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半枝莲总黄酮微丸的制备及含量测定
目的 制备半枝莲总黄酮微丸并建立其含量测定方法.方法 采用挤出滚圆法制备半枝莲总黄酮微丸,采用正交实验法优化佳制备工艺,采用吸光光度法测定半枝莲总黄酮(以野黄芩苷和木犀草素计)含量.结果 按照佳工艺制得的半枝莲总黄酮微丸外形美观,圆整度良好,大小均匀,平均得率为97.06%;半枝莲总黄酮含量以野黄芩苷计5.02mg/g,RSD为1.60%;以木犀草素计2.03mg/g,RSD为0.84%.结论 佳制备工艺稳定可行,所建立的含量测定方法准确可靠,可用于半枝莲总黄酮微丸制备及质量控制.
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基于自噬途径探讨半枝莲总黄酮抑制肿瘤细胞NLRP3炎症小体表达的机制研究
通过研究半枝莲总黄酮(total flavonoids in Scutellaria barbata,TF-SB)对肿瘤细胞自噬以及炎症小体NLRP3的影响,探讨自噬与炎症小体NLRP3激活的关系,为进一步探讨TF-SB的抗肿瘤机制提供实验依据.该研究拟采用人工接种B16-F1细胞株致小鼠黑色素瘤模型,随机均分为模型对照组、阳性对照组(Rap,1.5 mg· kg-1)、TF-SB高、中、低(200,100,50 mg·kg-1)剂量组,另取健康C57BL/6J小黑鼠作为正常组以备血清检测对照,每组10只,每日给药1次,连续2周,末次药后30min处理动物.采用HE染色检测肿瘤组织病理形态学改变;采用Western blot法检测肿瘤组织内LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ以及炎症小体NLRP3,caspase-1,IL-1β,IL-18的蛋白表达水平;采用ELISA法检测血清炎症因子IL-1β,IL-18含量.结果显示:模型组肿瘤细胞呈明显异型性及恶性增殖的特点,阳性对照组及TF-SB各剂量组肿瘤组织向周围侵犯情况明显减轻、肿瘤组织坏死范围明显增大、炎性反应明显减轻.阳性对照组及TF-SB各剂量组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ明显增加,NLRP3,caspase-1,IL-1β,IL-18蛋白表达明显减少.模型组小鼠血清IL-1β,IL-18含量明显升高,与正常对照组比较有极显著性差异(P ＜0.001),阳性对照组及TF-SB各剂量组血清IL-1β,IL-18含量明显减少,上述指标各药物组与模型组比较均有显著性差异(P＜0.05,P＜0.01或P＜0.001).实验结果表明半枝莲总黄酮可通过抑制NLRP3炎症小体的表达、改变肿瘤生长微环境,从而产生抗肿瘤作用,其机制可能与其诱导肿瘤细胞发生自噬有关.
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半枝莲总黄酮通过PI3K/AKT/mTOR通路诱导肿瘤细胞自噬的体内实验研究
该研究拟从体内角度研究半枝莲总黄酮(TF-SB)的抗肿瘤作用,并探讨TF-SB对肿瘤细胞自噬的影响及其对PI3K/AKT/mTOR通路的调控作用,为TF-SB的抗肿瘤作用提供实验依据.实验以黑色素瘤荷瘤小鼠模型为研究对象,分为空白对照组、雷帕霉素组(Rap,1.5 mg·kg-1)、TF-SB高、中、低剂量组(200,100,50mg·kg-1),每天给药1次,连续用药11d,通过测量肿瘤的体积及抑瘤率,来观察TF-SB对黑色素瘤生长的抑制效果;通过TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况,来进一步验证TF-SB的抗肿瘤活性;通过Western blot法检测LC3-Ⅰ,LC3-Ⅱ的蛋白表达,计算LC3-Ⅱ对LC3-Ⅰ的相对表达量,探讨TF-SB对肿瘤细胞自噬的诱导作用;通过检测PI3 K/AKT/mTOR通路标志蛋白的磷酸化水平,研究TF-SB诱导细胞自噬的分子机制.结果表明,TF-SB可有效抑制荷瘤小鼠体内黑色素瘤的生长,减小肿瘤体积、提高抑瘤率,并且可以显著增加肿瘤细胞凋亡指数,增加LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,抑制p-PI3K,p-AKT及p-mTOR的蛋白表达水平,与对照组比较有显著性差异(P＜0.05,P＜0.01或P＜0.001).由此可见,半枝莲总黄酮具有抑制体内黑色素瘤生长的作用,其机制可能与通过抑制PI3 K/AKT/mTOR通路,诱导肿瘤细胞自噬及凋亡有关.
关键词： 半枝莲总黄酮 PI3K/AKT/mTOR通路 自噬 细胞凋亡 -
半枝莲总黄酮抗副流感病毒的作用机制
通过观察半枝莲总黄酮对副流感病毒1型(PIV-1)感染后宿主细胞膜电位、膜Na~+-K~+-ATP酶活性和膜流动性的影响,为揭示半枝莲总黄酮抗病毒作用机制提供实验依据.本研究采用流式细胞仪检测膜电位,定磷法柃测Na~+K~+-ATP酶活性,荧光漂白恢复法检测膜流动性.结果显示,PIV-1感染后宿主细胞膜电位下降,处于超极化状态,荧光强度为42.81±5.65(P<0.05);膜Na~+-K~+-ATP酶活性显著增加,达(11.01±3.93)μmolPi·mg~(-1)(protein)·h~(-1)(P<0.05);扩散系数显著下降为(0.41±0.15)×10~(-9) cm~2·s~(-1)(P<0.05),荧光恢复率为19.85%,明显低于正常对照组.半枝莲总黄酮(3 mg·mL~(-1))作用后,扩散系数和荧光恢复率均明显升高,分别为(0.73±0.10)×10~(-9) cm~2·s~(-1)和54.56%.与病毒对照组比较有显著性差异;而对宿主细胞膜的超极化状态和Na~+-K~+-ATP酶活性没有明显影响.实验结果表明,PIV-1感染后膜电位、Na~+-K~+-ATP酶活性和膜流动性等细胞膜能态和功能的改变,可能为病毒感染的细胞学机制之一;半枝莲总黄酮可能是通过改善细胞膜流动性,维持细胞膜的正常功能来发挥抗病毒感染的作用,而与膜电位和膜Na~+-K~+-ATP酶活性等能态来源的环节无关.
关键词： 半枝莲总黄酮 副流感病毒1型 膜电位 Na~+-K~+-ATP酶活性 膜流动性 -
半枝莲总黄酮对ApoE基因敲除小鼠血清PLTP、IL-6、CRP表达的影响
目的 探讨半枝莲总黄酮对载脂蛋白E基因敲除小鼠AS病变形成早期血脂水平与血清磷脂转运蛋白(PLTP)、Il-6、C反应蛋白(CRP)表达的影响.方法 载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为模型组、辛伐他汀组、银杏叶胶囊组、半枝莲总黄酮高、中、低剂量组,取正常C57BL/6小鼠为对照组,各6只.除模型组、对照组给予等容量羧甲基纤维素钠外,其他各组分别给予阳性对照药与受试药8周.处死小鼠,ELISA法检测血脂、PLTP、IL-6及CRP的表达水平.取主动脉制作切片、HE染色,观察形态学变化.结果 半枝莲总黄酮中、高剂量组TG、TC、LDL-C水平明显低于模型组,高剂量组HDL-C水平高于模型组,半枝莲总黄酮各组PLTP、IL-6、CPR的表达水平较模型组明显降低,有统计学意义.PLTP与IL-6水平呈正相关,与CRP水平呈正相关,IL-6与CRP水平呈正相关.结论 半枝莲总黄酮可通过降低载脂蛋白E基因敲除小鼠TG、TC、LDL-C水平,升高HDL-C水平,降低PLTP、IL-6、CPR水平而发挥抗AS的作用.
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半枝莲总黄酮对反复脑缺血再灌注小鼠脑能量代谢的影响
目的 探讨半枝莲总黄酮对反复脑缺血再灌注小鼠脑能量代谢的影响.方法 将小鼠随机分为6组,采用双侧颈总动脉夹闭,建立反复脑缺血再灌注致学习记忆障碍小鼠模型.测定LD及TchE、LDH、ATP活力.结果 与模型组相比,半枝莲总黄酮中剂量组可显著提高小鼠脑TchE活力(P＜0.01);半枝莲总黄酮大、中剂量组均能显著、明显降低小鼠脑LD含量(P ＜0.01,P＜0.05),半枝莲总黄酮大、中剂量组均可显著、明显提高小鼠脑LDH活力(P ＜0.01,P＜0.05);半枝莲总黄酮大、中剂量组均能显著、明显提高小鼠脑Na+-K+-ATP、Ca2+-Mg2+-ATP、Ca2+-ATP酶活力(P＜0.01,P＜0.05).结论 半枝莲总黄酮对反复脑缺血再灌注小鼠引起的脑神经损伤具有保护作用,机制可能与其减轻脑水肿、改善脑细胞能量代谢有关.
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半枝莲总黄酮对ApoE基因敲除小鼠血脂及抗氧化功能的影响
目的 探讨半枝莲总黄酮对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化病变形成早期血清脂质水平、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)表达的影响.方法 载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为模型组、辛伐他汀组、银杏叶胶囊组和半枝莲总黄酮高、中、低剂量组,取正常C57BL/6小鼠为对照组,每组6只.除模型组、对照组给予等容量羧甲基纤维素钠外,其他各组分别给予阳性对照药与受试药8周.处死小鼠,ELISA法检测血脂水平,黄嘌呤氧化酶法检测SOD活力,硫代巴比妥酸法测定MDA含量,HE染色观察主动脉形态学变化.结果 半枝莲总黄酮中、高剂量组血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平明显低于模型组,高剂量组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平明显高于模型组(P＜0.05或0.01).半枝莲总黄酮3个剂量组的MDA含量较模型组显著减少,SOD活性表达水平较模型组显著升高(均P＜0.01).结论 半枝莲总黄酮可通过降低载脂蛋白E基因敲除小鼠TG、TC、LDL-C水平,升高HDL-C水平,升高SOD活性,降低MDA含量,从而发挥抗动脉粥样硬化的作用.
关键词： 半枝莲总黄酮 载脂蛋白E基因敲除小鼠 血脂 丙二醛 超氧化物歧化酶 -
半枝莲总黄酮对巨噬细胞炎症模型中MAPK信号通路的影响
目的 考察半枝莲总黄酮对巨噬细胞炎症模型中MAPK信号通路的影响.方法 半枝莲醇提物经乙醇提取,乙酸乙酯萃取及大孔树脂梯度洗脱后获得半枝莲总黄酮.LPS刺激巨噬细胞构建炎症模型.Western Blot检测药物对MAPK信号通路的影响.实时定量PCR法及ELISA法分别检测细胞因子的基因表达水平及含量的变化.MTT法检测药物对细胞生长的影响.结果 半枝莲总黄酮能够抑制MAPK信号通路中JNK/SAPK的磷酸化水平,并能降低细胞因子IL-6、IL-1β的含量.结论 初步明确半枝莲总黄酮的抗炎作用机制.
关键词： 丝裂原活化蛋白激酶信号通路 半枝莲总黄酮 炎症 巨噬细胞 -
大孔树脂分离纯化半枝莲总黄酮的研究
目的 研究不同型号大孔树脂纯化半枝莲总黄酮的工艺条件及参数.方法 以静态饱和吸附量、洗脱量、静态洗脱率为考察指标,比较了5种大孔树脂,并对AB-8树脂的动态比上柱量、比吸附量、比洗脱量进行了考察,以总黄酮转移率和纯度为指标对树脂吸附工艺条件进行了筛选.结果 所比较的5种树脂中,AB-8型树脂具有佳的吸附及洗脱参数,其佳工艺是用浓度为3.12 mg·mL-1,pH=2.0的上样液,以3倍柱体积去高于水,12倍柱体积70%乙醇依次洗脱,总黄酮转移率为80%左右,其纯度为60%左右.结论 AB-8树脂综合性能较好,适合于半枝莲中总黄酮的纯化.
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半枝莲总黄酮对延缓秀丽隐杆线虫和人脐静脉内皮细胞衰老的影响
目的 研究半枝莲总黄酮(HF)对延缓秀丽隐杆线虫和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老的影响,并探讨可能的作用机制.方法 将不同浓度的HF(30、50 mg/L)分别放于NGM和DMEM培养基中,研究对线虫的寿命、生殖能力、氧化应激、抗氧化酶活力、相关基因表达以及对HUVECs的抗氧化酶活力和相关基因表达的影响.结果 HF能显著延长线虫的平均寿命和大寿命,对其生殖能力没有损害,子代数目无统计学差异,35℃急性热应激下的平均生存时间显著延长;同时,HF均能提高秀丽线虫和人HUVECs中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶的活性,并上调两种细胞中抗衰老基因daf-16、sir-2.1的表达.结论 HF可能通过提高抗氧化酶活力和抗氧化基因的表达水平,能够延缓线虫衰老及急性热应激下的应激能力同时不损害生殖能力,并保护内皮细胞免受损伤.
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半枝莲总黄酮微丸的制备及含量测定
目的:制备半枝莲总黄酮微丸并建立其含量测定方法.方法:采用挤出滚圆法制备半枝莲总黄酮微丸,采用正交实验法优化佳制备工艺,采用吸光光度法测定半枝莲总黄酮(以野黄芩苷和木犀草素计)含量.结果:按照佳工艺制得的半枝莲总黄酮微丸外形美观,圆整度良好,大小均匀,平均得率为97.06％；半枝莲总黄酮含量以野黄芩苷计5.02 mg/g,RSD为1.60％；以木犀草素计2.03 mg/g,RSD为0.84％.结论:佳制备工艺稳定可行,所建立的含量测定方法准确可靠,可用于半枝莲总黄酮微丸制备及质量控制.
