子表达水平下降有关.结论 JAK2/STAT3是破骨细胞前体细胞分化成熟过程中的关键信号通路,以此为靶向的特异性抑制剂AG490对于治疗以破骨细胞过度活化为主要特性的疾病具有潜在的应用前景.
关键词： 破骨细胞 AG490 RANKL RAW264.7 JAK2/STAT3 -
RANKL诱导小鼠单核细胞RAW264.7分化成成熟破骨细胞
目的观察小鼠的单核/巨噬细胞RAW264.7的一般生物学特征及在RANKL诱导下形成成熟破骨细胞的特征.方法 RANKL诱导RAW264.7细胞6d后,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法观察TRAP阳性多核细胞,吖啶橙染色激光共聚焦显微镜(LCSM)观察多核细胞形态;诱导RAW264.7细胞9d后,RT-PCR检测RAW264.7细胞的破骨细胞表型和功能基因表达及其RANKL诱导后变化;诱导RAW264.7细胞12d后,钙磷覆盖的破骨细胞活性分析板观察破骨细胞的骨吸收功能.结果 RAW264.7细胞TRAP染色阴性,单核或2个核,能表达破骨细胞表型和功能基因,无骨吸收功能.RANKL可诱导RAW264.7细胞形成TRAP阳性成熟的多核破骨细胞,上调CathepsinK、CAⅡ、integrinβ3等基因mRNA的表达.结论 RAW264.7具有破骨细胞特征性基因表达谱,是一种较好的破骨前体细胞模型.RANKL可诱导RAW264.7细胞形成成熟破骨细胞.
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小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)的培养及其在诱导破骨细胞中的应用
小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)是通过Abelson鼠白血病病毒诱导BALB/c小鼠产生肿瘤后得到的细胞株.RAW264.7细胞在医学研究中应用十分普遍:它是许多白血病相关研究模型的常用细胞株;在微生物学、免疫学等研究中也十分常用;同时也是小鼠源性破骨前体细胞,可通过特定细胞因子的诱导在体外获得成熟破骨细胞,因此也成为许多骨骼疾病研究的体外模型.但RAW264.7细胞形态和分化状态多变,在实际培养中较难把握,给科研工作带来了一定困难.科研工作者在RAW264.7细胞的培养方法、细胞的形态及分化状态等方面始终观点不一,对于用RAW264.7细胞在体外诱导获得破骨细胞的方法也有许多差别.本文结合文献资料及实践,探索了RAW264.7细胞的培养条件,冻存、复苏、传代方法,以及用核因子κB受体活化因子配基(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)诱导其成为成熟破骨细胞的技术关键;旨在总结RAW264.7细胞的培养及诱导其分化为破骨细胞的经验教训,探讨RAW264.7细胞的培养和在体外用RANKL诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞的方法、技巧,供广大科研工作者借鉴.
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髓样分化因子88抑制剂ST2825对RAW264.7细胞生物学活性的影响
目的 探讨Toll样受体信号转导分子髓样分化因子88(MyD88)抑制剂ST2825对巨噬细胞系RAW264.7细胞生物学活性的影响,为新型免疫抑制剂的研发提供新的思路.方法 培养RAW264.7细胞并分为4组:空白对照组细胞不给予任何处理和刺激;脂多糖对照组细胞给予脂多糖(500 ng/mL)刺激;ST2825低浓度组和高浓度组细胞分别给予浓度为10 μmol/L和20 μmol/L 的ST2825预处理1 h后再给予脂多糖刺激.36 h后收集细胞,流式细胞术检测细胞表面共刺激分子CD80和CD86的表达;提取细胞RNA,实时荧光定量PCR检测IL-1、IL-6、TNF-α mRNA水平.异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-Dextran)法测定细胞吞噬功能.结果 脂多糖对照组RAW264.7细胞共刺激分子CD80和CD86表达率分别为(54.2±1.6)%和(56.8±2.9)%,与空白对照组相比均明显升高(均P<0.05);ST2825低浓度组和高浓度组CD80表达率分别为(37.4±1.7)%和(26.4±1.2)%,CD86表达率分别为(43.4±2.0)%和(31.5±1.1)%,与脂多糖对照组相比均降低(均P<0.05).经脂多糖刺激后,脂多糖对照组RAW264.7细胞IL-1、IL-6和TNF-α mRNA表达水平升高,ST2825可降低上述促炎性细胞因子的mRNA表达水平.ST2825低浓度组和高浓度组细胞吞噬FITC-Dextran的能力与正常RAW264.7细胞无差异.结论 MyD88抑制剂ST2825可抑制脂多糖对天然免疫细胞的免疫活化效应,而不影响细胞的吞噬功能,为ST2825作为免疫抑制剂用于临床奠定了实验基础.
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大肠杆菌菌蜕作为核酸疫苗载体的实验方法研究
目的 制备大肠杆菌DH5α菌蜕,并用其装载核酸片段以及质粒DNA,体外转染抗原递呈细胞,探讨其作为DNA疫苗载体的可能性.方法 将构建有φX174噬菌体裂解蛋白的温控型表达质粒pHH43转化入大肠杆菌DH5α中,诱导细菌裂解制备大肠杆菌DH5α菌蜕,利用制备的DH5α菌蜕装载核酸片段,并摸索出较好的装载方法用于质粒DNA的装载,然后转染巨噬细胞RAW264.7,观察转染效果.结果 成功制备了大肠杆菌DH5α菌蜕,细菌的裂解效率可达97.8%,对核酸片段和质粒DNA的装载效率分别达94.89%和91.98%,装载红色荧光蛋白质粒pDSred-N1的DH5α菌蜕转染巨噬细胞RAW264.7,红色荧光蛋白的表达效率可达50%.结论 大肠杆菌DH5α菌蜕可以用于装载核酸疫苗并将其靶向性地导入到抗原递呈细胞中,可获得较高的表达效率,初步验证了大肠杆菌DH5α菌蜕作为核酸疫苗载体的可行性.
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4-氨基水杨酸对LPS诱导的RAW264.7细胞NO生成的影响
目的：观察4-氨基水杨酸(4-ASA)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞一氧化氮(NO)的生成及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)基因和蛋白表达的作用。方法采用LPS诱导RAW264.7细胞建立细胞炎症反应模型，加入不同浓度的4-ASA，采用一步法测定细胞上清中NO释放量；采用实时定量PCR法测定iNOSmRNA的表达；采用Western blot法测定目的蛋白iNOS的表达。结果100μg/mL和1000μg/mL4-ASA能明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的分泌及iNOS基因和蛋白的表达（P＜0.05）。结论4-ASA可明显降低LPS 诱导的RAW264.7细胞NO的产生以及iNOS基因和蛋白的表达，从而发挥抗炎作用。
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CdTe@MPA量子点对小鼠腹腔巨噬细胞活性的影响
目的 研究CdTe@MPA量子点[以巯基丙酸(MPA)为壳修饰、以碲化镉(CdTe)为核的核-壳型量子点]染毒对小鼠腹腔巨噬细胞(RAW264.7)活性的影响.方法 将RAW264.7细胞暴露于终浓度为0(对照)、5、10、20、40、80、160、240、320 μg/ml的CdTe@MPA量子点(粒径分别为2.2、3.5 nm)溶液培养12、24、48 h.采用MTT比色法测定RAW264.7细胞的活性,并计算半数致死剂量(IC50).结果 在相同粒径、相同染毒时间下,与对照组比较,各剂量CdTe@MPA量子点染毒组RAW264.7细胞的增殖抑制率均较高,差异有统计学意义(P＜0.05).CdTe@MPA量子点对RAW264.7细胞染毒12h后,当染毒剂量为5～40、160 μg/ml时,3.5 nm粒径组细胞增殖抑制率高于2.2nm粒径组,当染毒剂量为240～320 μg/ml时,3.5 nm粒径组细胞增殖抑制率低于2.2 nm粒径组;染毒24 h后,当染毒剂量为5～40 μg/ml时,3.5 nm粒径组细胞增殖抑制率高于2.2 nm粒径组,当染毒剂量为80～320 μg/ml时,3.5 nm粒径组细胞增殖抑制率低于2.2 nm粒径组;染毒48 h后,当染毒剂量为5 ～ 160μg/ml时,3.5 nm粒径组细胞增殖抑制率低于2.2 nm粒径组.粒径为2.2、3.5 nm的CdTe@MPA量子点对RAW264.7细胞的IC50值分别为69.635、65.434 ug/ml.CdTe@MPA量子点的剂量、时间及其粒径对细胞增殖抑制率的影响强度从大到小依次为剂量＞时间＞粒径.结论 CdTe@MPA量子点可抑制RAW264.7细胞的活性,且与染毒剂量、时间、粒径有关.
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逍遥丸含药血清影响巨噬细胞RAW264.7的功能
目的:采用中药血清药理学的方法,制备逍遥丸含药血清(XCS),体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,观察XCS对巨噬细胞功能的影响.方法:Wistar大鼠30只,以2.7g·kg-1·d-1剂量灌胃逍遥丸,连续3周,第22日取动物血离心,制备XCS;体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,将细胞分为空白组、空白血清组、XCS不同浓度组,取细胞培养上清测NO及TNF-α分泌量.结果:LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7 NO、TNF-α分泌量增加,与空白血清组相比有显著差异(p＜0.05).结论:XCS对NO和TNF-α有明显促进作用.
