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全柱成像毛细管等电聚焦(iCIEF)技术分析重组人IgG VEGFR:Fc-融合蛋白电荷异质性
目的:建立全柱成像毛细管等电聚焦法(iCIEF)分析重组人IgG VEGFR:Fc-融合蛋白(血管内皮生长因子受体-抗体Fc融合蛋白)的电荷异质性.方法:首先对全柱成像毛细管等电聚焦方法在蛋白浓度、助溶剂、两性电解质、聚焦时间等方面进行了条件优化.并应用优化的方法进行Fc-融合蛋白的电荷异质性及等电点检测及重复性验证,并将结果与毛细管等电聚焦(cIEF)及平板胶等电聚焦(IEF)结果进行对比分析.结果:在优化的实验条件下,分析Fc-融合蛋白的电荷异质性及等电点具有良好的分离度和重复性,分离效果明显好于cIEF和IEF,且主成分的pI重复测定RSD均小于0.5％.结论:iCIEF作为一种新的技术手段,用于重组蛋白类药物电荷异质性及等电点分析,方法快速、准确,重复性好,能够较好地检测高度糖基化的重组VEGFR:Fc-融合蛋白产品的电荷异质性,为保障Fc-融合蛋白类产品生产工艺的稳定性及质量控制提供了一种快速、可靠的分析方法.
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全柱成像毛细管等电聚焦电泳法测定4种生物制品等电点
目的:采用全柱成像毛细管等电聚焦电泳法(WCID-CIEF),测定多肽样品、胰岛素、融合蛋白疫苗和HPV病毒样颗粒的等电点.方法:采用50mm×100 μm石英涂层毛细管.聚焦方法设置:1.5 kV聚焦1 min,3 kV聚焦4 min/8 min;检测波长:280 nm.结果:多肽样品、激素样品胰岛素和融合蛋白疫苗的等电点分别为10.98、5.87和5.86;病毒样颗粒样品HPV 31L1、HPV 33L1、HPV 45L1、HPV 52L1和HPV 58L1的实测等电点分别为8.17、7.86、7.77、7.91和7.69,并且实测等电点与理论等电点基本一致.全柱成像毛细管等电聚焦法测定生物制品专属性和精密度均符合验证要求.结论:该方法可用于生物制品的等电点分析.
