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微囊化转VEGF基因成肌细胞在全厚皮片移植中的动物实验研究
目的 观察应用微囊化转VEGF基因成肌细胞与生理盐水对照的条件下,对提高大鼠全厚皮片移植成活率的差异性.方法 ①将应用pcDNA6/HisA-VEGF 质粒转染的成肌细胞进行微囊化;②筛选2016年1月购自吉林大学实验动物中心健康Wistar大鼠50只,进行标记序号,随机化分成微囊化组(A组)和对照组(B组),每组25只,背部剃毛,标记范围约4.0 cm×4.0 cm的范围,按标记范围切取制备全厚皮片,在切取皮片后的创面上,微囊化组给予多点注射转VEGF基因成肌细胞混悬液,每点0.1 mL,间隔1.0 cm,对照组给予等量生理盐水注射,然后将全厚皮片原位回植,打包包扎,放回笼中单笼饲养;③14 d后进行观察并摄影;④应用Image pro 5.0软件分别进行测算成活面积百分比;⑤进行统计分析,以观察两组间差异性及微囊化组的治疗作用.结果 经统计分析,微囊化组的成活面积与对照组相比较,微囊化组成活面积(14.1±0.61)cm2,对照组成活面积(13.5± 0.55)cm2,微囊化组成活面积百分比(88.0±3.6)%,对照组成活面积百分比(84.5±3.5)%.两组间差异有统计学意义(P<0.01),微囊化组全厚皮片移植的成活面积明显高于对照组(P<0.05).结论 微囊化转VEGF基因成肌细胞在全厚皮片移植受区创面多点注射,能显著提高全厚皮片移植的成活率.
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高效液相色谱法测定保健食品中微囊化β-胡萝卜素
β-胡萝卜素(β-carotene)常用的分析方法有柱色谱法、纸色谱法、薄层色谱法、分光光度法[1]及高效液相色潜法[2].但目前部分保健食品为改善该物质的物理性质、缓释控释、改善稳定性、屏蔽味道和气味等诸多原因,将β-胡萝卜素原料微囊化[3],给目标物的提取和测定带来一定难度.
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微囊化施万细胞异种移植对大鼠脊髓损伤修复的影响
在无菌条件下取日本大耳兔坐骨神经,经胰酶消化、低速离心后制成细胞悬液,置RPWⅠ 1640培养基中培养,差速贴壁法分离纯化.倒置显微镜下观察,免疫组织化学检测S-100、NGF,证实为施万细胞.
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微囊化肝细胞移植进展
肝细胞分离技术日趋成熟,肝细胞移植成为较热门的研究领域,但供体短缺和免疫排斥反应,制约了其广泛应用.微囊技术的进步,解决了这一矛盾.
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生长因子微囊化缓释制剂研究进展
生长因子是由多种细胞分泌的通过细胞间信号传递影响细胞活动的一类多功能调节肽,具有调节细胞分裂、增殖、迁移及其基因表达等重要功能[1].
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现代中药制剂技术概述
中药制剂是在中医理论指导下,以中药材为原料,加工制成各种剂型的制剂.近20年来,随着现代药剂学及有关药学科学的发展,新研究手段及现代技术应用于中药制剂的研究和生产,使中药制剂突破了常规制剂的传统观念.中药制剂的设计在保证安全、有效、实用的基础上,正朝向定量、定时、定位的研究方向发展.
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两种微囊化大鼠胰岛异种移植于糖尿病小鼠的疗效比较
目的将大鼠胰岛分别用两种不同的免疫隔离材料微囊化移植到糖尿病小鼠肾包膜下,对它们的疗效进行比较.方法尾静脉注射3%链脲佐菌素建立小鼠糖尿病模型.成模小鼠随机分为4组:海藻酸钡微囊化胰岛移植组、琼脂糖-聚苯乙烯磺酸微囊化胰岛移植组、未微囊化胰岛移植组和空白对照组,每只小鼠肾包膜下植入300个相应大鼠胰岛.结果4组糖尿病小鼠移植前血糖水平无显著差异,移植后1周分别为:海藻酸钡微囊化胰岛移植组(7.26±1.56)mmol/L、琼脂糖-聚苯乙烯磺酸微囊化胰岛移植组(7.14±1.04)mmiol/L、未微囊化胰岛移植组(7.42±1.52)mmol/L、空白对照组(22.54±L 24)mmo1/L,前2组与后2组相比有显著性差异,生存期也明显长于后2组;海藻酸钡微囊化移植组维持正常血糖时间及生存期(分别为76 d和92 d)明显长于琼脂糖微囊化移植组(分别为41 d和56 d).结论用海藻酸钡和琼脂糖-聚苯乙烯磺酸制备的微囊化大鼠胰岛均可存活于糖尿病小鼠体内并发挥生物功能,海藻酸钡微囊优于琼脂糖-聚苯乙烯磺酸.
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微囊内残余海藻酸钠对微囊化大鼠肝细胞功能的影响
生物人工肝治疗急性肝功能衰竭简单方便[1-6],其中确保肝细胞的功能是关键[7-12].采用海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化技术包被肝细胞既能阻隔免疫反应,囊内细胞呈球状生长符合肝细胞的生长状态[13,14],是人工肝有应用前景的细胞之一.但微囊内残余海藻酸钠在成囊后不能很快排出,对肝细胞功能的影响研究较少,故进行探讨.
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大鼠胰岛细胞与睾丸支持细胞联合微囊化的体外功能研究
将大鼠胰岛细胞和Sertoli细胞联合微囊化后培养11天,胰岛细胞和Sertoli联合微囊化组的胰岛功能明显好于胰岛Sertoli细胞分别微囊化的共同培养组及胰岛单独微囊组(P＜0.05).
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猪胰岛细胞微囊化后腹腔移植治疗小鼠糖尿病
目的 探讨猪胰岛细胞微囊化后腹腔移植治疗小鼠糖尿病的效果.方法 采用胶原酶灌注消化法及不连续密度梯度离心法分离并纯化成体猪胰岛,并用海藻酸钠、多聚赖氨酸对猪胰岛进行微囊化.双硫腙(DTZ)染色观察分离胰岛纯度,葡萄糖刺激胰岛素释放实验检测纯化胰岛和微囊化胰岛体外功能.利用链脲佐菌素(STZ)200 mg/kg腹腔内注射,制作BALB/c小鼠1型糖尿病动物模型.成模后动物随机分为3组:猪胰岛微囊组、空微囊组和生理盐水对照组.每只小鼠腹腔内分别移植500个相应胰岛,检测移植前后小鼠的血糖变化.采用单因素方差分析法进行统计分析.结果 不连续密度梯度离心纯化后,得到胰岛的纯度为＞90％;碘化丙啶/双醋酸荧光素(PI/FDA)染色后,测定胰岛的活力为＞90％;葡萄糖刺激胰岛素分泌检测,分离纯化的胰岛和微囊化胰岛的刺激指数均＞2.0;将微囊化胰岛移植到STZ诱导的糖尿病小鼠腹腔内,能够使小鼠血糖恢复并维持正常超过60 d(＜9.3 mmol/L).与空囊移植组和生理盐水对照组比较,血糖为正常水平的控制时间明显延长(F=13.587,P＜0.05).病理学检查发现,微囊内胰岛形态基本完整,胰岛素染色为阳性.结论 微囊化胰岛腹腔移植后,能有效降低小鼠血糖,微囊具有较好的免疫隔离作用.
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局部应用缓释免疫抑制剂对胰岛细胞移植的影响
目的 探索局部应用免疫抑制剂对提高移植胰岛细胞的存活率及改善全身不良反应的影响.方法 造模:将链脲霉素按200 mg/kg注射到昆明小鼠腹腔内,48、72 h后测血糖,连续测两次≥20 mol/L作为实验动物糖尿病型.腹腔内移植入胰岛细胞的量为8 000 IE/kg,环孢素用量为1.5 mg/(100 g·d).实验分3组:(1)经胃灌注免疫抑制剂与腹腔内注射微囊化胰岛细胞;(2)单纯腹腔内注射微囊化胰岛细胞;(3)腹腔内注射载有免疫抑制剂的微囊化的活性炭颗粒与微囊化的胰岛细胞.检测移植后大鼠的血糖及病理的变化.结果 1组与3组血糖变化差异无统计学意义(P＞0.05),与2组相比(P＞0.05)差异无统计学意义.局部应用免疫制剂后,胰岛细胞作用时间较对照组长,胰岛周嗣纤维化程度较轻,C肽水平明显高于单纯移植组.结论 与经胃灌注应用免疫抑制相比,局部应用缓慢释放免疫抑制剂的活性碳颗粒效果与之相当,但后者可延长移植胰岛细胞的作用时间并可减轻局部反应.
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微囊化新生猪胰岛细胞异种移植生物相容性和疗效的研究
目的：研究微囊化新生猪胰岛细胞异种移植影响生物相容性的因素以及对1型糖尿病的疗效。方法：注射链脲霉素诱发糖尿病大鼠模型后，将不同组微囊化新生猪胰岛细胞、未微囊化新生猪胰岛细胞及空微囊，经腹腔植入1型糖尿病大鼠体内，移植后不应用任何免疫抑制剂，测量移植后大鼠血糖、体重、胰岛素C肽的变化。结果：移植后6～8周实验组、对照组3糖尿病大鼠血糖、体重逐渐恢复正常水平；移植后实验组、对照组1、2、3血清C肽水平升高，对葡萄糖刺激实验反应明显；胰岛素释放试验显示葡萄糖可刺激胰岛细胞释放胰岛素实验组与对照组比较有统计学意义（ p＜0．01）。结论：微囊周围细胞过度增生是导致移植物功能丧失的主要原因；微囊化新生猪胰岛细胞可以纠正糖尿病大鼠高血糖状态，在体内可以生长、分化，并增加胰岛素分泌水平。
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微囊化同种异体骨髓间充质干细胞移植预防兔椎间盘退变的实验研究
目的:探讨超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide,SPIO)磁粒子标记的微囊化同种异体骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,bMMSCs)移植预防椎间盘退变的可行性.方法:选用60只健康新西兰大白兔.随机平均分为A、B、C、D、E 5组,每组12只.A、B、C、D组应用髓核抽吸法制作L2/3、L3/4、L4/5椎间盘退变模型,取同种异体兔bMMSCs行体外培养,并在体外纯化扩增,用SHO标记后行微囊化,于造模手术当时植入(A组)兔手术节段椎间盘内;B组植入未微囊化bMMSCs;C组移植空微囊;D组仅制作模型,不移植;E组为正常对照组.分别于建模后2、4、6、8周时用MRI扫描对标记干细胞在椎间盘内分布进行示踪,并于相应时间点处死动物后取L2/3、L3/4、L4/5髓核组织,用间苯三酚分光光度法测定蛋白多糖含量的变化,免疫组化法测定Ⅱ型胶原含量的变化.所得数据进行统计学分析.结果:bMMSCs能被SPIO有效标记,应用MRI扫描可观察到其在体内的分布,8周时MRI图像与4周时相比,干细胞由注射部位向周边发生了迁徙.建模后2、4、6、8周各时间点.A组髓核中蛋白多糖和Ⅱ型胶原的含量均高于B组、C组和D组,差异有统计学意义(P<0.05);B组均高于C组及D组,差异有统计学意义(P<0.05);各时间点E组与B组、C组及D组相比差异有统计学意义(P<0.05);术后6、8周时A组与E组之间差异无统计学意义(P>0.05);各时间点C组和D组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论:微囊化bMMSCs移植后能恢复兔髓核中细胞外基质含量,其效果优于单纯bMMSCs移植.
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微囊化猪胰岛肝动脉内移植治疗犬Ⅰ型糖尿病
目的观察放射介入方法行微囊化猪胰岛细胞肝动脉肝内移植的可行性及有效性.方法采用放射介入技术经股动脉穿刺将微囊猪胰岛经肝动脉植入糖尿病模型犬肝内,术后监测空腹血糖、C肽、胰岛素用量变化,行肝功能、肝脏组织病理学检查.结果移植后糖尿病犬血清C肽水平升高2～6倍,胰岛素用量逐步减少,3只犬停用胰岛素并维持空腹血糖正常;移植后肝转氨酶一过性升高,2周后降至正常.结论经肝动脉肝内微囊猪胰岛素异种移植治疗移植Ⅰ型糖尿病犬安全、可行.
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微囊化转NGF基因3T3细胞修复大鼠周围神经损伤的实验研究
目的探讨微囊化转NGF基因3T3细胞移植促进神经再生的可行性.方法带有小鼠NGF基因的质粒pcDNA3.1+/NGF经FuGENETM6转染NIH 3T3细胞,用APA(海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠)微胶囊包埋后,进行体外培养,定期检测微囊化细胞活性和NGF分泌量变化.同时,将转基因细胞移植于大鼠坐骨神经切断吻合处,于手术后4、8、12周检测神经再生和功能恢复结果.结果微囊化转NGF基因3T3细胞在体外培养条件下可存活3个月并能稳定表达,移植于损伤坐骨神经的微囊化转NGF基因细胞组再生神经密度大,排列有序,吻合口瘢痕少,单核细胞浸润少,水肿轻,动作电位幅值和传导速度显著增大,坐骨神经功能指数明显升高.结论微囊化转NGF基因3T3细胞移植可显著促进神经再生和降低异体细胞移植免疫反应.
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心房肽cDNA转染细胞微囊化及心房肽近日节律性表达
目的探讨心房肽 (ANP) cDNA转染细胞的微囊化技术, 测定其ANP的表达水平,以及研究ANP分泌的近日节律;通过人工调控,改变ANP分泌的近日节律, 达到有效治疗高血压或心衰的目的.方法将人ANP基因(cDNA)转染入CHO细胞,然后将细胞包被在聚己内酯(PCL)管内形成微囊,并检测转基因CHO细胞长时间存活情况和分泌的ANP.检测微囊化转基因细胞分泌ANP的生物节律,并用褪黑素(melatonin)进行调整.结果在培养期间,长度20 mm直径3 mm的PCL管内转染CHO细胞在2 ml培养基中分泌的ANP水平可达246.1 pg/ml/24 h;ANP的分泌呈近日节律性变化,夜间高,而日间低;近日节律变化的时相是4∶ 18,用melatonin处理,近日节律的时相移至7∶ 56.结论 ANP cDNA转染的CHO细胞包被在PCL管内并能向管外分泌ANP,将来可能适于植入人体.此项研究旨在提供一条心房肽治疗高血压或心衰的新途径.
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微囊化的ANP cDNA转染细胞降低高血压大鼠血压
目的探讨微囊化的转基因细胞表达产生药物活性心房肽(ANP)的治疗体系.方法将人ANP基因(cDNA)转染入CHO细胞,然后将细胞包被在聚己内酯(PCL)管内形成微囊化,并移植到盐敏感高血压鼠腹腔内检测其长时间CHO细胞存活情况和分泌的心房肽(ANP).结果微囊化的转基因细胞植入2 d后,明显的延迟了高血压的发展,此作用至少持续5个月.同时,增加了肾血流,肾小球滤过率,钠排泄,尿液分泌,提高了血浆ANP浓度.结论微囊化的ANP cDNA转染的CHO细胞提供了一种心房肽治疗高血压的新途径.
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汉防己甲素缓释微囊肺靶向给药系统的研究
目的制备肺靶向汉防己甲素缓释微囊，以提高药物降低肺动脉高压的作用并降低其毒性。方法汉防己甲素用喷雾干燥-热变性微囊化，用UV测定汉防己甲素微囊的体外释放特性，用反相高效液相测定小鼠体内分布，经大鼠肺动脉插管测定其压力。结果汉防己甲素微囊外观呈圆球形，带正电荷，载药量37.88%，微囊的体外释药规律符合Higuchi方程。小鼠肺部的药物浓度明显提高，平均滞留时间延长，大鼠肺动脉高压的降压作用从157.1 h延长到223.6 h，体内降压百分数与体外释药百分数之间具有相关性。结论汉防己甲素经喷雾干燥-热变性微囊化可使其高效、低毒地治疗肺动脉高压。
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双歧杆菌微囊肠溶胶囊的制备
目的:制备全封闭的双歧杆菌活菌微囊胶囊.方法:采用胶囊肠溶包衣新技术和微囊化技术,将不同的高分子材料用于制备全封闭的双歧杆菌活菌微囊胶囊.结果:微囊和微囊胶囊在模拟人工胃液(pH 1.5～2.0)中处理4h,活菌数分别保持在27.6%和84.4%以上,而在人工肠液中处理30min,微囊全部溶出,释放出活性菌,释放率达90%以上.微囊胶囊在37℃下保存3个月(相当于常温下1年以上),其中的活菌数仍大于109个·g-1.结论:制备的微囊对活性菌有保护作用,有效地提高了活性菌体的耐酸性能,微囊中的菌体仍保持较高的活性且能在微囊中继续增殖.
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微囊化法制备润肠片及其药效学实验研究
目的 研究润肠片的制备工艺及其润肠通便功效.方法 用微囊化法制备润肠片,考察制剂的形态、片重差异、崩解时限.用肠水分实验、小肠推进实验、排便实验研究了润肠片对在体小鼠肠功能的影响,探讨了润肠片的药理作用.结果 所制制剂为淡黄色片剂,检查符合2010年版中国药典中相关规定.润肠片4g·kg(-1)能极显著增加小鼠肠水分、小肠推进率和排便数(P<0.01),并且作用强于润肠丸(P<0.05).润肠片2g·kg(-1)能极显著增加小鼠肠水分与小肠推进率(P<0.01),显著增加小鼠排便数(P<0.05),并且增加肠水分与小肠推进率的作用强于润肠丸(P<0.05).结论 润肠片具有较润肠丸更显著的润肠通便功效,说明本文设计的润肠片的制备工艺合理、有效.
