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HIV-1跨膜蛋白gp41的截短及表达
将HIV-1跨膜蛋白gp41进行截短,在大肠杆菌中进行表达并纯化.PCR扩增gp41的部分编码基因,回收的PCR产物纯化后克隆到连接载体pGEM-T上,然后用EcoR I和Sa1 I切下目的基因,并构建到表达载体pGEX-4T3上,导入宿主细胞BL21(DE3),用IPTG诱导表达,表达产物用亲和层析进行纯化并作相应鉴定.截短的HIV-1跨膜蛋白gp41能直接在大肠杆菌内进行表达,利用亲和层析能方便地将目的蛋白进行纯化,为跨膜蛋白的进一步应用打下基础.
关键词: 人类免疫缺陷病毒1型 跨膜蛋白 截短 基因表达 -
FXYD蛋白与肿瘤
FXYD(苯丙氨酸-X-酪氨酸.天冬氨酸,根据其氨基酸代码简写为FXYD)蛋白家族是新近发现的一组与细胞膜的离子转运有关的小分子单跨膜蛋白,具有离子通道或离子通道调节作用,并与Na+-K+-ATP酶的结构功能密切相关.近期研究发现FXYD蛋白在肿瘤的发病机制中发挥重要作用,现就该蛋白家族及其对肿瘤作用的研究进展综述如下.
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肿瘤坏死因子-α转换酶的研究进展
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)由活化的单核细胞及巨噬细胞分泌,在组织受到损伤或感染时,TNF-α介导炎性细胞的聚集与活化.研究表明,TNF-α参与了多种疾病的病理过程,如脂多糖诱导的脓毒性休克、关节炎、胸膜炎、恶病质、Crohn病、炎症性肠病、自发性神经炎、神经源性疼痛等.TNF-α有两种形式:其一为全长Ⅱ型膜结合形式(相对分子质量为26 000),其二为可溶形式,即在某种蛋白分解酶的作用下从细胞表面释放的活性C-末端部分(相对分子质量为17 000).人们推测可能存在裂解释放TNF-α的蛋白酶,使之从细胞膜上脱落(shedding).1997年由Black等[1]和Moss等[2]两个独立的小组同时分离、纯化这种蛋白质并且克隆了该酶的cDNA序列,称为TNF-α转换酶(tumor necrosis factor α conveting enzyme,TACE),它是一个膜锚定的锌离子金属蛋白酶,为去整合素和金属蛋白酶(a disintegrin and metalloprotase,ADAM)家族成员之一,又名ADAM17,是第一个被鉴定出来的跨膜蛋白的脱落酶(sheddase).