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抗纤维化短肽Ac-SDKP对Ang Ⅱ诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞分化的调控作用与机制
目的 探讨抗纤维化短肽N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞分化的调控作用与机制.方法 采用AngⅡ诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞分化,并予以缬沙坦、Ac-SDKP和PD98059预处理.免疫组织化学染色法检测E-钙黏蛋白(E-cad)的表达,激光共聚焦扫描显微镜检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)1/2的共定位表达.Western-blot法检测E-cad、α-SMA、Ⅰ型胶原、血管紧张素受体1(AT1)、P-ERK1/2及ERK1/2的定量表达.结果 与对照组比较,Ang Ⅱ刺激组细胞E-cad表达下降,α-SMA、Ⅰ型胶原、AT1和P-ERK1/2的表达增高;而缬沙坦、Ac-SDKP、PD98059预处理后,均降低Ang Ⅱ诱导的A549细胞α-SMA、Ⅰ型胶原、AT1的表达升高及E-cad表达下降(P<0.05).结论 AngⅡ-AT1-ERK1/2通路介导肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞分化,而Ac-SDKP可通过AngⅡ-AT1-ERK1/2通路介导抑制肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞分化.
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肺移植缺血再灌注损伤细胞模型的建立及意义
【目的】在体外模拟临床肺移植，建立起肺移植缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury ，IRI）的细胞模型。【方法】将人肺泡上皮细胞系A549用Perfadex液保存于100％氧气，4℃环境中来模拟缺血过程，缺血时间分为6h、12h、18h、24h，然后加入37℃含10％胎牛血清的DM EM培养基来模拟再灌注过程，再灌注时间为2 h。分别检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）含量，并应用CCK‐8测细胞存活率。【结果】与对照组相比，各时间点试验组M DA、LD H含量逐渐增加，而SOD含量和细胞存活率则逐渐降低。各时间点MDA、LDH、SOD、细胞存活率水平也存在差异。【结论】成功建立了肺移植IRI细胞模型，此模型能够在分子与细胞水平研究肺移植IRI机制。
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早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离纯化、原代培养及鉴定
[目的]建立一套可靠的早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)分离、纯化和培养技术,用于体外研究早产儿肺部疾病.[方法]采用胰酶和胶原酶消化胎龄20d早产鼠肺组织块,经差速离心和反复贴壁法,分离、纯化早产鼠AECⅡ,并进行原代培养.用细胞角化蛋白(cytokeratin)进行二氨基联苯胺(DAB)及荧光免疫细胞化学显色,和透射电镜对所分离的细胞进行鉴定.[结果]AECⅡ体外培养24～48 h,增殖代谢旺盛,进入对数生长期,生长状态佳.cytokeratin在DAB免疫细胞化学及荧光免疫细胞化学中均有表达.透射电镜观察可见细胞内板层小体.[结论]该方法所得细胞产量大、纯度高,是一种可靠的早产鼠AECⅡ的分离纯化培养技术,对体外研究早产儿肺部疾病如高氧肺损伤等有重要意义.
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IL-31对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549表达CCL2的影响
目的：通过体外实验研究IL-31对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549表达趋化因子C-C趋化因子配体2（CCL2）的影响，探讨IL-31在支气管哮喘气道炎症中的作用。方法体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞 A549，用不同浓度（10、50、100 ng/mL）IL-31作用A549细胞、相同浓度（10 ng/mL）IL-31作用A549细胞不同时间（12、24、36 h），收集细胞，提取细胞总RNA，荧光定量PCR法分析趋化因子CCL2 mRNA的表达情况。结果不同浓度IL-31作用于A549细胞后，趋化因子CCL2的表达较正常未处理组明显增加，差异有统计学意义（P＜0.05）；10 ng/mL IL-31作用A549细胞后，不同时间段CCL2的表达均增高，且差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 IL-31作用于肺泡Ⅱ型上皮细胞A549后，趋化因子CCL2的表达明显增高，表明IL-31可能诱导肺组织细胞分泌趋化因子参与哮喘气道炎症过程。
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不同海拔高原地区严重烫伤延迟复苏大鼠肺组织细胞凋亡及基因调控机制
目的:探讨不同海拔的高原地区严重烫伤延迟复苏后肺组织细胞凋亡及其基因调控机制.方法:雄性Wistar大鼠240只,分别在1517 m和3848 m海拔高度随机分为延迟复苏组(DFR, n=50), 即时复苏组(IFR, n= 60) 和对照组(n=10), 建立总体表面积30%的Ⅲ度烫伤模型,分别于伤后1, 6, 12, 24, 72和168 h取材.采用组织病理学、组织芯片技术、原位末端标记(TUNEL)法、免疫组织化学染色与图象分析技术,观察肺组织病理学改变与细胞凋亡及Bcl-2和HIF-1α的表达.结果:随海拔的增加,肺泡壁明显增厚,毛细血管内皮肿胀,肺泡腔中出现水肿液且有炎性细胞浸润,DFR组较IFR组差异有统计学意义(P＜0.05),肺泡上皮细胞凋亡逐渐增多,各海拔高度DFR组均较IFR组变化大(P＜0.05). Bcl-2与HIF-1α的阳性表达均位于肺泡上皮细胞的细胞核或胞浆,其表达强度实验组高于对照组(P＜0.05),随海拔梯度上升Bcl-2表达增强,各海拔高度DFR组Bcl-2表达强度高于IFR组(P＜0.05).细胞凋亡与Bcl-2和HIF-1α表达强度的变化呈正相关(r=0.872,0.945,P＜0.05).结论:高原地区严重烫伤延迟复苏大鼠肺组织细胞凋亡数量随海拔梯度升高而增加,Bcl-2和HIF-1α对细胞凋亡具有调节作用.
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双光气致急性损伤对兔肺泡Ⅱ型细胞形态学的影响
目的: 通过对日本大耳兔双光气肺损伤后肺泡Ⅱ型细胞内磷脂和形态学变化的观察,探讨双光气对肺Ⅱ型细胞的损伤及其机制.方法: 将纯种日本大耳白兔35只随机分为对照组(n=10)、染毒即刻组(n=5)、染毒2 h组(n=5)染毒4 h组(n=5)、染毒8 h组(n=5)、染毒12 h组(n=5);采用浓度-时间法动态式染毒,染毒后按不同时间点对实验动物进行颈总动脉插管放血处死,取肺并用肺灌洗液对支气管肺泡进行灌洗,然后取肺组织作冰冻切片,进行电镜观察,并测定细胞内磷脂含量.结果: 肺Ⅱ型细胞内磷脂含量在染毒即刻开始时较正常组含量下降(P<0.01);在染毒2 h时降到低,之后上升(P<0.05),而在4 h后又下降(P<0.05).染毒终止后,损伤逐渐加重,染毒后2 h磷脂因消耗而降低.染毒后4 h,由于代偿功能启动,磷脂短暂升高,出现致伤性代偿期.从染毒2 h后开始,细胞损伤加重,磷脂合成进入失代偿期,合成逐渐减少.到染毒后8 h,肺泡Ⅱ型细胞内细胞处于致伤性和致死性细胞改变的临界点,细胞出现致死性改变,磷脂合成、分泌停止,细胞出现死亡.结论: 兔在双光气染毒12 h内,肺泡表面活性物质磷脂的改变有差异,随细胞损伤程度发生改变,出现明显中毒分期:即致伤性改变期、致伤性代偿期、致伤性失代偿期、致死性改变期.
