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p38MAPK在糖尿病心肌病中的作用研究进展
p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase，p38MAPK）是丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号系统的重要分支，是主要分布于细胞浆的一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，它在糖尿病心肌病（diabetic cardiomyopathy，DCM）发病中起重要作用，可被多种因素激活，在微血管病变、心肌间质纤维化、心肌肥厚、心肌凋亡中扮演着重要角色。深入研究p38MAPK在DCM中的分子机制，有助于阐明DCM发病机制，为防治DCM提供新靶点。
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p38MAPK信号传导通路在冠心病中的作用
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPKs)酶属于酪氨酸激酶系统,是细胞内的主要信息传递系统,是信号从细胞外转到细胞内的传递者,它可以诱导某些应激性蛋白的快速表达,如热休克蛋白、超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶、ATP敏感性钾通道、抗氧化因子等,从而介导细胞能产生各种反应.
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p38MAPK介导的Fas/FasL凋亡通路在缺血性脑损伤中的作用研究
目的：探讨p38MAPK介导的Fas/FasL凋亡通路在大鼠缺血性脑损伤中的作用。方法①制作大鼠全脑缺血模型，免疫印迹法检测假手术组、脑缺血复灌6 h、12 h、1 d、3 d组p-p38MAPK、p38MAPK蛋白表达。②免疫印迹法检测假手术组、缺血复灌组、溶剂对照组和SB203580组p-p38MAPK、p38MAPK、FasL、Fas和Caspase-3蛋白表达。结果①与假手术组相比，脑缺血再灌注6 h、12 h、1 d、3 d组p-p38MAPK蛋白表达水平逐渐升高，于1 d达高峰（P均＜0.05）。②与缺血复灌组和溶剂对照组相比，SB203580组p-p38MAPK、FasL和Caspase-3表达水平显著降低（P均＜0.05）。结论 p38MAPK介导的Fas/FasL凋亡通路在缺血性脑损伤中发挥了重要作用。
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异基因CD8+T淋巴细胞诱导血管内皮细胞凋亡的分子机制
目的 研究异基因CD8+T淋巴细胞诱导血管内皮细胞凋亡的分子机制.方法 磁珠分选正常人外周血CD8+T淋巴细胞,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(FITC)试剂盒检测异基因CD8+T淋巴细胞作用后人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人皮肤微血管内皮细胞(HDMEC)凋亡率,RT-PCR检测蛋白酶激活受体1(PAR-1)mRNA表达,Western印迹检测内皮细胞PAR-1、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和半胱氨酸蛋白水解酶(Caspage)-3表达.结果 HUVEC与HDMEC在基因和蛋白水平均有PAR-1表达.异基因CD8+T淋巴细胞作用24 h和48 h,HUVEC凋亡率分别为51.7%±4.1%和29.4%±3.3%,HDMEC凋亡率分别为28.9%±2.2%和15.2%±1.8%,均显著高于对照组(均P<0.01);SFLLRN(PAR-1激动剂)诱导两种内皮细胞凋亡的作用与异基因CD8+T淋巴细胞的差异无统计学意义(P>0.05).异基因CD8+T淋巴细胞作用后,HUVEC与HDMEC磷酸化p38MAPK表达均高于对照组(均P<0.05),30 min时分别为对照组的9.8、6.3倍,Caspase-3裂解增加,峰值分别为对照组的5.1、4.3倍;SFLLRN作用后,HUVEC与HDMEC磷酸化p38MAPK表达亦均高于对照组(均P<0.05),30 min时分别为对照组的9.8、6.3倍,Cagpase-3裂解增加,峰值分别为对照组的5.7、2.9倍.JNK磷酸化无明显变化.PAR-1抗体和p38MAPK抑制剂(SB203580)可显著降低异基因CD8+T淋巴细胞诱导的内皮细胞凋亡(P<0.01).结论 异基因CD8+T淋巴细胞通过PAR-1途径引起细胞内p38MAPK激活、Cagpage-3裂解,从而诱导血管内皮细胞凋亡.
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糖尿病肾病患者血清TGFβ/Smad蛋白、p38MAPK蛋白及尿 α1-MG水平变化及意义
目的 探讨糖尿病肾病患者体内血清TGFβ-Smad蛋白、p38MAPK水平及尿 α1-MG水平变化规律,为临床诊断提供参考.方法 选取2015年1月-2017年12月我院肾内科及内分泌科收治的86例Ⅲ期糖尿病肾病患者及86例糖尿病患者临床资料进行研究,比较两组受试者血清TGFβ/Smad蛋白、p38MAPK磷酸化水平及尿 α1-MG蛋白水平差异.结果 与糖尿病患者相比,糖尿病肾病患者血清中TGFβ、Smad1、Smad2、Smad3蛋白水平均显著升高(P<0.05),p38MAPK磷酸化水平上调(P<0.05),尿 α1-MG蛋白水平显著升高(P<0.05).结论 糖尿病肾病患者TGFβ/Smad信号通路和p38MAPK信号通路激活,可能是造成肾脏炎症的主要原因之一,尿 α1-MG蛋白水平升高是肾小球功能受损的直接表现,上述指标可作为糖尿病患者严重微血管病变的监测指标.
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葡多酚对乳腺癌细胞P38MAPK信号传导通路的影响
目的:探讨葡多酚(grape proanthocyanidins,GPC)对P38MAPK(P38 mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)信号转导通路的影响.方法:将接种EMT-6乳腺癌细胞的BALB/C小鼠分别经口灌胃给予10、100、200 mg/kg bw GPC,连续2w.用Western blot方法检测肿瘤组织磷酸化P38MAPK蛋白和MMP-2蛋白的表达水平.结果:肿瘤对照组和200 mg/kg GPC组的磷酸化P38MAPK蛋白表达水平(相对灰度值)分别为1.16±0.18和0.58±0.12,MMP-2蛋白表达水平分别为0.98±0.04和0.69±0.04,差别均有显著性意义(P＜0.05).结论:GPC对乳腺癌P38MAPK信号转导通路的活化和MMP-2蛋白的表达均有一定抑制作用.
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Caspase-3和p38 MAPK在MMT诱导的PC-3M细胞凋亡中的作用
目的 确定Caspase-3和p38 MAPK在大气污染物甲基环戊二烯羰基锰(MMT)诱导人前列腺细胞系PC-3M凋亡过程中的作用.方法 1 mmol/L MMT诱导PC-3M细胞后,化学发光法检测细胞Caspase-3活力的变化,MTS法检测Caspase-3特异性多肽抑制剂Z-DEVD-FMK对细胞存活率的影响,Western blot法检测p38 MAPK在细胞凋亡过程中的活性变化,MTS及化学发光法检测p38 MAPK抑制剂SB203580对细胞凋亡率和Caspase-3活力的影响.结果 在MMT诱导的PC-3M细胞凋亡中,Caspase-3被明显激活差异有统计学意义(P＜0.01);Z-DEVD-FMK可明显提高PC-3M细胞存活率差异有统计学意义(P＜0.01);p38 MAPK磷酸化程度明显升高;SB203580可抑制细胞凋亡差异有统计学意义(P＜0.01),同时使Caspase-3活力下降差异有统计学意义(P＜0.01).结论 Caspase-3及p38 MAPK参与了MMT诱导的PC-3M细胞凋亡.
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缺血后处理对肺缺血/再灌注损伤的保护作用及其机制
目的:探讨缺血后处理(IpO)是否通过抑制P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)活化来减轻再灌注损伤肺细胞的凋亡.方法:雄性SD大鼠40只,随机分成5组(n=8),即对照组(C组)、肺缺血/再灌注组(I/R组)、肺缺血/再灌注+缺血后处理组(IPO组)、缺血后处理+溶剂对照组(D组)、缺血后处理+SB203580组(SB组).各组分别于再灌注2h留取左肺组织,检测肺组织湿/干重比(W/D)和总肺含水量(TLW);光镜观察肺组织形态学结构改变并进行肺组织损伤定量评估(IQA);原位末端标记法(TUNEL)检测肺细胞凋亡情况并计算凋亡指数(AJ);RT-PCR和免疫组化法测定Bax、Bcl-2基因和蛋白的表达.结果:与C组相比,I/R组W/D、TLW、IQA和AI均显著升高(P＜0.05,P＜0.01),肺组织结构发生明显损伤;Bcl-2、Bcl-2/Bax基因及蛋白表达明显降低,Bax基因及蛋白表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01);IPO组、D组、SB组与I/R组相比,W/D、TLW、IQA和AI均显著降低(P ＜0.05,P＜0.01),肺组织结构损伤情况有所改善;Bcl-2、Bcl-2/Bax基因及蛋白表达明显升高,Bax基因及蛋白表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01);D组与IPO组比较各项指标均无明显差异(均P＞0.05);SB组与IPO组相比,肺组织W/D、TLW、IQA和AI均显著降低(P＜0.05,P＜0.01),肺组织结构未见明显损伤;Bcl-2、Bcl-2/Bax基因及蛋白表达明显升高,Bax基因及蛋白表达明显降低(P＜ 0.05,P＜0.01).结论:I/R通过激活P38MAPK导致大鼠肺泡结构严重破坏,肺内细胞大量凋亡;IPO可能是通过抑制P38MAPK通路的激活而减轻I/R损伤.
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激活外周第三组mGluRs抑制Formalin诱导的大鼠脊髓p38MAPK的活化
目的:观察脚掌皮下注射第三组代谢型谷氨酸受体(mGluRs)激动剂L-SOP对福尔马林(Fomalin)炎性痛大鼠脊髓有丝分裂原激活蛋白激酶p38族(p38MAPK)活化的影响.方法:雄性Wistar大鼠48只,随机分为4组(n=12):分别为对照组即生理盐水组和三个不同剂量的L-SOP实验组,每组6只测定痛行为反应,另外6只测定p38MAPK的含量及活化情况.结果:与时照组比较,三个实验组大鼠第二时相的痛行为反应明显被抑制,12.5mmol/L组与25 mmol/L组还观察到大鼠第一时相的痛行为反应亦受到抑制;此外,12.5 mmol/L组与25 mmol/L组脊髓p38MAPK的活化水平与对照组比较明显下降.结论:外周L-SOP能抑制痛行为反应及降低脊髓p38MAPK的活化水平,提示外周组织中有功能性第三组代谢型谷氨酸受体的表达并参与外周痛感受器对伤害性信息的处理.
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单磷酰脂A对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用
目的:探讨丝裂素活化蛋白激酶P38MAPK是否参与单磷酰脂A预处理的延迟保护作用.方法:建立大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型.应用单磷酰脂A及P38的特异性抑制剂SB203580预处理,检测预处理后不同时间点P38磷酸化水平,并观察各组单磷酸酰酯A预处理24 h后缺血/再灌注心肌的梗死范围LDH释放.结果:预处理后24 h其心梗范围缩小,血浆LDH活性升高程度减轻(分别P＜0.01,vs I/R).用P38的特异性抑制剂SB203580可消除预处理后的延迟保护作用.结论:①单磷酰脂A预处理对24 h后缺血/再灌注心肌有保护作用.②P38参与单磷酰脂A预处理后的延迟保护作用,P38短暂而快速的激活可能是药物延迟保护作用的重要机制之一.
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MAPK信号传导通路与肠损伤后黏膜上皮修复
肠上皮细胞是肠道黏膜屏障的重要组成部分.各种病理因素均可介导肠上皮细胞损伤,造成其功能的可逆或不可逆丧失.创伤、失血性休克、肠移植、肠栓塞、大面积烧伤、严重感染、肠道炎症性疾病等均有肠损伤这一病理过程.因此,更深入了解肠上皮细胞损伤机制,采取有针对性保护措施,将为临床提供更好治疗手段和策略.
关键词： 肠损伤 MAPK信号传导通路 ERK JNK p38MAPK -
Prdx1通过P38MAPK通路影响肺癌VM的形成
目的：检测Prdx1在肺癌中的表达，探讨Prdx1对肺癌血管生成拟态（vasculoenic mimicry，VM）形成的影响，并深入研究其影响机制。方法：利用CD31/PAS双重染色及免疫组织化学法检测并分析VM及Prdx1的表达关系。将Prdx1表达质粒转染至肺癌细胞系A549、H1299中，诱导Prdx1外源性升降表达。Western blot检测转染前、后Prdx1、EMT相关蛋白（E-cadherin、Vimentin）、VM相关蛋白（VE-cadherin、VEGF）、P38MAPK通路相关蛋白（P38、P-P38）表达变化情况；A549-Prdx1细胞系加入P38MAPK通路的抑制剂SB203580后，检测（P38，P-P38、VEGF）的表达变化情况；三维，划痕和侵袭实验检测Prdx1对细胞成管、迁移、侵袭能力的影响。结果：Prdx1与患者VM的形成、淋巴结转移、不良预后密切相关。Prdx1升表达高E-cadherin表达下调，Vimentin表达上调，VE-cadherin、VEGF表达上调，P38MAPK中P38表达不变，P-P38表达上调。细胞的迁移侵袭成管能力显著增强。Prdx1低表达后与上述结果相反。A549-Prdx1细胞系中加入P38MAPK通路抑制剂SB203580后，VEGF高P-P38随剂量的增加而降低，而P38总蛋白不变。结论：Prdx1在肺癌中高表达，可能通过P38MAPK通路影响患者VM的形成。
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p38MAPK信号通路对矽肺患者人胚肺成纤维细胞中TGF-β1表达的影响
目的 探讨p38MAPK信号通路是否通过对SiO2活化的矽肺患者AM介导的人胚肺成纤雏细胞(HELF)中TGF-β1表达的调控作用,进而参与肺纤维化的发生发展.方法 以支气管肺泡灌洗法收集矽肺患者AM,在体外用含有SiO2(50μg/ml)的DMEM培养基和不含SiO2的DMEM培养基培养18h,然后收集培养的AM上清液.用组织贴块法获取培养HELF,与AM上清液共同孵育,用免疫细胞化学法检测HELF中TGF-β1的表迭,Western blot法检测HELF中P-p38MAPK蛋白表达.结果 经SiO2刺激的矽肺患者AM介导的HELF中TGF-β1和P-p38MAPK的表达与其他组相比增加,差异均有统计学意义(P(0.05).结论 在本实验务件下,经SiO2刺激的矽肺患者AM培养上清可促进HELF表达TGF-β1和P-p38MAPK,10μmol/L SB203580可以抑制HELF表达TGF-β1和P-p38MAPK.
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沉默人p38MAPK基因表达的RNA干扰的逆转录病毒载体的构建
目的 构建沉默人p38MAPK基因表达的RNA干扰的逆转录病毒表达载体.方法 查找人p 38MAPK cDNA序列,利用软件设计并合成能够形成互补双链并能转录出靶向人p38MAPK基因的 短发夹状RNA的两条寡核苷酸序列,退火后连接至线性化载体pSIREN上,获得重组质粒pSIRE N-p38MAPK,酶切和测序进行鉴定.结果 双酶切重组质粒获得特定的酶切图谱,证实所合成核酸片段的正确重组;测序结果显示重组核酸片段序列与设计的序列完全相同.结论 成功构建了沉默人p38MAPK基因的重组质粒pSIREN-p38MAPK.
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P38MAPK对结核病患者T细胞的亚群分化及分泌γ-干扰素调节作用研究
目的 探讨P38MAPK信号转导通路对人体结核菌感染状态下对γ-干扰素(IFN-γ)的分泌以及对T细胞亚型分化所起到的调节作用.方法 用葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离20例肺结核患者及15名健康成人的外周血单个核细胞(PBMC).结核病患者分离PBMC后分为肺结核实验组和肺结核对照组;健康成人分离PBMC后分为健康人实验组和健康人对照组.以上各组培养后,用ELISA试剂测细胞培养上清液IFN-γ的浓度,用流式细胞仪测CD4+及CD8+ T细胞的百分比.结果 肺结核实验组PBMC中CD4+ T细胞比值、CD8+T细胞比值及IFN-γ的含量分别为24.3±1.87、23.7±1.32、244.9±54.2 pg/ml;肺结核对照组分别为32.8±2.31、30.6±1.47、408.9±106.5 pg/ml;健康人实验组分别为28.9±2.25、22.6±3.42、286.8±76.4 pg/ml;健康人对照组分别为45.3±3.67、23.1±4.20、514.5±55.7 pg/ml.肺结核实验组中CD4+ T细胞比值和IFN-γ含量低于肺结核对照组,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.001),两组间CD8+ T细胞比值比较无显著性差异(P=0.052);健康人实验组的CD4+ T细胞比值和IFN-γ含量低于健康人对照组,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.001),两组间CD8+ T细胞比值比较无显著性差异(P=0.426);肺结核对照组的CD4+ T细胞比值和IFN-γ含量低于健康人对照组,差异有显著性(P=0.041,P=0.025).结论 体外PBMC细胞培养实验中,P38MAPK抑制剂SB203580能抑制IL-12调节T细胞分化和分泌的作用.因此,我们认为P38MAPK可以调节结核病患者的细胞免疫,有望作为结核病靶向治疗的新靶点.
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心力衰竭患者心肌组织p38 MAPK,MMP-2、3、9,FN表达与心肌重构的关系
目的 分析心力衰竭患者心肌组织p38 MAPK,MMP-2、3、9,FN表达与心肌重构之间的关系.方法 选择接受二尖瓣置换术的心力衰竭患者51例,其中美国纽约心脏病协会心功能分级Ⅱ级16级,Ⅲ级19例,Ⅳ级16例.另选取10例发生意外事故伤亡捐赠者的健康心脏器官(心功能Ⅰ级).利用现阶段为先进的光镜检查方式来对患有心肌组织病变的患者进行相对应的检测;然后再利用免疫沉淀法对患者心肌组织中的p38 MAPK进行磷酸化程度的检查,并且对p38 MAPK、MMP-2、3、9进行蛋白的有效表达;利用免疫荧光法对心肌组织的FN分布进行详细检查.结果 免疫沉淀法对具有心力衰竭患者的心肌组织结构中的p38 MAPK磷酸化程度经过凝胶成像分析其吸光度发现,心功能Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级的患者p38 MAPK磷酸化程度明显比Ⅰ级程度的强(P<0.05),Ⅲ、Ⅳ级磷酸化程度比Ⅱ的强(P<0.05),而Ⅲ、Ⅳ级的差异无统计学意义(P>0.05).心脏功能Ⅱ级患者的MMP-2蛋白表达在心肌组织结构中的表达与Ⅰ级无统计学差异(P>0.05);Ⅲ、Ⅳ级患者MMP-2蛋白表达高于Ⅰ级和Ⅱ级.MMP-3、9蛋白表达随着心脏功能的恶化,其蛋白表达相应增加,各级间比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 心力衰竭患者一般通过激活p38 MAPK而对心肌细胞进行肥大、坏死等情况的诱导,通过MMP-2、3、9蛋白的表达数量来对心肌细胞外基质FN的降解,共同参与心肌重构病变过程.
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液化石油气中毒大鼠脑组织p38MAPK的表达及意义研究
目的 观察p38MAPK在液化气中毒大鼠脑组织中的表达,探讨p38MAPK信号通路在液化气中毒大鼠发病中的作用.方法 采用大鼠液化石油气中毒模型,动物分别于中毒后1、3、7d处死,苏木精-伊红染色观察脑组织神经细胞的形态变化,免疫组化方法检测脑组织p38MAPK的表达水平.结果 大鼠液化石油气中毒后大脑皮质神经元细胞核浓缩、结构不清,可见神经元坏死迹象.免疫组化技术观察显示p38MAPK在急性液化气中毒大鼠脑组织中的表达与正常组比较明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 p38MAPK信号传递途径促进液化石油气中毒诱导的大鼠脑组织神经元坏死,在液化石油气中毒大鼠发病中起重要作用.
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p38MAPK信号通路与前列腺炎疼痛关系研究进展
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)是细胞内的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它存在于大多数细胞内,是真核细胞转导细胞外信号到细胞内引起细胞反应的一类重要信号系统.p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38MAPK)信号通路为MAPK家族的重要成员,参与细胞的生长发育及细胞间功能同步等多种生理过程,并与炎症、应激反应的调控密切相关,被认为是细胞信息传递的交汇点和共同通路[1].本文就p38MAPK信号传导通路的结构特征、亚型、激活与生物学效应及其在慢性前列腺炎疼痛发病机制中的作用与治疗前景综述如下.
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p38 MAPK 信号通路与肠缺血再灌注损伤
肠缺血再灌注（ ischemia／reperfusion，I／R）损伤是外科临床实践中常见的组织损伤之一，在严重感染、创伤、休克、心肺功能不全等疾患的病理过程中起重要作用。早在20世纪50年代Lillehei 就提出小肠是休克向不可逆发展的枢纽器官。 p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen activated protein kinase，p38MAPK）为丝裂原活化蛋白激酶信号通路中三个主要的亚家族之一，是介导细胞因子及应激刺激导致细胞凋亡、分化及炎症反应的重要细胞内信号转导途径［1］。大量文献证实p38MAPK在缺血再灌注损伤中活化，并引起组织器官结构和功能的变化。本文就p38MAPK信号通路在肠缺血再灌注损伤中的作用作一综述。
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阿魏酸钠对UUO大鼠肾脏保护作用的实验研究
目的 探讨阿魏酸钠对UUO大鼠肾脏保护作用及其可能的机制.方法 将SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组、阿魏酸钠治疗组,每组20只.术后14 d处死动物并取梗阻侧肾脏,比较病理改变;采用免疫组化法检测3组大鼠肾小管上皮细胞TGF-β1、p-p38、α-SMA的表达.处死大鼠同时心脏取血,检测3组血清肌酐、尿素氮及光抑素C水平.结果 与假手术组比较,模型组TGF-β1、p-p38、α-SMA的表达显著升高(P<0.05).与模型组比较,治疗组血清肌酐、尿素氮及光抑素C水平明显降低(P<0.05);而肾小管上皮细胞TGF-β1、p-p38、α-SMA的表达显著降低(P<0.05).结论 阿魏酸钠可能通过下调肾小管上皮细胞TGF-β1、p-p38及α-SMA的表达,起到延缓肾间质纤维化进程及保护肾功能的作用.
