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Sabin株脊髓灰质炎病毒I、Ⅱ、Ⅲ型D抗原定量检测ELISA方法的建立及应用
目的 建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus vaccine, sIPV) D抗原定量检测的双抗体夹心ELISA方法,用于sIPV的体外效力评价.方法 以纯化D抗原分别免疫西门塔尔牛和BALB/c小鼠,获得牛免疫血清和小鼠单克隆抗体(单抗)杂交瘤细胞株,以杂交瘤细胞株免疫小鼠制备单抗腹水.牛血清和小鼠腹水分别经沉淀和亲和层析后得到纯化牛多克隆抗体(多抗)和小鼠单抗.以多抗为包被抗体、单抗为检测抗体进行配对筛选,建立D抗原定量检测的双抗体夹心 ELISA.对方法的线性、范围、特异性、准确度、精密度以及在sIPV制备过程中样品检测的适用性进行验证.结果 纯化多抗和单抗均具有中和抗体活性,纯度分别达到80％和90％以上.经抗体配对筛选,确定3H10、901、1H10作为检测抗体,分别用于I、Ⅱ、Ⅲ型D抗原定量检测ELISA的建立.I、Ⅱ、Ⅲ型包被抗体的使用浓度分别为1:8 000、1:8 000,1 : 10 000, 3H10、901、1H10检测抗体的使用浓度分别为1 : 10 000,1 : 20 000,1 : 10 000.建立的I、Ⅱ、Ⅲ型D抗原检测方法的检测范围分别为0.4～13.0、0.4～12.0和0.4～20.0 DU/ml,线性回归决定系数≥0.99.该法能特异性检出D抗原,与C抗原、不同型别D抗原以及生产过程中的其他物质无交叉反应.用该法对高、中、低浓度样品进行测定, I、Ⅱ、Ⅲ型测定值/理论值(×100％)分别为97％～111％、91％～104％和95％～102％、相对标准偏差分别≤7％、≤9％和≤10％;采用该法检测sIPV生产过程中的样品,显示出抗原纯化趋势.结论 建立了脊髓灰质炎病毒I、Ⅱ、Ⅲ型D抗原定量检测ELISA方法,可有效用于sIPV的体外效力评价.
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脊髓灰质炎病毒中和抗体检测血清参考品的制备及稳定性
目的 制备抗脊髓灰质炎(脊灰)病毒血清作为检测参考品,并研究其稳定性.方法 用1、2、3型脊灰病毒分别接种非洲绿猴肾细胞,收获病毒液,超滤浓缩后纯化病毒抗原,并进行蛋白含量和纯度检测.用纯化的病毒抗原免疫新西兰白兔获得分别抗3个型别的血清,过滤、分装、冻干后,进行无菌检验、支原体检验、水分测定,用微量细胞病变抑制法进行特异性检测.3名实验员各标定5次候选参考品的中和抗体效价,计算变异系数.血清放置于-20℃进行稳定性分析.结果 纯化的1、2、3型脊灰病毒抗原蛋白含量分别为12.3、10.4、9.8μg/ml.电泳蛋白条带的相对分子质量与文献报道一致.高效液相色谱法检测的1、2、3型脊灰病毒抗原蛋白纯度分别为100％、99％和96％.抗各型脊灰病毒血清仅可中和对应型别,而不能中和另两个型别脊灰病毒或肠道病毒.无菌检验、支原体检验结果及水分含量(均低于3％)均符合药典要求.血清参考品的抗1、2、3型脊灰病毒中和抗体效价分别为73 587、3 264、34 857.候选参考品在-20℃放置5年后中和抗体效价未降低(t=-1.25,P=0.225).结论 制备的抗1、2、3型脊灰病毒冻干血清参考品稳定性好,适用于检测Sabin株脊灰灭活疫苗免疫原性及脊灰病毒特异性中和抗体.
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Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗宿主细胞DNA残留量检测方法研究
目的 建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗Vero细胞DNA残留量的检测方法.方法 提取Vero细胞基因组DNA,制备地高辛标记探针.比较样品不同处理方式的检测差异.对建立的残留DNA检测方法进行特异性、灵敏度和稳定性验证.结果 Vero细胞基因组DNA的质量浓度为295 μg/ml,260nm与280nm波长处的吸光度比值为1.88.探针灵敏度达到0.01 pg/μl.采用苯酚抽提方式处理DNA参考品,检测灵敏度为1 ng;而用碘化钠处理DNA参考品,灵敏度达到10 pg.特异性检测表明,探针与非同源DNA无杂交.灵敏度和稳定性检测结果显示,探针于-70℃保存9个月,灵敏度仍为10 pg.结论 建立了Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗Vero细胞DNA残留量的检测方法.采用碘化钠提取DNA,回收率高,操作简单,适用于Vero细胞的残留DNA检测.
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不同方法配制的DTaP-sIPV中sIPV的免疫原性研究
目的 对采用不同配制方式制备的,含不同剂量Sabin株脊髓灰质炎(脊灰)灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus vaccine,sIPV)的DTaP-sIPV联合疫苗中sIPV的免疫原性进行研究.方法 按照2种不同方式配制含高、低剂量sIPV的DTaP-sIPV联合疫苗.将70只大鼠按简单随机法分成7组,分别为F1H(DTaP-sIPV高剂量组,配制方式1)、F2H(DTaP-sIPV高剂量组,配制方式2)、sIPV-H(sIPV高剂量组)、F1L(DTaP-sIPV低剂量组,配制方式1)、F2L (DTaP-sIPV低剂量组,配制方式2)、sIPV-L(sIPV低剂量组)、赛诺菲巴斯德五联疫苗潘太欣对照组.每组10只大鼠,间隔3周双侧后腿肌内注射,0.5 ml/只,共免疫3针.于第0、3、6、9、13、17、21、25周眼眶采血、分离血清,采用微量细胞病变效应抑制法分别测定血清中抗I、Ⅱ、Ⅲ型脊灰病毒中和抗体滴度,并进行多样本均数方差分析.结果 每针免疫后,各组抗各型中和抗体滴度均持续上升,第9周均达到高水平,第13周开始显著下降,至第25周仍维持在一定水平.3针免疫完成后3周,F2H组的抗Ⅰ型脊灰病毒中和抗体几何平均滴度显著高于潘太欣组(F=0.988,P=0.027);抗Ⅱ型中和抗体,F2H组显著高于F1H组,sIPV-H组显著高于F1H和潘太欣组(F=2.391,P值均＜0.05);抗Ⅲ型中和抗体,各组间差异均无统计学意义.3针基础免疫后各时间点F2H组抗各型中和抗体滴度均为高,但除第9周其抗Ⅱ型中和抗体显著高于F1H组外,其他差异均无统计学意义.结论 DTaP-sIPV联合疫苗免疫大鼠后可以诱导产生抗各型脊灰病毒中和抗体,且其滴度和持续时间均优于或等同于潘太欣组.DTaP-sIPV诱导的中和抗体滴度不低于相应剂量的sIPV.虽然配制方式2可能更佳,但2种配制方式间sIPV的免疫原性差异无统计学意义.
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WHO关于脊髓灰质炎疫苗的意见书
此文取代2014年WHO关于脊髓灰质炎疫苗的意见书,介绍了口服脊髓灰质炎疫苗和脊髓灰质炎灭活疫苗的特性、安全性、免疫原性、效果、保护作用持续时间,WHO对脊髓灰质炎疫苗接种和与其他疫苗同时接种的意见,以及消灭脊髓灰质炎的成本效益.
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WHO关于脊髓灰质炎疫苗的意见书
此文取代2014年WHO关于脊髓灰质炎疫苗的意见书,介绍了口服脊髓灰质炎疫苗和脊髓灰质炎灭活疫苗的特性、安全性、免疫原性、效果、保护作用持续时间,WHO对脊髓灰质炎疫苗接种和与其他疫苗同时接种的意见,以及消灭脊髓灰质炎的成本效益.
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关于2013-2016年全球脊髓灰质炎灭活疫苗及将三价口服脊髓灰质炎疫苗更换为二价疫苗的介绍
此文介绍了目前全球使用的脊髓灰质炎疫苗、全球引入脊髓灰质炎灭活疫苗的进展和2016年4月全球同步将三价口服脊髓灰质炎疫苗更换为二价疫苗的方案及可能产生的影响.
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关于2013-2016年全球脊髓灰质炎灭活疫苗及将三价口服脊髓灰质炎疫苗更换为二价疫苗的介绍
此文介绍了目前全球使用的脊髓灰质炎疫苗、全球引入脊髓灰质炎灭活疫苗的进展和2016年4月全球同步将三价口服脊髓灰质炎疫苗更换为二价疫苗的方案及可能产生的影响.
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WHO关于脊髓灰质炎疫苗的意见书
此文介绍了脊髓灰质炎病毒的流行病学、目前国际上使用的2种脊髓灰质炎疫苗的安全性、免疫原性和效果以及WHO对脊髓灰质炎疫苗的意见.
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WHO关于脊髓灰质炎疫苗的意见书
此文介绍了脊髓灰质炎病毒的流行病学、目前国际上使用的2种脊髓灰质炎疫苗的安全性、免疫原性和效果以及WHO对脊髓灰质炎疫苗的意见.
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第11次世界卫生组织和联合国儿童基金会磋商会
2012年10月25日世界卫生组织和联合国儿童基金会在日内瓦召开了有关脊髓灰质炎疫苗生产商和国家监管机构的磋商会,向生产商和国家监管机构汇报了当前全球紧急行动计划在消灭脊髓灰质炎野病毒和消除循环的疫苗衍生脊髓灰质炎病毒两个方面的工作;通报了2013-2016年三价口服脊髓灰质炎疫苗(oral poliovirus vaccine,OPV)、二价OPV(1和3型)、单价OPV(1型)的需求预测;介绍了新的脊髓灰质炎消灭前后的风险评估以及当前为管理此类风险而进行的政策和产品研究和项目;强调了需要进一步加强参与全球消灭脊髓灰质炎行动的各生产商与国家监管机构之间的合作.
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脊髓灰质炎病毒的黏膜免疫
现阶段基于口服脊髓灰质炎疫苗(oral poliovirus vaccine,OPV)的全球脊髓灰质炎消灭行动发现,该疫苗不太理想的免疫原性已成为根除此疾病的主要障碍,疫苗在部分地区一些人群中无法诱导抗麻痹性脊髓灰质炎的保护作用.2010年12月18-19日在印度新德里召开了关于“黏膜免疫与脊髓灰质炎疫苗:对野型脊髓灰质炎病毒感染、传播以及免疫失败的影响”的会议,旨在更好地了解全球脊髓灰质炎控制现状,并明确增强OPV的免疫应答和效果的方法,以加速全球根除麻痹性脊髓灰质炎.
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2013-2018年消灭脊髓灰质炎后阶段战略计划
2013年1月,在全球消灭脊髓灰质炎行动展现胜利曙光之时,全球消灭脊髓灰质炎行动(GPEI)发布了新制订的《2013-2018年消灭脊髓灰质炎后阶段战略计划》.此文介绍了战略计划的要点.
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2013-2018年消灭脊髓灰质炎后阶段战略计划
2013年1月,在全球消灭脊髓灰质炎行动展现胜利曙光之时,全球消灭脊髓灰质炎行动(GPEI)发布了新制订的《2013-2018年消灭脊髓灰质炎后阶段战略计划》.此文介绍了战略计划的要点.
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脊髓灰质炎减毒活疫苗治疗扁平疣60例临床观察
目的 探究对扁平疣患者采用脊髓灰质炎减毒活疫苗治疗的临床疗效.方法 选取在本门诊进行治疗的扁平疣患者120例作为研究对象,依据随机数字表法将患者分为对照组和观察组,对照组患者采用肌内注射卡介菌多糖核酸液,观察组患者采用口服脊髓灰质炎减毒活疫苗,比较2组患者临床疗效.结果 观察组患者总有效率为90.00％,高于对照组患者的65.00％(x2=4.241,P＜0.05).观察组患者不良反应发生率为23.33％,低于对照组患者的50.00％(x2=4.243,P＜ 0.05).结论 对患有扁平疣的患者采用脊髓灰质炎减毒活疫苗治疗可缓解患者的临床症状,效果显著,有效提高患者的美观性,值得在临床治疗中广泛应用.
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邳州市消灭脊髓灰质炎综合措施14年效果评价
目的通过对邳州市消灭脊髓灰质炎14年来的综合措施和效果进行分析和评价,为进一步巩固消灭脊灰成果提供科学依据.方法采用AFP主动监测系统进行AFP病例的监测和搜索,用Cochran趋势χ2检验进行抗体阳性率及发病趋势分析.结果 1993年以来无脊灰野病毒病例发生,AFP报告专率年平均为2.05/10万,各种监测指标及时率和完整率均为100%.结论保持高水平的接种率和敏感的AFP监测系统是消灭脊灰的成功策略.
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银川市儿童监护人脊灰疫苗知晓率及其影响因素分析
目的 了解银川市儿童监护人脊灰疫苗知晓率及影响因素,加强疫苗相关知识的普及,防止和减少疫苗相关脊髓灰质炎麻痹型病例(voice activity and participation profile,VAPP),维护儿童身体健康,推动扩大国家免疫规划工作深入开展.方法 在银川市随机抽取12个社区,利用社区计划免疫接种日,以随机拦截的方式,对1 164名儿童监护人进行脊灰疫苗预防接种知识问卷调查.结果 儿童监护人知道脊灰疫苗(糖丸和针剂脊灰疫苗)598人,知晓率为51.4％.单因素分析结果显示:儿童监护人脊灰疫苗知晓率与儿童关系、监护人年龄、文化程度、职业、家庭子女数、本地居住时间、家庭月收入有关.二分类非条件Logistic逐步回归分析结果显示:儿童监护人脊灰疫苗知晓率与儿童关系、监护人年龄、文化程度及家庭子女数有关.结论 在今后工作中要将宣传重点放在疫苗相关知识上,在加强宣传的同时,根据不同人群需求积极调整宣传教育的方式,调动儿童监护人学习脊灰疫苗相关知识的积极性,强化预防接种知识的普及.
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1例Ⅱ型脊髓灰质炎病毒疫苗变异株病例
继1994年世界卫生组织(WHO)美洲区宣布消灭脊髓灰质炎(脊灰)后,中国所在的西太平洋区在2000年被证实为无脊灰区.近年来,我国周边一些国家发现了脊灰疫苗衍生病毒(VDPV),给我国维持无脊灰状态带来了严峻的挑战.2005年10月,福州市闽清县东桥镇1例AFP病例经国家和福建省AFP病例分类专家诊断小组诊断为Ⅱ型脊灰疫苗变异株病例.
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孕期脊髓灰质炎强化免疫的必要性研究
目的探讨孕期脊髓灰质炎强化免疫对母血和脐血脊髓灰质炎IgG抗体水平的影响,评价孕期脊髓灰质炎强化免疫的必要性.方法将门诊64例孕28-33周的孕妇随机分为研究组和对照组各32例;研究组含服脊髓灰质炎活疫苗;临产前分别抽取两组孕妇肘静脉血和产时取脐血,用ELISA法检测其抗脊髓灰质炎IgG抗体水平.结果研究组母血和脐血抗脊髓灰质炎抗体IgG水平明显高于对照组,差异有非常显著性(p<0.01).结论孕期脊髓灰质炎强化免疫对胎、婴儿有一定的免疫保护作用,有必要对孕妇进行脊髓灰质炎强化免疫.
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广东省2003～2004年脊髓灰质炎疫苗强化免疫活动效果分析
目的了解广东省2003～2004年脊髓灰质炎(脊灰)疫苗强化免疫活动效果.方法按强化免疫活动实施方案于2003年12月5～6日和2004年1月5～6日在广东省全省范围开展脊灰疫苗强化免疫活动,逐级进行资料汇总上报,并采用随机原则进行现场快速评估.结果全省各地上报第一轮应接种对象2 701 029人,已接种2 625 039人,接种率为97.2%;第二轮应接种对象2 769 745人,已接种2 693 545人,接种率为97.2%.现场快速评估,第一轮共调查7 947名对象,接种率为97.1%,上卡率为92.9%;第二轮共调查7 539名对象,接种率为98.2%,上卡率为94.1%.结论两轮强化免疫活动的脊髓灰质炎疫苗接种率均达到95%以上的目标.今后应继续加强对流动儿童的免疫接种工作.
