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不规则趋化因子在百草枯致大鼠急性肺损伤过程中的表达
目的 通过观察不规则趋化因子(fractalkine,FKN,又称CX3CL1)在百草枯(paraquat,PQ)中毒早期大鼠血清及肺组织的表达,探讨FKN在PQ致大鼠急性肺损伤的作用.方法 SD大鼠66只,随机(随机数字法)分为染毒组(36只)和对照组(30只).染毒组腹腔注入PQ (22 mg/kg),对照组给等量生理盐水.每组分别在染毒后6、12、24、72及120 h处死大鼠.测定肺脏系数,检测血清及肺组织匀浆FKN含量(ELISA法),观察肺组织病理改变(HE染色)及FKN的表达(免疫组化法).应用SPSS 19.0软件分析数据.结果 在各观察时间点(6、12、24、72及120 h),染毒组肺脏系数分别为(5.03 ±0.07、5.17±0.10、5.46±0.10、5.68±0.15及5.83±0.11),明显高于对照组(4.49 ±0.20、4.28±0.13、4.45±0.17、4.31 ±0.19及4.31±0.16),差异具有统计学意义(P＜0.01);染毒组血清FKN质量浓度(pg/mL)分别为140.9±15.8、157.9±17.6、188.8±24.8、224.4±18.1及229.9±10.0,明显高于对照组(121.7±12.8、121.6±12.1、118.3±14.0、122.8±12.4及120.5±8.8),差异具有统计学意义(6h时P＜0.05,其余P＜0.01);染毒组肺组织匀浆FKN质量浓度(pg/mL)分别为(4 222.0±641.1、5 021.0±514.5、5 911.6±478.1、7 092.2±652.9及7 639.3±666.6),明显高于对照组(2 860.2±477.3、3 068.9±446.0、3 168.7±728.5、3 178.0±488.2及3 147.3±426.6),差异具有统计学意义(P＜0.01).镜下观察,与对照组相比,染毒组大鼠肺组织病理改变为炎性细胞浸润、肺组织充血水肿及结构破坏等急性肺损伤表现,并随时间推移逐渐加重.FKN主要表达于支气管和肺泡上皮细胞、肺小动脉内皮细胞中,FKN表达增多的区域炎性细胞浸润增多.肺组织匀浆FKN含量与肺脏系数呈正相关(r=0.937),血清FKN含量与肺组织匀浆FKN含量呈正相关(r=0.968).结论 FKN与PQ致大鼠急性肺损伤的发病过程紧密相关.
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姜黄素对百草枯中毒致肺纤维化大鼠肺功能及TGF-β1、NF-κB表达的影响
目的 观察姜黄素对百草枯中毒致肺纤维化大鼠肺功能及TGF-β1、NF-κB的影响,为其临床应用提供理论依据.方法 SPF级Wistar大鼠72只随机(随机数字法)分为百草枯染毒组(百草枯50 mg/kg一次性灌胃染毒)、姜黄素治疗组(百草枯染毒后30 min给予姜黄素200 mg/kg一次性腹腔内注射),空白对照组(相同时间点注射等体积生理盐水).常规饲养14 d后观察大鼠肺功能,免疫组化法检测转化生长因子-β1 (TGF-β1)、核因子-κB (NF-κB)蛋白的表达.结果 姜黄素干预组动物生存率41.67％,百草枯中毒组生存率70.83％,两组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).与空白对照组相比,百草枯染毒组TE(呼气时间)、PIF(吸气峰流量)、PEF(呼气峰流量)、EF50(呼出50％气量时的流速)、TV(潮气量)、F(呼吸频率)等肺功能指标均下降,差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),与百草枯染毒组比较,姜黄素治疗组Te、PEF、TV、F均升高,差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);大鼠肺组织中rGF-β1、NF-κB在空白对照组有少量表达,与空白对照组比,百草枯染毒组表达明显增强(P＜0.01或P＜0.05);姜黄素治疗组与百草枯染毒组比较,TGF-β1、NF-κB表达显著减弱(P＜0.01或P＜0.05);结论 抑制肺组织中TGF-β1、NF-κB的过度表达,是姜黄素减轻百草枯中毒肺纤维化程度的作用机制之一.
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早期血液灌流救治急性百草枯中毒患者临床疗效分析
目的 分析168例急性百草枯中毒患者的临床资料,探讨早期反复血液灌流(HP)的疗效.方法 收集2010年1月至2011年2月中国医科大学附属第一医院急诊监护室(EICU)收治的接受早期反复HP(服毒24h内接受HP≥2次)的81例急性百草枯中毒患者(A组)的临床资料,与2008年1月至2009年12月收治的87例患者(B组)进行对照研究,对早期反复HP的疗效进行分析.A组与B组除HP外接受统一的综合救治方案.应用SPSS 13.0软件包,计量数据以均数±标准差((-x)±s)表示,组间比较采用成组t检验,对计数资料进行x2检验.结果 168例患者均为口服百草枯农药急性中毒,A组81例,病死率64.2％,B组87例,病死率78.2％,两组病死率比较差异具有统计学意义(x2 =4.01,P=0.042).A组患者服毒至首次HP时间(3.6±3.3)h,服毒24h内平均接受HP(2.9±1.4)次.中毒后第2天开始,A组和B组患者SOFA评分均高于来诊时,中毒第3天、第4天A组患者的SOFA评分低于同日B组患者,差异具有统计学意义(P＜0.05).A组和B组的患者比较,B组患者中ALT＞ 80 U/L和TBIL＞ 34.2 μmol/L的出现时间早于A组,差异具有统计学意义(P＜0.05).B组患者中肌酐＞177 μmol/L,PaO2＜60mm Hg(1mm Hg=0.133 kPa)的患者所占的比例高于A组,且出现时间早于A组,差异具有统计学意义(P＜0.05).B组患者ALT、TBIL、肌酐、AMY、肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)的高值比A组患者高,而B组患者PaO2低值比A组患者低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 早期反复HP可以延迟急性百草枯中毒后脏器损伤并减轻损伤程度,为进一步采取治疗措施赢得时间.
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缺氧诱导因子-1α在百草枯中毒大鼠肝脏的表达
目的 通过观察百草枯染毒大鼠肝脏组织的病理变化及中毒后不同时间点血清转氨酶水平和肝脏组织中HIF-1 α蛋白及TGF-β蛋白表达的变化,探讨HIF-1 α与百草枯中毒后肝损伤的相关性.方法 将48只健康SD雄性大鼠随机(随机数字法)分为对照组(6只)和染毒组(42只):对照组大鼠予生理盐水1 mL一次性灌胃,染毒组按照50 mg/kg将20％浓度的百草枯原液用生理盐水稀释至1 mL后一次性灌胃,按灌胃后2、6、12、24、48、72 h及120 h分为7个亚组,每组6只.分别收集动脉血做血气分析及乳酸和血清转氨酶检测;肝组织切片行HE染色和Masson染色;蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测肝组织HIF-1 α和TGF-β蛋白表达.数据收集后两组之间比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA).结果 中毒后2h出现转氨酶的明显升高,6h开始出现血乳酸的明显升高,72 h开始出现低氧血症;中毒后2h开始肝脏组织病理学表现为镜下见汇管区周围部分肝细胞变性、坏死,汇管区少量炎症细胞浸润;至中毒后12 h汇管区进一步扩大,伴大量炎性细胞浸润,并出现纤维条索样增生,且随时间延长肝细胞坏死及汇管区纤维化表现逐步向中央静脉周围延伸;中毒后2h大鼠肝脏组织的HIF-1 α与TGF-β蛋白的表达均明显升高,染毒组2、6、12、24、48、72 h及120 h各时间点与对照组的差异具有统计学意义.结论 百草枯中毒后早期肝脏组织HIF-1 α表达明显升高,并有可能同时上调了促纤维化因子TGF-β的表达.
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孟鲁司特对百草枯所致大鼠肺损伤的治疗作用
目的 探讨孟鲁司特对百草枯(PQ)中毒所致大鼠肺组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肺湿/干质量比(W/D)和血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、肺组织中核因子κB (NF-κBp65)及肺组织病理变化的影响.方法 取SD大鼠104只,随机(随机数字法)分为3组,PQ组40只、孟鲁司特组40只、对照组24只.PQ组和孟鲁司特组用百草枯一次性染毒,分别在不同处理后第1、3、5、7天时处死大鼠.观察肺组织中MDA和SOD含量、肺湿/干质量比(W/D)、血清TNF-α、IL-10含量及肺组织中NF-κBp65含量,并取肺组织制备标本分别在光镜和电镜下观察肺组织的病理改变.结果 PQ组第7天时肺组织中MDA含量、肺组织湿/干质量比、血清TNF-α和IL-10含量、肺组织中NF-κBp65含量明显高于对照组,SOD含量明显低于对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.01).孟鲁司特组第7天时肺组织中MDA含量、肺组织湿/干质量比、血清TNF-α和IL-10含量、肺组织中NF-κBp65含量明显低于PQ组,SOD含量明显高于PQ组,差异均具有统计学意义(P＜0.05).光镜及电镜观察PQ组病理学改变为急性弥漫性肺损伤,表现为肺泡腔内出血、渗出、炎性细胞浸润,Ⅰ型和Ⅱ型上皮细胞坏死脱落；孟鲁司特组大鼠肺组织病理改变为局灶性肺泡少量炎性细胞浸润,Ⅰ型上皮细胞完整,Ⅱ型上皮细胞未见明显坏死.结论 孟鲁司特对百草枯中毒所致大鼠急性肺损伤具有一定的保护作用.
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甘草酸二铵对百草枯中毒大鼠肾组织TOLL样受体4表达的影响
目的 了解甘草酸二铵(DG)对百草枯(PQ)中毒大鼠肾组织TOLL样受体4(TLR4)及NF-κB等表达影响.方法 根据随机数字表法将大鼠分为PQ染毒组(PQ组,n=20)、DG干预组(DG组,n=20)和空白对照组(NS组,n=10).PQ组及DG组100 mg/kg一次性灌胃方式建立急性肾损伤大鼠动物模型,NS组予以等量生理盐水灌胃,DG组灌胃后立即给予甘草酸二铵50 mg/kg腹腔注射,每24 h重复给药一次.ELISA检测血清和肾组织IL-6、IL-10的含量,免疫组化分析各组TLR4、Myd88及NF-κB P65蛋白表达变化,荧光定量PCR方法检测肾组织TLR4、Myd88及NF-κB的的基因表达.结果 与NS组比较,PQ组的血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、血清及肾组织中IL-6水平均明显升高(F=266.014,168.160,63.279, 192.997,均P＜0.01).与PQ组比较,DG组Cr、BUN、血清及肾组织中IL-6水平均明显降低(F=266.014,168.160,63.279, 192.997,均P＜0.01).与NS组比较,PQ组的肾组织和血清中IL-10水平均明显升高(F=87.511,79.473,均P＜0.01),与PQ组比较,DG组的肾组织和血清中IL-10水平均有一定升高(F=87.511,79.473,均P＜0.01).与NS组比较,PQ组肾组织TLR-4、Myd88及NF-κBmRNA表达明显升高(F=84.408,60.683,86.272,均P＜0.01);与PQ组比较,DG组肾组织TLR-4、Myd88及NF-κB mRNA表达明显降低(F=84.408,60.683,86.272,均P＜0.01).免疫组化结果显示,PQ组肾组织TLR-4、Myd88及NF-κB的蛋白表达量明显升高(F=79.139,61.799, 112.740,均P＜0.01).与PQ组比较,DG组肾组织TLR-4、Myd88和NF-κB的蛋白表达量明显降低(F=79.139,61.799,112.740,均P＜0.01).结论 甘草酸二铵可减轻百草枯中毒大鼠的急性肾损伤,并能降低肾组织TLR-4、myd88及NF-κB的表达水平.
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洗胃对猪百草枯灌胃模型的清除效果分析
目的 评价不同时间点洗胃(gastric lavage,GL)清除猪胃内百草枯(paraquat,PQ)的效果,以及对血浆PQ浓度的影响.方法 将17头健康雌性家猪按随机数字表法分为PQ组(n=6)、PQ+1 h GL组(n=6)、PQ+6 h GL组(n=5).所有动物按60 mg/kg经胃管注入40％ PQ原液,PQ+1 h GL组和PQ+6 h GL组分别在1h和6h经胃管给予20 L温水单次洗胃,监测生命体征及血药浓度并持续观察24h,LC-MS法测量血浆及HPLC法测量胃洗出液中的百草枯浓度.结果 PQ组、PQ+6 h GL组和PQ +1 h GL组的24 h存活率分别为66.7％、80％、100％;血PQ峰浓度(μg/mL)分别为(5.12±3.38)、(3.99 ± 1.24)、(1.96±1.83);PQ+1hGL组和PQ+6 hGL组洗出液的PQ含量占总摄入量的(24.46±6.49)％vs.(30.72±9.86)％ (P＞0.05);前10 L和后10 L的洗出液中PQ的清除比例:PQ+1 h GL组为(20.44±5.59)％vs.(4.02±1.82)％(P＜0.01),PQ+6 h GL组为(26.17±7.19)％vs.(7.03±4.29)％(P＜0.01).结论 1h和6h洗胃均能有效清除PQ,减少24h病死率;尽早洗胃(1 h)能更明显降低血浆PQ峰浓度;洗胃液在后1/2体积(后10 L洗出液)时清除百草枯的能力明显下降.
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甲泼尼龙联合环孢素A对百草枯中毒的防治
目的 在建立百草枯(paraquat,PQ)中毒致肺纤维化大鼠模型的基础上,探讨早期大剂量甲泼尼龙联合环孢素A治疗对PQ中毒大鼠肺组织病理变化、氧化一抗氧化指标和肺纤维化特异性指标的影响,以判断疗效.方法 (1)PQ中毒致肺纤维化大鼠模型的建立:40只雄性Wistar大鼠随机(随机数字法)分为5组,分别采用20 mg/kg,25 mg/kg,30 mg,/kg,35mg/kg和40 mg/kg5个PQ剂量水平进行染毒.计算各组大鼠的两周死亡率及观察肺组织病理形态学变化.以肺组织病理表现为纤维化、死亡率在可接受范围之内作为模型染毒剂量,并以生化指标验证.(2)甲泼尼龙联合环孢素A对PQ中毒大鼠肺纤维化的疗效观察:72只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(8只)、模型组(16只)、药物干预组(48只)3组.正常对照组注射25 mg/kg生理盐水;其余组PQ 25 mg/kg染毒.药物干预组再随机分为3组(每组16只),分别于染毒后2 h,24 h,72 h三个时间点单次应用甲泼尼龙(90 mg/kg)联合环孢素A(22.5 mg/kg).染毒后7 d,14 d观察大鼠肺组织病理变化,采用碱水解法、黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法分别测定肺组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和羟脯氨酸(HPY)的含量.组间比较采用两因素析因设计的方差分析,组内比较采用单因素3水平设计的方差分析.结果 25 mg/kg为肺纤维化大鼠模型的PQ染毒剂量.与模型组比较,各药物干预组大鼠肺组织肺泡数量明显增多,成纤维细胞增生程度较轻,胶原及纤维含量较少.与模型组比较,各药物干预组大鼠肺组织SOD含增加,HPY和NDA含量明显降低(P＜0.05或P＜0.01).与72 h药物干预组比较,2 h,24 h药物干预组大鼠肺组织成纤维细胞增生程度较轻,胶原、纤维较少,肺组织SOD含量明显升高(P＜0.05或P＜0.01),MDA含量明显降低(P＜0.01).结论 早期联合应用大剂量甲泼尼龙和环孢素A治疗PQ中毒大鼠,可以显著减轻PQ中毒所致的肺组织氧化损伤和肺纤维化程度,改善预后.
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ROCK抑制剂法舒地尔对百草枯中毒大鼠肺纤维化的干预研究
目的 探讨ROCK抑制剂法舒地尔对百草枯中毒大鼠肺纤维化的影响及可能的机制.方法 将72只SPF级SD雄性大鼠,随机(随机数字法)分为4组,即正常对照组(NS组,n=18)、法舒地尔对照组(FS对照组,n=18)、百草枯染毒组(PQ染毒组,n=18)及法舒地尔干预组(FS干预组,n=18).在第7、14、28天各组随机取6只大鼠,麻醉后处死,留取肺组织标本.碱水解法测定肺组织羟脯氨酸(HYP)含量,实时荧光定量PCR(real time PCR)检测Ⅰ、Ⅲ型胶原、结缔组织生长因子(CTGF)与Rho/ROCK信号通路中ROCK1 mRNA的表达,蛋白印迹法(Western-blot法)测定Ⅰ、Ⅲ型胶原、CTGF与Rho/ROCK信号通路中ROCK1蛋白的表达.光镜下观察各组肺组织病理变化情况.结果 与NS组比较,FS对照组各项观察指标无明显变化,差异均无统计学意义(P＞0.05).与NS组比较,PQ染毒组和FS干预组HYP含量均升高,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、CTGF、ROCK1 mRNA表达量升高,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、CTGF、ROCK1蛋白表达量升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).与同时间点PQ染毒组比较,FS干预组在第7、14、28天,HYP含量均降低,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、CTGF、ROCK1 mRNA表达量显著降低,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、CTGF、ROCK1蛋白表达量显著降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).光学显微镜下可见,PQ染毒组大鼠肺组织在染毒后第28天,肺纤维化程度严重,各个时间点FS干预组大鼠病理损害都较同时间点PQ染毒组有所减轻.结论 ROCK抑制剂法舒地尔通过调控Rho/ROCK信号转导通路,使CTGF表达量下调,抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达,蛋白沉积减少,进而减轻百草枯中毒肺纤维化程度,对急性百草枯中毒所致的肺纤维化有一定的保护作用.
关键词： 百草枯 肺纤维化 法舒地尔 Rho/Rock信号通路 -
应用连二亚硫酸钠判断百草枯中毒的程度和预后
目的 应用连二亚硫酸钠显色法判断百草枯中毒的程度和预后.方法 将不同浓度的百草枯标准品与过量连二亚硫酸钠在碱性条件下反应,建立百草枯检测标准比色卡和标准曲线.应用连二亚硫酸钠显色法前瞻性检测浙江大学医学院附属第一医院2008年1月至2009年5月间收治的22例百草枯中毒患者血、尿液百草枯浓度,回顾性分析了患者就诊即刻血、尿百草枯浓度与患者预后的相关性.结果22例百草枯中毒患者经血液灌流、血浆置换和血液滤过治疗后随访3月以上,存活6例(27.3%).6例存活者就诊即刻百草枯半定量检测显示为极浅(3例)或浅(3例),16例死亡患者就诊即刻百草枯半定量检测显示为浅(1例)、中(2例)、深(2例)、极深(11例).6例存活患者与16例死亡患者就诊即刻尿百草枯质量浓度分别为(1.95±1.76)mg/L和(53.4±45.9)mg/L,P＜0.01.6例存活患者和13例死亡患者就诊即刻血清百草枯质量浓度分别为(1.70±1.39)ng/L和(29.5±22.1)mg/L,P＜0.01.22例百草枯中毒患者存活状况与就诊即刻尿百草枯半定量、定量检测结果 及血清百草枯质量浓度均显著相关(r_s分别为-0.804、-0.772,和-0.593,P＜0.01).结论 应用连二亚硫酸钠可迅速检测患者血、尿百草枯质量浓度,有助于了解患者中毒程度和判断预后.
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姜黄素对百草枯中毒大鼠肺组织胶原面积及TNF-α、IL-6、NE表达的影响
目的 观察姜黄素对百草枯中毒大鼠肺组织胶原面积及TNF-α、IL-6、NE表达的影响,以探讨姜黄素治疗百草枯中毒的可能机制.方法 SPF级Wistar大鼠108只,随机(随机数字法)分为空白对照组(B组)、百草枯染毒组(PQ组)、姜黄素治疗组(PC组),PQ组及PC组给予百草枯(50 mg/kg)(北京华都生物科技)一次性灌胃染毒复制中毒模型,同时空白对照组给予等量生理盐水灌胃;灌胃30 min后,PC组给予姜黄素(sigma公司)200 mg/kg一次性腹腔注射,B组、PQ组注射等体积生理盐水,常规饲养.于3d、7d、14 d,行HE染色、Masson染色观察肺组织病理形态学、胶原纤维的分布及变化,酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素(IL-6)含量,免疫组织化学法观察肺组织中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)的表达及变化.结果 与B组比较,PQ组各时间点肺组织均有不同程度的肺泡炎,以7d时为严重;肺组织弥漫性纤维化,大量胶原纤维沉积,14 d胶原纤维沉积严重;NE表达明显增强,14 d明显.血清TNF-α、IL-6含量亦显著升高(P＜0.05,P＜0.01);与PQ组比较,PC组各时间点肺泡炎及肺纤维化程度均有明显减轻,NE表达明显减弱,TNF-α、IL-6含量亦显著降低(P＜0.05).结论 抑制炎症因子及NE的表达,降低大鼠的肺泡炎和肺纤维化程度,可能是姜黄素治疗百草枯中毒肺的作用机制之一.
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不同时段剂量腹腔注射百草枯致小鼠肺损伤及肺纤维化效果评价
目的 观察不同时段、剂量腹腔注射百草枯(PQ)对于小鼠肺损伤及肺纤维化诱导效果的区别,以期建立更为合适、操作简便且结果稳定的肺损伤和/或肺纤维化动物模型.方法 8～10周龄雄性C57BL/6J小鼠,分别采取腹腔注射单次给药(40 mg/kg、50 mg/kg、60 mg/kg),连续给药(10 mg/kg、12.5 mg/kg、15 mg/kg),以及间断给药(20 mg/kg、22.5 mg/kg、25 mg/kg)的方法,同组随机(随机数字法)匹配生理盐水对照组.分别于末次给药后1周、2周处死小鼠.监测小鼠一般情况,体质量状况及病死率.收获日检测肺功能指标;肺泡支气管灌洗液(BALF)细胞计数及分类;羟脯氨酸浓度;以及组织病理学分析.结果 单次或间断腹腔注射不同剂量PQ,均可诱导部分小鼠发生急性肺损伤,早期观察时间点的炎症表现随剂量增高而加重;晚期观察点少量存活小鼠可发生肺间质纤维化.病理切片见损伤部位主要集中在背后段、外周及胸膜下.但以上两组给药方式早期均有较高病死率,故晚期肺纤维化致病率较低.小剂量PQ连续给药法在各时间点诱导C57BL/6J小鼠的肺部病变缺乏显著意义.结论 单次大剂量或间断中等剂量腹腔注射作为PQ全身性给药的方法之一,可以成功诱导出早期小鼠急性肺损伤,但研究终点肺纤维化的致病率较低.PQ小剂量连续给药法致C57BL/6J鼠系肺损伤及肺纤维化的效果不明显.
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阿魏酸钠对百草枯中毒大鼠急性肺损伤的保护作用
目的探讨阿魏酸钠(sodium ferulate,SF)对百草枯(paraquat,PQ)中毒致大鼠急性肺损伤的治疗作用及其可能机制.方法大鼠一次性腹腔注射PQ 15 mg/kg,染毒同时及染毒后不同时间腹腔注射SF,分别测定染毒后8、24、48、72 h时点的大鼠血浆和肺组织匀浆中的肿瘤坏死因子(TNF-α)及内皮素(ET)含量,并观察肺组织结构变化.结果与正常对照组相比,大鼠染毒后8 h血浆TNF-α、ET含量及肺组织中的ET含量明显升高(P＜0.01),中毒后24 h肺组织中的TNF-α含量开始显著升高(P＜0.01),并持续升高至染毒后72 h,其中血浆TNF-α含量于染毒后48 h达峰值.给予SF治疗后与相应的中毒组比较,SF治疗8 h后血浆和肺组织中ET含量显著降低(P＜0.05),24 h后血浆和肺组织中TNF-α含量开始明显降低(P＜0.05).肺组织病理学检查可见PQ中毒后肺泡壁增厚、血管扩张、充血,巨噬细胞浸润,肺泡腔内有大量浆液渗出;SF治疗后肺泡壁毛细血管扩张、充血减轻,肺泡腔浆液性渗出明显减少.结论SF对急性PQ中毒有治疗作用,其作用机制与抑制介导PQ中毒后大鼠急性肺损伤的TNF-α因子及ET有关.
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结缔组织生长因子在百草枯致肺纤维化中的作用
目的 研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在百草枯中毒致肺纤维化发生发展中的作用.方法 于南京大学医学院实验室完成实验,48只雄性SD大鼠随机(随机数字法)分为两组,实验组接受单次腹腔注射百草枯(30 mg/kg),对照组注射等量生理盐水.分别在第7、14和28天后取下大鼠左肺,进行HE染色、Masson染色及测定羟脯氨酸含量来检测胶原蛋白的表达,评估肺纤维化发生及严重程度,Western-blot及免疫组化检测CTGF的表达.将MRC-5人肺成纤维细胞暴露于不同浓度的百草枯(50～500μmol/L)3 d,Western-blot观察CTGF表达情况;用不同浓度CTGF处理MRC-5细胞,分别用CCK-8、Transwell技术观察其增殖及迁移,并用Western-blot验证肌成纤维细胞分化.采用SPSS 18.0进行数据统计.结果 PQ给药后2周,肺组织切片显示肺泡壁显著增厚并出现具有成纤维特征的间质细胞的积聚.Masson染色显示胶原沉积成斑片状分布,提示肺纤维化形成.Western-Blot和免疫组化证明实验组大鼠CTGF表达显著上调(P<0.01).同样,不同浓度PQ处理的MRC-5细胞CTGF表达增加(P<0.01),具有剂量依赖性,浓度越高CTGF表达增加.此外,CTGF可促进MRC-5细胞的增殖和迁移(P<0.01),并诱导其分化为肌成纤维细胞.结论 PQ可引起CTGF的表达增加,诱导肺成纤维细胞的增殖、迁移和分化.CTGF可能在PQ诱导的肺纤维化中起重要作用,有望成为潜在的药物靶点.
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WIN55212-2对百草枯中毒小鼠肺损伤的保护作用
目的 探讨大麻素受体激动剂WIN55212-2对百草枯(paraquat,PQ)中毒模型小鼠肺损伤的保护作用.方法 健康成年雄性C57BL/6小鼠35只,随机(随机数字法)分为4组:百草枯中毒组(PQ组,n=10),PQ+WIN55212-21 mg干预组(WIN 1 mg组,n=10),PQ+WIN55212-22 mg干预组(WIN 2 mg组,n=10),对照组(control组,n=5).PQ组、WIN 1 mg组、WIN 2 mg组建立百草枯中毒模型,于实验第1天和第3天腹腔注射PQ 20 mg/kg.WIN 1 mg组和WIN 2 mg组分别于PQ染毒前1 h按1 mg/kg和2 mg/kg的浓度经腹腔注射WIN55212-2(含Tween 80助溶剂),PQ组和control组注射等容量的生理盐水和Tween 80液.从第2周开始,干预药物每周注射两次.急性期(14 d)随机处死PQ组、WIN 1 mg组、WIN 2 mg组各5只小鼠,对照组处死3只,取血标本,离心得血浆,取肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)和肺组织.剩余存活小鼠均在28 d时处死,再次留取上述组织标本.肺组织行HE染色、Masson染色,观察PQ中毒后小鼠的肺组织变化.酶联免疫吸附法(ELISA)测定急性期小鼠血浆和BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)及慢性期血浆和BALF中TNF-α 和转化生长因子 β(TGF-β)的含量变化.结果 急性期:PQ组、WIN 1 mg组、WIN 2 mg组小鼠肺组织病理切片均呈现弥漫性炎症,予WIN55212-2干预后炎症有所改善,尤以WIN 1 mg组更为明显.PQ组、WIN 1 mg组、WIN 2 mg组,对照组BALF中IL-6水平(U/L)分别为1024.77±124.74、620.48±99.76、823.29±157.88、180.42±20.22;WIN 1 mg组和WIN 2 mg组均较PQ组下降,且差异有统计学意义(P=0.021,P=0.016),但两干预组间差异无统计学意义(P=0.114).急性期BALF和血浆中TNF-α 水平与上述情况相似.慢性期:PQ组、WIN 1 mg组、WIN 2 mg组小鼠肺组织HE及Masson染色可见明显纤维化,予WIN55212-2干预后可见炎症情况有所改善,以WIN 1 mg组更为明显.慢性期PQ组、WIN 1 mg组、WIN 2 mg组小鼠BALF中TNF-α 水平(U/L)分别为321.64±50.54、260.23±48.19、278.89±29.40、89.76±10.87,WIN 1 mg组与对照组及WIN 2 mg组间差异有统计学意义.相似的情况可见于慢性期血浆TNF-α,但TGF-β 未见这种差异.结论 小剂量WIN55212-2可以改善PQ中毒小鼠的一般状况,降低PQ中毒小鼠炎症和纤维化相关细胞因子水平,WIN55212-2可能对百草枯中毒模型小鼠肺损伤具有保护作用.
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乌司他丁减轻百草枯致兔心肌氧化应激损伤
目的 观察乌司他丁(UTI)对于百草枯(PQ)所致心肌损伤过程中自身抗氧化组分的影响,探讨UTI对PQ所致心肌氧化应激损伤有无保护作用及其机制.方法 30只日本大耳白兔随机(随机数字法)分配至5组:A组,空白对照；B、C、D、E组均通过腹腔注射总剂量为30mg/kg百草枯,C、D、E三组分别应用15 000、30 000、50000 U/ (kg·d)剂量静脉注射UTI干预7d,后于麻醉中取动物左心室,行HE染色及4-HNE免疫组化染色,用碱水解法测定心肌组织羟脯氨酸(HYP)含量,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转化生长因子β1 (TGF-β1)、脂联素(adiponectin)、过氧化物酶体增殖激素型受体α(PPAR-α)、依赖AMP激活型蛋白激酶β1(AMPK-β1)、解偶联蛋白1(UCP-1)转录水平.组间数据比较采用成组t检验,多组间采用One-Way ANOVA；两组及多组间等级资料分别用Mann-Whitney U检验及Kruskal Wallis秩和检验；UTI剂量与抗氧化组分转录水平间的关联性采用Spearman秩相关分析.结果 与A组相比,B组左室心肌细胞肿胀、纤维排列紊乱,4-HNE评分升至(2.37±0.49),P=0.001; HYP含量及TGF-β1水平显著增高(均P=0.001).与B组相比,应用UTI三组心肌纤维排列趋于正常,D、E两组4-HNE评分降低至(1.83±0.53)、(1.70±0.47),均P=0.001;组织HYP含量降至(3.51±0.39) μg/mg及(3.29 ±0.37) μg/mg,显著低于B组(P =0.002; P=0.001),TGF-β1 mRNA水平同样显著降低(均P =0.001).Adiponectin、PPAR-α、AMPK-β1及UCP-1 mRNA在E组心肌中水平均高于B组.Spearman秩相关分析表明UTI剂量与adiponectin、PPAR-α、AMPK-β1及UCP-1mRNA水平间存在显著关联性.结论 UTI具有减轻PQ致心肌氧化应激损伤,这一作用与上调自身抗氧化系统组分有关.
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百草枯中毒急性肺损伤TNF-α的表达及大黄保护作用的机制
目的 观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在百草枯(PQ)中毒人鼠急性肺损伤中的表达,探讨大黄可能的作用机制.方法 PQ 50 mg/kg灌胃染毒制作PQ中毒Spragne-Dawley(SD)大鼠急性肺损伤模型.144只SD大鼠随机分为:空白对照组(A组,n=24),染毒组(B组,n=48),大黄组(C组,n=48)和空白十预组(D组,n=24).PQ(50 mg/kg)染毒,15 min内牛大黄(300 mg/kg·d)灌胃十预.血球记数板记数肺泡灌洗液巾中性粒细胞和细胞总数,Lowry法测定蛋白含量,计算中性粒细胞百分比及肺泡通透指数.取左肺HE染色脱察组织病理变化,免疫组织化学法检测TNF-α的表达.计量资料以均值±标准筹(x±s)表示,绀问单冈素方差分析,两两组间比较采用q检验,结果以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 与A组相比,B组肺组织充血、水肿,炎性细胞浸润,少数见纤维化改变,肺泡灌洗液中性粒细胞比、蛋白含量及肺泡通透指数显著增高(P＜0.01);TNF-α染毒12 h表达明显增加,免疫组织化学评分(IHS)升高,1 d达高峰,差异有统计学意义(P＜0.05).之后维持较高水平,减轻趋势平缓.C组病理改变减轻,TNF-α亦呈阳性表达,IHS升高,但与B组相比,表达延迟,升幅减低,减弱趋势明显,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 抑制TNF-α的表达,减轻炎症反应,可能是大黄减轻PQ中毒人鼠急性肺损伤的有效途径之一.
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急性百草枯中毒大鼠肺组织MMP-2和TIMP-1的基因表达
目的 利用实时荧光定量PCR法测定急性百草枯中毒大鼠肺组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶组织因子抑制剂-1(TIMP-1)基因的表达,探讨其在急性百草枯中毒所致的大鼠急性肺损伤及纤维化中的作用.方法 80只SD大鼠,随机分为对照组(n:8)、染毒组(n:72);对照组一次性腹腔注射与染毒组等体积的生理盐水,染毒组一次性腹腔注射百草枯溶液(18mg/kg)染毒;分别于1、3、5、7、14、28 d光镜下观察两组大鼠的肺组织病理变化,同时利用实时荧光定量PCR法动态测定MMP-2、TIMP-1的mRNA表达量.结果 与对照组相比,染毒组大鼠早期主要表现为肺脏的急性炎症反应,肺水肿和出血明显,染毒5 d后观察到肺纤维化变化,第28天纤维化明显;染毒组肺组织中的MMP-2的mRNA表达较对照组从第1天开始即明显增强,第7天达到高峰,为对照组的2.83倍,以后逐渐下降,但28 d时仍高于对照组,差异无统计学意义(P<0.01);TIMP-1的mRNA表达第1天也明显高于对照组,逐渐增强至14 d达到峰值,为对照组的7.28倍,后开始缓慢下降,28 d时仍明显高于对照组(P<0.01).结论 MMP-2、TIMP-1在急性百草枯中毒所致的急性肺损伤中起了重要的作用,同时大鼠的肺纤维化进程与MMPs/TIMPs的基因表达比例失调有很大的关系.
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中药注射液血必净联合激素防治鼠百草枯中毒后的肺损伤
目的 探讨中药注射液血必净联合激素对大鼠百草枯中毒急性慢性肺损伤的防治作用及可能机制.方法 雄性Wistar大鼠120只平均随机分六组,每组20只:正常组(A),中毒组(B),治疗组(C,D,E,F).除A组予等量生理盐水外,其余各组予20%百草枯(PQ)100 mg/kg腹腔汴射(ip)染毒2 h后,C,D,E,F组分别予血必净(1.25 g/kg)、血必净(2.5 g/kg)、地塞米松(25 mg/kg)、血必净(2.5g/kg)+地塞米松(25 me/kg),ip,A,B组予等量生理盐水治疗,1次/d,至处死,而28 d处死者治疗7 d.观察各组大鼠反应,丁染毒后2,3,4 d每组每大各处死5只,检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及3 d动脉血气、肺系数;于28 d处死剩余鼠,测定肺匀浆羟脯氨酸(HYP)、血清TCF-β1.A,B,F组行3 d,28 d肺病理检查.结果 治疗组巾毒症状较B组轻,F绀轻;各治疗组不同时间点SOD,MDA及血气,TGF-β1,HYP较B组佳,治疗组巾F组佳,其中B,F组的3 d时的SOD,MDA及28 d时的HYP,TGF-β1分别为(37.47±13.00)nmol/mL,(91.86±21.35)nmol/mL;(11.34±3.07)nmol/mL,(5.63±1.58)nmol/mL;(2.54±0.63,1.32±0.07)mg/g;(484.13±63.79,202.22±49.83)pg/mL,差异均具有统计学意义(P＜0.05).肺病理显示F组急性期肺出血、肺实变及慢性期肺纤维均较B组轻.结论 血必净联合激素于中毒早期有较强清除氧自由基、抑制脂质过氧化反应的能力,可以减轻急性肺出血、肺水肿;晚期通过抑制TGF-β1分泌和HYP的合成,减轻慢性肺纤维化.
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服毒-血液灌流时间对急性百草枯中毒患者预后的影响
目的 探讨服毒-血液灌流(HP)时间对急性百草枯中毒患者预后的关系.方法 对2009年1月至2012年12月期间中国医科大学附属第一医院急诊监护室(EICU)收治的进行HP治疗的急性百草枯中毒患者的临床资料进行回顾性分析,按照患者服毒后HP开始的时间将患者分为3组,A组:服毒-HP时间＜4h;B组:4h≤服毒-HP时间＜8h;C组:8h≤服毒-HP时间＜12h,比较各组患者的脏器损伤情况、病死率和死亡患者的存活时间等,分析服毒-HP时间对患者预后的影响.结果 共有303例急性百草枯中毒患者纳入本研究,男117例,女186例,年龄15～72岁,(34.8±10.8)岁,口服20％百草枯农药剂量10 ～270 mL,50mL (45 mL) [M (IQR)].服毒24 h内接受HP 2 ～5次,(3.6±1.2)次.经随访28 d死亡208例,病死率68.6％.入选患者服毒至首次HP时间1.4～11.5 h,6.6h (3.5h) [M (IQR)],其中死亡患者为3.1～11.5 h,7.2h (2.4h) [M (IQR)],存活患者为1.4～7.5 h,4.9 h(1.5 h)[M (IQR)],死亡患者服毒至首次HP时间与存活组比较,差异有统计学意义(U=2.014,P=0.043).A组85例,B组141例,C组77例,三组患者28 d病死率比较,差异有统计学意义(x2=9.27,P=0.009).三组中死亡患者中毒后平均存活时间的差异有统计学意义(F =3.31,P=0.038),患者开始HP时间与死亡患者存活时间呈负相关(r2 =0.421,P=0.045).三组患者间进行比较,代表肝、肾、胰腺、肺损伤严重程度的指标如ALTmax、SCrmax、AMYmax和PaO2min在各组之间比较差异有统计学意义(P＜0.05),发生急性肺损伤的时间和PaO2min出现时间在各组间比较差异有统计学意义(F=3.22、3.15,P=0.041、0.044).结论 口服百草枯农药中毒后4h之内进行HP能够减轻靶器官损伤程度,降低患者病死率.
