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分子医学进展带来的伦理、法律与社会的影响
空前的机遇近20年来,分子医学,尤其是基因组学的飞速发展,使我们关于人类健康与疾病的知识在细胞与分子水平上发生了一场革命.自1995年首先发表了嗜血性感冒杆菌的基因顺序以来,50余个细菌、真菌及寄生虫的基因顺序相继发表.公元2001年,人类基因组的30多亿个碱基对的顺序已基本确定,与此同时生物医学实验研究的主要动物模型-小鼠的基因图也已绘就.基因组学涵盖一系列特异的技术平台,从不同的角度分析基因组及其产物,包括转录子组学,蛋白质组学及调节与代谢机制研究.
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DNA甲基化对干细胞分化的影响及其作用方式
在生物不断进化的过程中,哺乳动物的组织表型高度分化,功能更加特异,其潜在的多能性也被局限化[1].干细胞作为具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体,因其多潜能分化特性在组织再生与修复领域中备受关注[2,3].表观遗传学是指在DNA序列不变的前提下,编码基因顺序改变对基因表达和细胞表型所产生的影响,它主要包括DNA甲基化(methylation)、组蛋白修饰、基因印记以及非编码RNA等内容.DNA甲基化 在干细胞分化调控、维持细胞正常功能、细胞发育、X染色体失活以及基因印记等过程中起着重要作用[4,5].本文主要就DNA甲基化对于干细胞分化的调控作用进行综述,包括DNA甲基化对干细胞分化潜能的影响,DNA甲基化对基因表达的调节方式与调控机制等,为干细胞生物学与再生医学研究提供一定的参考.
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呼吸道合胞病毒感染及反义基因治疗的研究进展
一、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染及治疗现状1.RSV基因结构与蛋白功能:RSV属于副黏病毒科,肺炎病毒属,为非节段性单股负链RNA病毒,含有大约15 000个核苷酸,其基因顺序依次为:3'NS1-NS2-N-P-M-SH-G-F-M2-(M2-1/M2-2)-L-5',共编码11个病毒蛋白[1,2],分别为:核衣壳蛋白N、磷蛋白P、多聚酶亚单位L、转录延长因子M2-1、黏附蛋白G、融合蛋白F、小疏水蛋白SH、非结构蛋白NS1和NS2、基质蛋白M和M2-2.
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自噬相关基因5基因多态性及其单倍体型与帕金森病的相关性研究
目的 探讨自噬相关基因5( Atg5)基因3个标签单核苷酸多态性(Tag SNP,rs17587319C/G、rs573775C/T、rs9486315C/T)及其单倍体型与帕金森病(PD)发病的关系.方法 采用病例-对照研究,PD患者80例(病例组)和健康体检者87例(对照组)为对象,应用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性分析方法(PCR-RFLP)检测Atg5 Tag SNP rs17587319C/G、rs573775C/T、rs9486315C/T,并分析其基因型及等位基因频率在正常人群及PD患者中的分布特点.结果 Atg5 Tag SNP rs17587319C/G的C等位基因频率病例组为89.4％ (143/160),对照组为74.7％(130/174),差异有统计学意义(P＜0.01)；病例组CC基因型频率为78.7％ (63/80),对照组为58.6％(51/87),差异有统计学意义(P＜0.01).SNP rs573775C/T和rs9486315C/T的等位基因频率及基因型频率在两组问的差异无统计学意义(P＞0.05).Logistic回归分析结果SNP rs17587319C/G的CC基因型与PD的发病有独立相关性(P＜0.01).单倍体型分析结果病例组中H1、H2单倍体型的频率高于对照组(P＜0.05和＜0.01).结论 H1,H2单倍体型和Atg5 Tag SNP rs17587319C/G的C等位基因可能是PD的危险因素.
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汉、回、蒙古族MBL基因ExonI54位密码子点突变频率及血浆含量相关性研究
目的:初步调查我国北方地区汉、回、蒙古族健康人群MBL 基因Exon Ⅰ54位密码子点突变的情况,检测其血浆MBL含量,探讨二者的相关性.方法:用PCR-RFLP检测MBL基因点突变频率;用MBL Oligomer ELISA试剂盒测定血浆MBL含量.结果:健康汉族人该基因突变频率0.23,血浆MBL含量均值1.99±1.50mg/L,二者负相关(r=-0.62);回族人突变频率0.15,MBL含量均值3.40±2.55mg/L,二者负相关(r=-0.67);蒙古族人基因突变频率0.18,含量均值2.52±1.95mg/L,二者负相关(r=-0.64).结论:健康汉、回、蒙古族人MBL基因54位密码子点突变频率与其血浆含量均呈负相关.
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儿童青少年双相情感障碍相关基因的生物信息学分析
目的 揭示儿童青少年双相情感障碍(PBD)的发病机制,为PBD的基础研究和临床治疗提供新思路.方法 2018年2—7月,分别以"pediatric bipolar disorder sequencing""youth bipolar disorder sequencing"为关键词,在PubMed检索2014年1月—2018年7月的文献,共获得32篇文献.挑选其中应用全外显子组测序或转录组测序研究且纳入患者例数超过10例的数据集,经检索筛选共得到5套完整数据集,包含4套全外显子组测序研究(去重之后共计包含175个潜在与PBD风险相关的基因)及1套转录组测序研究(包含41个潜在与PBD风险相关的重要基因).去重之后的基因按照不同组学方法分成两组:来自全外显子组测序的175个基因(全外显子组)与来自转录组测序的41个基因(转录组),分别使用生物信息软件DAVID、KEGG、Panther、WebGestalt进行每组基因生物学功能(BP)的富集分析,通过KEGG、Panther数据库计算其所富集的通路.结果 全外显子组基因富集分析结果显示,共得到9个显著富集的BP分类,发生重要影响功能变异基因的主要作用与阴离子跨膜转运、氯离子运输、胚胎发育、神经管发育模式相关,另有少量基因显著富集与肾上腺发育功能相关.转录组基因富集分析结果显示,共得到10个显著富集的BP分类,发生异常表达的基因主要集中在组蛋白泛素化、甲状腺素合成与水解、蛋白折叠、组蛋白修饰等蛋白合成或水解相关的功能.全外显子组基因在KEGG数据库中显著富集的通路主要为肌醇磷酸盐代谢、磷脂酰肌醇信号系统通路;转录组基因在KEGG数据库中显著富集的通路主要为泛素化调控的蛋白水解通路.全外显子组基因在Panther数据库中显著富集的通路主要包括血管生成相关通路与帕金森疾病类通路;转录组基因在Panther数据库中未见显著富集的通路.结论 PBD患者异常突变的PLCD3、DAG1、APLNR、EPAS1等基因与胚胎发育相关,且该类变异属于遗传自父母的胚系突变;PBD患者中异常突变或表达的基因与磷脂酰肌醇信号系统以及血管生成相关.
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遗传咨询中的染色体倒位
染色体倒位属于染色体结构畸变的一种,系指染色体发生两次断裂的片段倒转180度后重新接合,虽然没有遗传物质的丢失,但其基因顺序发生颠倒,故称倒位.倒位的染色体仅涉及它自身的染色体,是染色体平衡重排的常见类型.其实质是遗传物质或遗传信息的增减,可以产生遗传学剂量效应和位置效应,不同程度地影响发育和生殖.我室自1981年8月～1998年12月间对2 672例病人进行了外周血染色体检查,检出染色体倒位携带者48例,检出率为1.79%.
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登革2型病毒NGC株E基因部分序列原核蛋白表达
目的:构建登革2型病毒NGC株E基因区1～476 bp的原核表达载体并进行原核表达.方法:将登革2型病毒NGC株E基因区部分序列克隆入原核表达载体pET28a(+),命名为pET28a(+)-En;经酶切、PCR及测序鉴定后转化BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE、Western印迹鉴定表达蛋白;对表达蛋白进行纯化,并滴定对C6/36细胞的TCID50.结果:(1)成功构建了pET28a(+)-En原核表达重组质粒,SDS-PAGE分析表明,E基因区部分序列获得高效表达,相对分子量约为23 kD,表达量约占菌体总蛋白的29%;Western印迹表明该目的蛋白可与登革2型病毒鼠单克隆抗体结合;(2)用Ni柱亲和层析法纯化原核表达蛋白,纯度达90%;(3)DEN-2 NGC株E基因部分序列原核表达蛋白对C6/36细胞的TCID50为10-4.88/0.1 ml.结论:pET28a(+)-En可在BL21(DE3)菌株中高效表达,DEN-2 NGC株E基因部分序列原核表达蛋白对C6/36细胞有一定的细胞毒作用.
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致倦库蚊Cecropin基因克隆及序列分析
目的:克隆致倦库蚊Cecropins基因序列,并进行生物信息学分析.方法:选取致倦库蚊成虫,提取其DNA并以此为模板,设计一对引物,采用PCR技术扩增出Cecropins基因,应用相关生物信息学软件分析其序列.结果:克隆出致倦库蚊Cecropins基因,并测定其扩增产物序列,经同源对比确认,进行了相关序列分析.结论:获得致倦库蚊Cecropins基因序列,基因长度为259 bp,与尖音库蚊一致性为97%.
关键词： 库蚊属 基因cecropin 基因顺序 -
人幽门螺杆菌HspA亚单位的基因克隆及序列分析
目的:获取幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白A( HspA)亚单位基因并进行核苷酸序列分析和同源性比较.方法:获取幽门螺杆菌的染色体DNA,PCR技术扩增获取HspA基因,将其定向插入pGEX-4T-1原核表达载体中进行核苷酸序列分析.结果:经酶切鉴定及基因序列证实Hp HspA基因克隆成功,DNA序列与Genbank 公布的序列比较有13个碱基存在差异,同源性为96%;由碱基序列推定编码的氨基酸残基序列没有发生变异,同源性为100%.结论:成功地将Hp HspA基因克隆到了pGEX 4T-1原核表达载体,为HspA的表达和研究奠定了实验基础.
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牛带绦虫亚洲亚种核糖体蛋白L10a 基因分析
目的:分析和预测牛带绦虫亚洲亚种成虫核糖体蛋白L10a 基因及其编码蛋白的结构和功能.方法:构建牛带绦虫亚洲亚种成虫cDNA 文库,进行EST测序,将EST序列与GenBank 中登陆的序列进行同源性比对及基因完整性判断;应用NCBI上的BLAST对所筛选基因的保守域进行搜索比对,利用PredictProtein 分析、预测其功能域及二级结构.结果:BLASTX分析该基因为全长基因,全长 698 bp,编码区为24～681,编码218个氨基酸,无跨膜区,具有较稳定的理化性质.结论:从牛带绦虫亚洲亚种成虫cDNA 文库中筛选出核糖体蛋白L10a 基因.
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肝癌相关基因及其表达产物的研究
自1984年顾建人等对原发性肝癌及肝癌7402细胞株DNA转染NIH/3T3所得转化细胞的研究证明存在人N-ras基因顺序以来,肝癌基因研究十分迅速.已证明与肝癌有关的癌基因有N-ras,C-fms,P53,C-myc,IGF-Ⅱ,P16、P15等.
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慢性丙型肝炎患者HCV不同基因片段抗体应答与脂代谢关系
目的:探讨慢性丙肝患者HCV感染与脂质代谢的关系及特点.方法:用酶联免疫法检测实验组慢性丙肝患者HCV不同基因片段抗体,并以羊抗人Apo-B血清分离其Apo-B,用PCR法检测Apo-B 中HCV-RNA,同时作血脂监测.另设健康人和乙肝病例对照.结果:实验组病例HCV不同基因片段抗体呈现6种分布模式,其血清中均检出HCV-RNA较高载量,相应的Apo-B中(除1例阴性外)均有HCV-RNA表达,血清LDL、Apo-B等水平值显著低于对照组.两对照组血清及Apo-B中无HCV-RNA表达,且不同基因片段抗体阴性.结论:慢性丙肝患者HCV不同基因片段抗体应答与HCV复制密切相关,与Apo-B携带密切相关;其HCV-C和HCV-NS4、HCV-NS5与不同组分载脂蛋白相互作用,可能共同干扰脂质代谢.
