深低温冷冻对同种异体气管移植排斥反应的实验研究

目的探讨深低温冷冻同种异体气管移植细胞凋亡与移植排斥的关系.方法获取兔颈部气管移植组及新鲜气管冷冻保存1个月后行同种异体移植,实验分为冻存气管移植组、自体气管移植组及新鲜气管移植组.于术后第2、7、30天分别取移植气管进行病理学检查,采用脱氧核苷酸原位末端标记法(TUNEL)检测移植气管中的凋亡细胞水平.结果病理学检查显示冻存气管移植组在术后第2、7、30天时与自体气管移植组无明显差异.TUNEL法显示冻存气管移植组于术后第2、7天时,凋亡细胞密度较自体气管移植组高,移植术后30天,与自体气管移植组比较无显著性差异,与新鲜气管移植组比较,有显著差异.结论深低温冷冻保存能降低同种异体移植气管的排斥反应.

人工气管移植的形态学观察

目的 探讨一种能与人体气管愈合融为一体的人工气管.方法 先用异体新鲜(羊)心包,经过0.625%戊二醛处理后,包绕长6 cm Sigma不锈钢丝网支架,制成人工气管.用大动物8只(羊),切除其颈段气管5 cm,用人工气管与离断气管上下端吻合.手术后50 d、90 d、150 d分别行X线片、支气管镜检查,观察人工气管吻合端愈合情况.定期处理人工气管,病理观察吻合口愈合、血运及人工气管内情况,为临床应用提供有力的理论依据.结果 8只实验动物人工气管可见诱导受体气管组织生成气管样组织,填充缺损区.50 d见移植区无明显纤毛柱状上皮,90 d见移植区有部分纤毛柱状上皮覆盖,但气管各层次不完整.150 d见移植区气管各层次比较完整,黏膜层有纤毛柱状上皮覆盖,黏膜下层、外膜等小血管丰富,腺体可见.实验动物可长期存活.结论 人工气管可以诱导受体气管组织生成完整的气管,气管组织各层次比较完整.

气管移植再血管化的研究进展(文献综述)

由于气管本身的解剖学独特性,气管移植具有很大的难度,其面临的主要问题之一就是植入气管的再血管化问题,这也是气管移植难以过渡到临床的主要障碍.本文就近年来在解决气管移植物血供方面的有关措施作一综述.

长段气管替代的临床实践进展

长段气管切除成为治疗大气道病变的良好方法，但气道切除的长度限制其运用较为局限，临床成功移植的个例蕴含了长段气管移植的可行性。但是气管移植后再血管化的程度以及避免移植后的免疫抑制剂的运用都是需要解决的问题[1]。自移植气管以带蒂肌瓣的形式进行气管移植[2]应用于临床，到近来第1例儿童干细胞气管移植手术的完成，气管移植的临床实践仍然处于个案尝试阶段。现对近年来该领域中的临床成功案例和应用前景进行综述如下。

人工气管移植的病理学变化

目的 探讨一种能与受体气管愈合成为一体的人工气管.方法 异体新鲜(羊)心包,经过0.625％成二醛处理后,包绕长6 cm Sigma不锈钢丝网支架,预制成人工气管.实验动物(羊)切除颈段气管5 cm.用人工气管与气管上下断端吻合.手术后50、90、150天行X线片、支气管镜检查,观察人工气管愈合情况.定期获取人工气管组织,观察吻合口愈合、血运及人工气管内情况,为临床应用提供有力的理论依据.结果 8只实验动物人工气管诱导受体气管外组织生成气管样组织,填充缺损区,但必须有足够时间.50天移植区无明显上皮组织；90天移植区有部分纤毛柱状上皮覆盖,气管各层次不完整；150天侈植区气管各层次比较完整,黏膜层有纤毛柱状上皮覆盖,黏膜下层为胶原纤维束、腺体可见,外膜可见胶原纤维和透明软骨.结论 人工气管可以诱导受体气管外组织生成完整的气管,气管各层次比较完整,实验动物可长期存活.

IL-17A对小鼠气管移植后早期气道上皮细胞的影响

目的 通过建立小鼠原位气管移植模型,探讨气管移植早期IL-17A对气道上皮细胞的影响.方法 选取19～ 21 g清洁级雄性C57BL/6小鼠(n=50)和BALB/c小鼠(n=20),供受体按体质量配对后随机分为5组,对照组:正常C57BL/6小鼠(n=10);A组:C57 BL/6(n=10) →C57BL/6(n=10);B组:BALB/c(n=10) →C57 BL/6(n=10);C组:BALB/c(n=5)→C57 BL/6(n=5),注射anti-IL-17A中和抗体;D组:BALB/c(n=5)→C57 BL/6(n=5),注射IgG;A、B组进一步随机分为3天、14天亚组(n=5).术后第3天,采用实时荧光定量PCR技术检测A、B组移植气管中IL-17A mRNAⅡ表达水平,使用流式细胞技术检测气管引流淋巴结中γδ T细胞的比例.术后第14天,分别采用HE、Masson染色,观察各组移植气管组织病理学改变.结果 术后小鼠无死亡.术后第3天,B组移植气管组织中IL-17AmRNA表达水平明显高于A组(P＜0.05);B组小鼠气管引流淋巴结中γδ T细胞占CD3+T细胞的比例明显高于A组(P＜0.05).术后14天移植气管组织病理学检查提示:A组气道纤毛柱状上皮结构完整,黏膜下层无纤维组织增生;B、D组气道上皮由柱状变为扁平状上皮并部分脱落,黏膜下层纤维组织增生明显;C组气道纤毛柱状上皮结构较完整,黏膜下层可见纤维组织增生.4组小鼠气管管腔闭塞率分别为(31.21 +2.82)％、(42.45±2.21)％、(39.04±1.98)％、(40.67±1.54)％,A、B组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IL-17A在气管移植免疫排斥的早期发挥重要作用,并介导气道上皮的损伤.

扫描和透射电镜观察兔气管移植后超微结构变化的研究

移植气管组织中TNF-α的蛋白表达与管腔狭窄相关性研究

目的 探讨移植气管组织中TNF-α蛋白表达与管腔狭窄相关性.方法 建立兔同种异体气管移植模型,测定移植气管的通畅度,免疫组化方法检测移植气管组织中TNF-α的蛋白表达.结果 应用免疫抑制剂,移植物中TNF-α蛋白表达明显下降,管腔轻度狭窄.结论 气管移值后TNF-α促进管腔狭窄.

受体上皮细胞灌注后大鼠气管异位移植再上皮化过程的研究

目的 研究受体上皮细胞灌注后大鼠气管异位移植再上皮化的具体的演进过程.方法 建立大鼠气管异位移植模型后,将实验动物完全随机分为6组,在移植后第3天、第7天、第14天、第21天、第28天、第35天,分别随机处死一组大鼠(n=10),取出移植气管,分切后进行以下检测:组织形态学评价、透射电镜观察、上皮细胞分化鉴定(CK14、CK18和CFTR)、上皮细胞增殖能力检测(Ki67)和上皮细胞纤毛比例测定.结果 在移植后的第3天,气管内壁局部覆盖有无纤毛的扁平上皮细胞；第7天,气管内壁完整覆盖有无纤毛的扁平上皮细胞；第14天,上皮细胞层为扁平细胞和柱状细胞交替；第21天,气管内壁覆盖完整的柱状上皮细胞,偶见刷状缘；第28天,气管内壁覆盖完整的柱状上皮细胞,可见较明显的刷状缘,透射电镜发现假复层结构明显；第35天的表现与第28天相仿.结论 受体上皮细胞灌注后大鼠气管异位移植再上皮化的演进过程为:灌注后细胞迅速附壁,其中成功附壁的上皮细胞开始增殖,进而完整覆盖气管内壁,形成单层扁平上皮组织,而后上皮细胞开始分化,终成为成熟的假复层纤毛柱状上皮组织.

人工气管移植试验研究

目的:探讨一种能与人体气管愈合成为一体的人工气管的制做方法. 方法:选用大动物(羊),切除颈段气管5cm,用异体新鲜组织(羊)制成5cm长的人工气管,与实验动物气管上下端吻合.手术后半个月、一个月、三个月、六个月拍X线片、支气管镜检查,观察人工气管愈合情况.定期观察吻合口愈合、血运及人工气管内情况,为临床人工气管应用提供实验依据. 结果:本组4只实验动物实行人工气管移植,均获成功.结论:通过该方法可使人工气管移植成功,但例数较少,尚需进一步研究,以便早日应用于临床.

异位气管移植模型中上皮细胞的增殖与凋亡

背景:异位气管移植中上皮细胞的变化过程尚不清楚,有研究表明在上皮增殖同时伴随有不可逆的细胞死亡,并且气道上皮再生与死亡发生在移植气道闭塞之前.目的:观察异位鼠气管移植过程中气道上皮细胞的增殖与凋亡情况.方法:将异体BALB/c 小鼠气管植入BALB/c 小鼠颈背部皮下,移植后不注射环孢素A.将BALB/c 小鼠气管植入C57BL/6小鼠颈背部皮下,一组不注射环孢素A,另一组全程腹腔注射环孢素A.移植后第3,7,14,21,30 天苏木精-伊红染色评价气道上皮的完整性、黏膜下炎症细胞浸润和纤维组织增生情况;测定移植气管中BrdU 标记指数及TUNEL 阳性细胞数.结果与结论:受体BALB/c 小鼠移植后第3 天气道上皮细胞轻度损伤丢失,第7～21 天,气道上皮逐渐恢复正常,第30 天,气道上皮接近正常上皮;BrdU 标记指数变化范围为3%～5%;TUNEL 阳性细胞数基本无变化.受体C57BL/6 小鼠移植后第3 天,气道上皮轻度损伤,第7～21 天,气管上皮脱落、坏死,开始出现纤维增殖并逐渐加重,第30 天时,上皮细胞完全消失,管腔被纤维组织填塞,接近闭塞;移植后第14 天,BrdU 标记指数达到高,未注射环孢素A 组高于注射环孢素A 组(P=0.000),移植后第21,30 天,标记指数明显降低;移植后第21 天,未注射环孢素A 组TUNEL 阳性细胞数达到大值,注射环孢素A 组于移植后第14 天达大值.说明异位气管移植上皮增殖同时伴随有不可逆的细胞凋亡,环孢素A 可以减轻闭塞性细支气管炎的发病程度,但并不能阻止其发生.

深低温冻储同种异体气管移植并骨髓间充质干细胞移植后气管上皮细胞血管内皮生长因子的表达

背景:深低温冷冻后的组织可以保持其原有的活力和组织完整性,并能消减抗原性.目的:静脉移植骨髓间充质干细胞合并深低温处理供体气管后进行同种异体气管移植,观察骨髓间充质干细胞在促进上皮再生和再血管化后的作用.方法:用深低温冻储2 周和6 周的气管进行Wistar 大鼠同种异体气管移植后,用PKH-26 标记的3～5 代骨髓间充质干细胞经鼠尾静脉移植入受体内,等量的磷酸盐缓冲液注射作为实验对照.观察供体气管的组织学和血管内皮生长因子蛋白表达.结果和结论:骨髓间充质干细胞移植合并深低温冻储后的移植气管结构完整,软骨无变性坏死;深低温6 周的移植气管上皮再生情况优于2 周.骨髓间充质干细胞移植组的上皮细胞表达血管内皮生长因子水平高于磷酸盐缓冲液对照组.结果提示,骨髓间充质干细胞移植合并深低温冻储6 周后移植气管存活期好于深低温冻储2 周;骨髓间充质干细胞能够促进移植物周围新生血管的增加,从而促进气管损伤的修复.

PKH-26标记骨髓间充质干细胞气管移植的体内示踪

背景:PKH-26已经被成功应用于标记骨髓间充质干细胞并进行体内示踪.目的:通过气管移植合并静脉移植PKH-26标记的骨髓间充质干细胞评价PKH-26的示踪效果,并检测骨髓间充质干细胞在体内向受损组织的迁移情况.方法:用贴壁法进行骨髓间充质干细胞的原代细胞培养,以PKH-26标记3~5代骨髓间充质干细胞经鼠尾静脉移植入气管移植的受体大鼠体内,用等量的PBS注射作为实验对照. 结果与结论:用PKH-26进行细胞骨髓间充质干细胞标记后,荧光显微镜下观察可见几乎所有骨髓间充质干细胞均有红色荧光.移植后8周仍可见受体气管和移植气管处有红色荧光标记.远离吻合口的受体气管基本未见红色荧光标记物.结果表明骨髓间充质干细胞经静脉移植后,可向损伤的气管组织迁移并定植,而且可随移植气管的血管化逐渐由受体气管切缘向移植气管迁移,后可定植于移植段气管.PKH-26的红色荧光标记稳定性高,是可应用于长期观察的无降解的荧光标记物.

闭塞性细支气管炎模型大鼠微小RNA差异表达谱分析

背景：目前对于气管移植后并发闭塞性细支气管炎尚无有效的治疗方法。miRNA分子水平机制的治疗策略在防治器官移植后并发症方面具有重要意义。
　　目的：分析大鼠原位气管移植模拟肺移植后发生闭塞性细支气管炎的微小RNA 表达谱变化。
　　方法：通过近交系大鼠原位气管移植，模拟建立肺移植闭塞性细支气管炎的动物模型并经病理学证实；通过微小 RNA芯片筛选出供体移植气管闭塞性细支气管炎组织中显著差异表达的微小 RNA，并选取差异表达显著的miR-146a、miR-155和miR-451进行相对定量研究，应用实时定量RT-PCR(RT-qPCR)法验证芯片结果的可靠性。
　　结果与结论：原位气管移植后4周经病理检查证实大鼠闭塞性细支气管炎模型成功建立。microarray检测获得29个与闭塞性细支气管炎相关的微小RNA，包括15个微小RNA表达显著上调，14个微小RNA表达显著下调，其中显著上调miR-146a、miR-155和显著下调miR-451的功能涉及免疫炎症反应等。提示微小RNA在肺移植后闭塞性细支气管炎病理进程中发挥着重要的调控作用。

兔人工气管移植后成活时间与C-反应蛋白的相关性

背景：研究证实C-反应蛋白在炎症发生及组织损伤时迅速升高，并能提示炎症反应程度。
　　目的：分析实施带支撑环的聚四氟乙烯人工气管替代实验兔颈段气管后成活时间与C-反应蛋白的相关性。方法：用带支撑环聚四氟乙烯人工气管替代实验兔颈段气管，重建气道，观察实验兔气管移植后生存时间，以及实验兔气管移植后第1-7天血清C-反应蛋白的变化。利用简单线性回归分析二者之间的关系。
　　结果与结论：血清C-反应蛋白水平的变化和实验兔生存时间之间呈简单线性相关。生存时间小于13 d的实验兔C-反应蛋白与气管移植后天数呈正相关升高趋势，而生存时间大于13 d的实验兔C-反应蛋白呈负相关降低趋势。正相关兔和负相关兔中位生存时间及95%可信区间(CI)分别为：10 d(95%CI 8.614-11.386 d)和27 d(95%CI 23.970-30.030 d)。负相关样本的生存率明显高于正相关样本(χ2=29.364，P<0.01)。结果证实实验兔气管移植后生存时间的延长与C-反应蛋白水平的降低有关。

大鼠气管异位移植慢性排斥反应模型的建立及其与白细胞介素17的关系

背景:闭塞性细支气管炎是肺移植远期主要并发症之一,建立稳定可靠的动物模型是研究闭塞性细支气管炎的首要条件.目的:建立大鼠气管异位移植慢性排斥反应模型,探讨白细胞介素17在该模型中的作用.方法:按体质量配对,Wistar和SD大鼠随机分为2组(n=30);Wistar(供体)→SD(受体)组和SD(供体)→SD(受体)组,颈前皮下组织包埋移植气管,不同时间点分别采样行组织病理学分析,对比观察移植气管上皮丢失、淋巴细胞计数、无核软骨细胞/软骨细胞总数及白细胞介素17表达量等指标.结果与结论:两组受体全部存活.移植后第7,14,28天两组淋巴细胞计数对比差异均有显著性意义(P＜0.05);移植后第14,28天两组无核软骨细胞/软骨细胞总数比值相比差异均有显著性意义(P＜0.05);移植后第7,14,28天Wistar供体)→SD(受体)组上皮丢失度分别为＞40％,100％,100％,SD(供体)→SD(受体)组未见明显丢失;移植后第28天Wistar(供体)→SD(受体)组闭塞性细支气管炎发生率为100％,SD(供体)→SD(受体)组未发生闭塞.移植后第28天Wistar(供体)→SD(受体)组白细胞介素17表达量显著高于SD(供体)→SD(受体)组(P＜0.05).以上结果说明实验成功建立了Wistar(供体)→SD(受体)大鼠异位气管移植慢性排斥反应模型,为闭塞性细支气管炎研究提供了平台,白细胞介素17可能在其中发挥重要作用.

深低温冻储对气管移植物树突状细胞的影响

目的探讨深低温冻储对气管移植物树突状细胞的影响.方法将50段Wister 大鼠气管(4个环)随机分为新鲜对照组和深低温冻储组,通过流式细胞技术、免疫组化技术和透射电镜技术,观察树突状细胞冻储前后变化.结果①深低温冻储后气管组织制备的单细胞悬液OX-62FITC标记率和表达量下降,显著低于新鲜对照组(P＜0.000 1).②免疫组化染色结果显示,冻储后气管树突状细胞肿胀、树突远端淡染、细胞分布稀疏.③透射电镜观察,树突状细胞经冻储1个月后出现空泡变性、溶酶体变性、酶活性减弱.结论树突状细胞主要分布于气管上皮及混合腺内,冻储过程损伤气管移植物树突状细胞,造成树突状细胞数量减少和功能下降,这可能是气管移植物冻储后,免疫原性下降的一个重要原因.

去黏膜细胞同种异体气管在犬气管重建中应用的研究

目的 探寻去黏膜细胞异体气管在犬气管重建中的应用价值.方法 应用改良Courtman消化法去除犬异体气管黏膜细胞成分,观察去细胞效果;将去黏膜细胞气管原位移植至宿主犬进行气管缺损重建,观察宿主犬存活情况、气管缩窄程度及组织学变化.以新鲜未处理气管移植作为对照组.结果 实验组宿主犬均存活至90 d处死,未出现明显咳嗽及窒息症状,而对照组宿主犬均于33 d内(平均26.2±5.1 d)因窒息死亡.实验组气管缩窄率(0.27±0.07)×100%明显小于对照组(0.62±0.05)×100%.实验组移植段气管组织学观察管腔内肉芽组织较少,无明显软骨破坏,周围少量淋巴细胞浸润,管腔内壁可见移行的上皮细胞生长.而对照组软骨破坏严重,肉芽组织增生及淋巴细胞浸润情况严重.结论 去黏膜细胞异体气管原位移植修复犬气管缺损,可有效降低宿主犬对移植段气管的免疫排斥反应程度,并获得较长的生存时间及较高的生存质量.

脱细胞气管支架再生上皮化的研究进展

长段的气管缺损往往难以通过传统的外科手段治疗,需要进行气管移植.研究已证实组织工程技术在修复动物和人类气管缺损的能力,脱细胞气管支架因其良好的生物相容性等优点受到广泛的关注.组织工程气管的再生上皮化对于气管移植物有抵御感染,防止再狭窄等重要意义,是目前气管移植的主要难题之一.目前很多研究致力于组织工程气管的再生上皮化研究,但研究成果仍远未达到预期,需要进行更多的研究以确保组织工程气管应用的可行性.

大鼠深低温冻储同种异体气管移植的实验研究

目的 探讨深低温冻储对大鼠同种异体移植气管上皮再生的影响.方法 用深低温冻储2周和6周的大鼠气管进行同种异体气管移植,以自体和异体新鲜气管作为对照,通过观察供体气管的组织学、上皮爬行和再生情况,评价深低温冻储不同时长对移植气管的存活和新生上皮再生的作用.结果 深低温冻储6周后实验组的移植气管复层上皮比自体气管移植组厚度明显变薄或成单层,软骨无变性坏死,未见有单核细胞浸润,长存活达35 d,而深低温冻储2周气管移植大鼠为10 d.结论 深低温冷冻后的组织可以保持其原有的活力和组织完整性,并能消减供体气管的抗原性.冻储6周的移植气管上皮再生和受体的存活率要优于冻储2周组.