首页 > 文献资料
-
双特异性单链抗体治疗骨肉瘤的免疫活性研究
目的:构建能同时特异性靶向人骨肉瘤细胞表面肿瘤相关抗原TP-3及人T细胞表面TCR/CD3复合体CD3ε-链的双特异性单链抗体anti-CD3×anti-TP-3 diabody,对其生物学特性进行研究.方法:通过抗体可变区基因构建表达质粒pKIDCD3×TP-3,继而转染大肠杆菌K12系XL1-Blue株,表达活性抗体diabody,通过固定化金属离子亲和层析法纯化,流式细胞术、蛋白电泳进行特异性及亲和力的测定,并将其与人T细胞、骨肉瘤细胞共同培养,观察其诱导T细胞杀伤肿瘤细胞的活性.结果:diabody纯度高,在人血清中较为稳定,活性强,能够同时特异性地结合人骨肉瘤细胞及人T细胞,且将二者的距离拉近,特异性地溶解靶细胞.结论:双特异性单链抗体diabody能充分诱导人细胞毒T细胞活性,使骨肉瘤细胞溶解.
-
一种特异性靶向性淋巴细胞对荷瘤裸鼠的治疗观察
目的 观察癌胚抗原(CEA)阳性靶向性淋巴细胞对胃癌细胞体内及体外靶向性治疗作用.方法 从健康人外周血中分离单个核细胞(PBMC),通过脂质体lipofectamine 2000介导的细胞转染将重组真核表达载体anti-CEA-scFv-CD3ζ-pcDNA3.0介导的细胞转染导入PBMC,以获取CEA阳性靶向性淋巴细胞(以下简称靶淋巴细胞);将不含anti-CEA-scFv-CD3ζ-pcDNA3.0融合基因片段的pcDNA3.0真核表达载体转染入PBMC,获取的淋巴细胞简称为空载体淋巴细胞.将上述两种淋巴细胞分别与CEA阳性KATOⅢ胃癌细胞和CEA阴性BGC-823胃癌细胞共培养,观察不同靶淋巴细胞与胃癌细胞共培养(24 h或36 h)后的识别情况或其对胃癌细胞凋亡的影响.并将上述已获取的两种淋巴细胞分别通过尾静脉注入荷CEA阳性KATOⅢ胃癌细胞裸鼠和荷CEA阴性BGC-823胃癌细胞裸鼠体内,以观察其对荷胃癌裸鼠肿瘤生长情况的影响.结果 ①靶淋巴细胞与胃癌细胞共培养24 h时,靶淋巴细胞对KATOⅢ胃癌细胞的识别率为72.3％,淋巴细胞对KATOⅢ胃癌细胞的识别能力较强;其对BGC-823胃癌细胞识别率为7.8％,其对BGC-823胃癌细胞识别能力较弱.②当靶淋巴细胞、空载体淋巴细胞分别与KATOⅢ和BGC-823胃癌细胞分别共培养36h时,靶淋巴细胞+KATOⅢ胃癌细胞组的凋亡率明显高于空载体淋巴细胞+KATOⅢ胃癌细胞组(P=0.032),而靶淋巴细胞+BGC-823胃癌细胞组和空载体淋巴细胞+BGC-823胃癌细胞组的凋亡率比较差异无统计学意义(P=0.118).③在观察40 d内,靶淋巴细胞+KATOⅢ胃癌细胞组的肿瘤体积明显小于空载体淋巴细胞+KATOⅢ胃癌细胞组(F=5.010,P＜0.01)和空白对照组(F=7.560,P＜0.01);靶淋巴细胞+BGC-823胃癌细胞组与空载体淋巴细胞+BGC-823胃癌细胞组间比较差异无统计学意义(F=1.210,P＞0.05).靶淋巴细胞+KATOⅢ胃癌细胞组的肿瘤体积明显小于靶淋巴细胞+BGC-823胃癌细胞组(F=4.982,P＜0.01).结论 CEA阳性靶向性淋巴细胞可特异性促进CEA阳性胃癌细胞凋亡,抑制荷CEA阳性胃癌细胞裸鼠肿瘤的生长.
-
嵌合锚定T淋巴细胞对肝癌细胞增殖的阻滞效应
目的 探讨肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)靶向性嵌合锚定T淋巴细胞的制备方法,并检测它对TAG72阳性肝癌细胞增殖的阻滞效应.方法 分离外周血单核细胞(PBMC),然后用免疫磁珠法分离得到CD8+T淋巴细胞.将重组真核表达载体anti-TAG72-scFv-CD28-pcDNA3.0采用脂质体介导的细胞转染和细胞培养,以制备TAG72靶向性的嵌合锚定T淋巴细胞;将嵌合锚定T淋巴细胞与TAG72阳性肝癌细胞SMMC7721共培养,通过流式细胞仪检测肝癌细胞的周期变化,分析嵌合锚定T淋巴细胞对肝癌细胞增殖的抑制效应.结果 TAG72靶向性嵌合锚定T淋巴细胞可识别肝癌细胞SMMC7721;用流式细胞仪检测发现,嵌合锚定T淋巴细胞可引起肝癌细胞SMMC7721的增殖阻滞.结论 TAG72靶向性嵌合锚定T淋巴细胞可特异性识别TAG72阳性肝癌细胞SMMC7721并引起其增殖阻滞.
关键词： 肝癌 肿瘤相关糖蛋白72抗原 单链抗体片段 T淋巴细胞
