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原位杂交检测EBER中常见问题与对策
目的:EB病毒与许多肿瘤性疾病和非肿瘤性疾病相关,在临床检测中经常应用的检测方法有原位杂交检测法、免疫组化检测法、电镜检测法.近年来,随着科技的发展,在EB病毒检测中,EBER原位杂交检测方法已经成为主要的检测方法,该方法具有很强的特异性和灵敏度,同时在使用的过程中也容易受到各种因素的影响.本文结合原位杂交检测的应用流程和失败原因,对其常见问题进行分析,并探讨解决策略,以期为原位杂交检测方法的有效运用提供一定的借鉴.
关键词： EBER原位杂交检测 EBV病毒 问题 对策 -
5-ALA-PDT对两种鼻咽癌细胞EBV-C666-1和CNE2的杀伤效应研究
目的 比较处于不同细胞生长期的EBV-C666-1和CNE2鼻咽癌细胞加入相同浓度5-氨基酮戊酸(5-Aminolevulinic acid,5-ALA)孵育相同时间后,所产生PpⅨ总量的差异以及对PDT的响应情况.方法 通过计数法测定C666-1和CNE2细胞的生长曲线,利用荧光光谱技术检测处于不同生长期的细胞吸收5-ALA所生成的PpⅨ含量,应用激光共聚焦显微技术观察5-ALA-PpⅨ在两种细胞中的亚细胞分布.分别在细胞培养24,48和72 h后,对两株细胞进行光动力(photodynamic therapy,PDT)实验,使用CCK-8(cell counting Kit-8)比色法测定细胞存活率.结果 C666-1细胞中5-ALA-PpⅨ的含量明显低于CNE2细胞.同种细胞在不同生长期吸收5-ALA后所生成的PpⅨ的含量也存在显著差异.5-ALA-PpⅨ主要分布在C666-1细胞的线粒体,而在CNE2细胞中主要分布于细胞膜.相同实验条件下,C666-1细胞在培养24和48 h的PDT实验中,存活率低于CNE2,而在细胞培养72 h后的PDT实验中,存活率高于CNE2.结论 处于不同生长期的C666-1和CNE2细胞吸收5-ALA后所生成的PpⅨ的含量存在显著差异,细胞中PpⅨ的含量和分布是影响PDT疗效的重要因素.
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EBV病毒感染与肿瘤形成
EB(Epstein-Barr)病毒是一疱疹病毒,具有嗜淋巴细胞和上皮细胞的特性.Epstein和Barr于1964年在Burkitt淋巴瘤标本的体外传代细胞中发现此病毒,被命名为Epstein-Barr病毒(EBV).
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不同部位和不同类型恶性淋巴瘤患者EBV感染情况分析
目的 分析不同部位和不同类型恶性淋巴瘤患者EBV感染情况.方法 收集恶性淋巴瘤标本90例,其中鼻腔/鼻咽淋巴瘤30例,肠道淋巴瘤30例,浅表淋巴结淋巴瘤30例.组织病理学诊断为非霍奇金淋巴瘤(NHL)68例,霍奇金淋巴瘤(HL)22例.应用多种抗体标记T淋巴细胞(CD3、CD45RO、CD56)和B淋巴细胞(CD20、CD79α)、免疫组化染色(Supervision二步法).采用EBV寡核苷酸探针(EBER)确定EBV在恶性淋巴瘤细胞中的存在.结果 NHL EBV感染阳性率(42.6%)略高于霍奇金淋巴瘤EBV感染阳性率(27.3%),但差异无显著性意义(P ＞0.05).鼻腔及鼻咽部NHL的EBV感染阳性率(66.7%)高于肠道NHL(23.3%)和浅表淋巴结NHL(25%)(P＜0.05).肠道T细胞淋巴瘤EBV感染阳性率(50%)高于肠道B细胞淋巴瘤EBV感染阳性率(16.7%,P＜0.05).结论 不同类型和部位淋巴瘤患者的EBV感染率存在不同.
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血浆EBV-DNA与淋巴瘤的病理类型及IPI评分的相关性研究
本次研究将210例初次诊断为非霍奇金淋巴瘤的患者,均给以检测血浆中EBV-DNA,随机分成B细胞性淋巴瘤(剔除伯基特淋巴瘤)(70例),T细胞淋巴瘤(70例),NK/T细胞淋巴瘤(70例)三组,分别统计各组中血浆中EBV-DNA的阳性率.比较运用卡方检验,比较这三组EBV感染率.B细胞淋巴瘤EBV-DNA阳性率达21.4%(15/70),T细胞淋巴瘤40.0%(28/70),NK/T细胞淋巴瘤47.4%(33/70).三者比较有统计学差异(P<0.05),同时将210例初治的非霍奇金淋巴瘤的患者分别按IPI评分系统,依次完成IPI评分,并按低危组(0-1分),中危组(2-3分),高危组(4-5分),并分别统计这三组的血浆中的EBV-DNA的感染率,比较发现低危组EBV-DNA阳性率10.2%(8/78),中危组阳性率19.1%(13/70),高危组阳性率48.4%(31/64),三组比较有统计学差异.
